于泓

（山東省平邑縣畜牧獸醫(yī)局保太畜牧獸醫(yī)站 273300）

豬肺疫是由豬多殺性巴氏桿菌引起的一種嚴(yán)重危害生豬養(yǎng)殖業(yè)的惡性傳染病，又被稱為豬巴氏桿菌病或豬出血性敗血癥，民間常稱為“鎖喉風(fēng)”。該病發(fā)病率較高，可達(dá)40%，而死亡率不高僅為5%左右，在我國(guó)呈現(xiàn)散發(fā)性地方性流行，隨著我國(guó)規(guī)?；B(yǎng)殖業(yè)的大規(guī)模發(fā)展，該病的發(fā)病率逐年升高。2020年11月底，某生豬養(yǎng)殖場(chǎng)突然爆發(fā)由豬多殺性巴氏桿菌所引起的豬肺疫疫情，發(fā)病豬以最急性型和急性型病例為主，部分病豬在發(fā)病后24～48h內(nèi)便死亡。經(jīng)獸醫(yī)站專業(yè)工作人員診斷并及時(shí)診斷治療，雖仍然有部分病情嚴(yán)重病豬死亡，其他癥狀較輕病豬均痊愈恢復(fù)，疫情得到有效控制，以下將對(duì)此次疫病的診治過(guò)程進(jìn)行逐一介紹。

1 發(fā)病情況

2020年11月底某個(gè)育有1000頭左右生豬的生豬養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)突然出現(xiàn)6只發(fā)病豬，發(fā)病豬的臨床癥狀主要表現(xiàn)為精神沉郁、體溫升高、呼吸困難且咳嗽，呼吸方式呈腹式或犬坐呼吸。雖飼養(yǎng)人員及時(shí)發(fā)現(xiàn)病情并將患病豬群隔離，同時(shí)對(duì)圈舍及使用器械進(jìn)行緊急消毒。但第二天仍然有13頭生豬表現(xiàn)出類似癥狀，且隔離的病豬開(kāi)始出現(xiàn)死亡。養(yǎng)殖場(chǎng)場(chǎng)主察覺(jué)異常后，及時(shí)與基層獸醫(yī)站的專業(yè)技術(shù)人員聯(lián)系，經(jīng)病原學(xué)檢測(cè)后確定為豬多殺性巴氏桿菌引起的豬肺疫疫病，經(jīng)及時(shí)診斷與治療，19頭發(fā)病豬病死7頭，治愈12頭。

2 臨床表現(xiàn)

最初發(fā)病的病豬主要表現(xiàn)為最急性型的臨床癥狀，患豬突然發(fā)病，呼吸困難，體溫升高可達(dá)41～42℃，食欲飲欲下降，并在發(fā)病后24h內(nèi)死亡。而后續(xù)發(fā)病的病豬主要表現(xiàn)為急性型臨床癥狀，體溫升高，呼吸困難，發(fā)病初期主要表現(xiàn)為干咳，隨著病情的延長(zhǎng)轉(zhuǎn)變?yōu)闈窨?。豬咳嗽時(shí)有明顯的疼痛感，聽(tīng)診時(shí)有啰音和摩擦音，隨著病程的進(jìn)一步發(fā)展，患豬呼吸狀況更加嚴(yán)重，表現(xiàn)為犬式呼吸或腹式呼吸，可視黏膜因缺氧、發(fā)紺。

3 解剖變化

對(duì)病死的生豬進(jìn)行剖檢可發(fā)現(xiàn)最急性型的死亡病豬全身黏膜、漿膜、皮下有散在的點(diǎn)狀出血；全身淋巴結(jié)頜下淋巴結(jié)、頸上淋巴結(jié)、腸系膜淋巴結(jié)等出血、切面呈紅色，肺臟充血水腫；急性型病死豬因病情較長(zhǎng)，炎癥反應(yīng)較為明顯，剖檢可觀察到明顯的纖維素性壞死性肺炎、心包炎和胸膜炎等。全身的黏膜、漿膜及實(shí)質(zhì)器官和淋巴結(jié)等有明顯的敗血癥病變[1]。

4 病原鑒定

無(wú)菌采集發(fā)病死亡生豬的腹腔液或?qū)嵸|(zhì)臟器、淋巴結(jié)組織進(jìn)行觸片檢測(cè)，使用革蘭氏、瑞氏和印度墨汁等染色液進(jìn)行染色鏡檢，革蘭氏染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)大量陰性、大小不一的球桿菌；瑞氏染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩極呈明顯濃染，符合巴氏桿菌的染色特性；印度墨汁染色結(jié)果顯示，短桿菌周圍有明顯的莢膜。將培養(yǎng)物接種于鮮血瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行純化培養(yǎng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該菌在血平板上生長(zhǎng)情況旺盛，形成圓形微隆起的半透明灰白色露珠樣菌落。為了對(duì)病原進(jìn)行進(jìn)一步檢測(cè)和針對(duì)性治療，將純培養(yǎng)物接種于液體培養(yǎng)基，然后進(jìn)行PCR檢測(cè)、生化鑒定和藥敏學(xué)檢測(cè)。

5 生化鑒定

為了對(duì)分離的病原微生物進(jìn)行生化鑒定，將培養(yǎng)好的病原純培養(yǎng)物接種于各類生化培養(yǎng)基，生化鑒定結(jié)果為甘露醇+、葡萄糖+、乳糖+、阿拉伯糖+、山梨醇+、麥芽糖+、木糖+、蔗糖+、果糖+、H2S試驗(yàn)+、MR-、還原性硝酸鹽試驗(yàn)-、明膠液化-，將純培養(yǎng)的生化鑒定結(jié)果與伯杰氏手冊(cè)進(jìn)行對(duì)照，發(fā)現(xiàn)結(jié)果符合巴氏桿菌的生化鑒定結(jié)果，可初步確定本次疫情是由豬巴氏桿菌所引起，但具體亞型還需進(jìn)一步鑒定。

6 分子生物學(xué)檢測(cè)

為了對(duì)巴氏桿菌亞型進(jìn)一步鑒定，利用商品化的細(xì)菌基因組提取試劑盒提取分離培養(yǎng)物的基因組DNA，參考文獻(xiàn)并設(shè)計(jì)合成了針對(duì)性巴氏桿菌16SrRNA的同樣引物和多殺性巴氏桿菌Kmt1基因的鑒定引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。將擴(kuò)增結(jié)果進(jìn)行核酸電泳檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，16SrRNA引物擴(kuò)增出大小為1500bp左右的特異性條帶，kmt1引物擴(kuò)增出450bp大小左右的特異性條帶，將PCR產(chǎn)物送至生物科技公司進(jìn)行測(cè)序并將測(cè)序結(jié)構(gòu)在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行Blast比對(duì)分析發(fā)現(xiàn)，引起此次疫情的病原為多殺性巴氏桿菌，且kmt1基因可以作為快速診斷該病原的特異性基因。

7 藥敏試驗(yàn)

為了能針對(duì)性地選擇治療本次疫病的有效藥物，防止細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生，筆者采用K-B紙片法對(duì)本次分離的病原微生物進(jìn)行藥敏檢測(cè)，藥敏試驗(yàn)采用含5%馬血清的TSA固體培養(yǎng)基，培養(yǎng)時(shí)間、操作方法和判定標(biāo)準(zhǔn)依照于臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)制定的CLSIM100的最新參考標(biāo)準(zhǔn)[2]。藥敏試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，本次分離到的豬多殺性巴氏桿菌分離株對(duì)環(huán)丙沙星、諾氟沙星和氧氟沙星高度敏感，對(duì)多西環(huán)素、紅霉素、阿奇霉素中度敏感，對(duì)包含桿菌肽、氯霉素、多粘菌素、卡那霉素、呋喃妥因、青霉素、四環(huán)素、克林霉素、利福平、頭孢吡虧等多種抗生素耐藥，為一株耐藥譜廣泛的高度耐藥菌株，這一定程度上增大了治療難度，也凸顯出藥敏試驗(yàn)篩選有效藥物的重要性。

8 防治方法

當(dāng)發(fā)現(xiàn)豬群有可疑病例時(shí)，需及時(shí)將疑似發(fā)病生豬和健康生豬進(jìn)行隔離，并對(duì)圈舍、飲水用具、運(yùn)輸工具等相關(guān)物品使用過(guò)氧乙酸或氯制劑進(jìn)行嚴(yán)格消毒，消毒需每天1次，連續(xù)7d，直到疫情不再發(fā)生。本次疫情發(fā)生后飼養(yǎng)人員雖及時(shí)將發(fā)病生豬和健康豬群進(jìn)行隔離，但仍未能阻止疫情的進(jìn)一步蔓延，這可能是由于消毒不徹底或疫情發(fā)現(xiàn)不及時(shí)導(dǎo)致的。

根據(jù)本次疫情的分離菌株的藥敏結(jié)果，使用環(huán)丙沙星、諾氟沙星和氧氟沙星等抗生素對(duì)發(fā)病豬群進(jìn)行聯(lián)合給藥和交替給藥，以防細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性，視發(fā)病豬群的痊愈情況進(jìn)行給藥3～5d，也可以使用多西環(huán)素、紅霉素、阿奇霉素等中度敏感性藥物進(jìn)行輔助治療，同時(shí)應(yīng)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，以提高豬群的基礎(chǔ)免疫力。

對(duì)未死亡的奶牛進(jìn)行緊急免疫豬多殺性巴氏桿菌滅活疫苗，每頭2～3ml。

經(jīng)過(guò)本次合理有效的緊急防控與治療，除最急性型病豬因病程較短，死亡較快全部死亡外，急性型病豬僅死亡1頭，其余病豬全部治愈，有效控制了本次疫情并挽回企業(yè)的損失。

9 體會(huì)

豬肺疫病原豬多殺性巴氏桿菌是一種條件性致病菌，其可以寄生于健康豬群的咽喉等器官內(nèi)，當(dāng)動(dòng)物免疫能力下降時(shí)引起動(dòng)物發(fā)病。本次疫病發(fā)生的最主要原因可能是秋冬季節(jié)氣溫驟變，導(dǎo)致動(dòng)物應(yīng)激，同時(shí)由于飼養(yǎng)管理不當(dāng)，消毒不徹底等多方面原因。所以，飼養(yǎng)人員在平時(shí)飼養(yǎng)時(shí)要加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，保證充足合理的飲食飲水，注意通風(fēng)、保暖、干燥以減少動(dòng)物應(yīng)激[3]。

在對(duì)發(fā)病豬群進(jìn)行治療時(shí)，選擇對(duì)本次分離株高度敏感的環(huán)丙沙星、諾氟沙星和氧氟沙星等抗生素進(jìn)行聯(lián)合給藥和交替給藥，因此，在藥物治療后發(fā)病豬群病情有明顯好轉(zhuǎn)，且大部分病豬痊愈，這提示我們進(jìn)行藥敏檢測(cè)篩選合理藥物的重要性。