李 浪，劉文超，鐘亞楠，賈 萌，霍 旋，閻 巖

（1.銅川職業(yè)技術(shù)學(xué)院 孫思邈醫(yī)學(xué)院，陜西 銅川 727031；2.陜西起源農(nóng)業(yè)科技有限責(zé)任公司，陜西 銅川 727031；3.延安大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，陜西 延安 716099）

丹參是Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根莖，具有祛瘀止痛、活血通經(jīng)以及清心除煩之功效，臨床常用于冠心病、心絞痛等心腦血管疾病的治療[1,2]。研究發(fā)現(xiàn)，丹參的功效主要源于以丹酚酸B為主的水溶性成分和以丹參酮IIA為主的脂溶性成分，故而中國藥典（2015年版）也以丹酚酸B（≥3%）和丹參酮IIA（≥0.25%）作為丹參藥材的質(zhì)量控制指標(biāo)[3]。周銅水等[4]研究發(fā)現(xiàn)，新鮮藥材丹酚酸B含量甚微，干燥后含量明顯增加，認(rèn)為是干燥過程中經(jīng)干燥脅迫誘導(dǎo)的產(chǎn)物，而非栽培期的原始積累成分，盡管丹參酮ⅡA和隱丹參酮等丹參酮類成分鮮丹參含量較高，但在干燥過程中也增加了1倍，故而認(rèn)為它們也是干燥誘導(dǎo)產(chǎn)物。李冰等[5]研究認(rèn)為，新鮮丹參中含有丹酚酸B，同時含有能夠?qū)⒌し铀酈轉(zhuǎn)化的物質(zhì)存在，合理推測認(rèn)為這種能夠?qū)⒌し铀酈轉(zhuǎn)化的物質(zhì)是生物酶，因為生物酶的存在導(dǎo)致鮮丹參丹酚酸B的含量較低，但沒有再進(jìn)行深入研究。筆者對不同產(chǎn)地的鮮丹參進(jìn)行不同方式的處理，以探究鮮丹參是否存在能夠分解丹酚酸B和丹參酮類的生物酶以及生物酶對鮮丹參品質(zhì)的影響。

1 材料

1.1 試劑

鮮丹參3批，購自陜西天士力植物藥有限公司，產(chǎn)地分別為商洛、渭南和銅川，所有藥材均經(jīng)鑒定為唇形科植物丹參（Salviamiltorrhiza Bge.）的干燥根和根莖；丹參酮ⅡA對照品（批號:110766-201721）以及丹酚酸B對照品（批號:111562-201716）均購自中國藥品生物制品檢定所；乙腈、磷酸均為色譜純，試驗用水均為純凈水，乙醇、甲醇及鹽酸等為分析純。

1.2 儀器

Waterse 2695-2998 液相色譜儀（美國沃特世科技有限公司），離心機（上海安亭科學(xué)儀器廠），可見紫外檢測器（青島埃侖通用科技有限公司），電子天平（深圳市恒志?？萍加邢薰荆?/p>

2 實驗方法

2.1 對照品溶液配制方法

丹參酮類對照品溶液配制:精密稱取丹參酮IIA對照品20 mg，置于10 ml容量瓶中，加無水甲醇定容至刻度混勻（濃度2 mg/ml），移液槍吸取1 ml配置好的母液，置于50 ml容量瓶中，再加無水甲醇定容至刻度混勻（濃度0.02 mg/ml），配制好的對照品放入棕色瓶，4℃?zhèn)溆谩５し铀酈對照品溶液配制:精密稱取丹酚酸B對照品10 mg，置于50 ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，配制好的對照品放入棕色瓶，4℃冰箱備用。

2.2 供試品溶液制備方法

稱取3份商洛鮮丹參，每份10 g，均先切片后再采用不同的處理方法進(jìn)行處理。第一種處理方式:放入燒杯，加蒸餾水100 ml，靜置30 min，攪碎，攪勻，離心，取上清液作為供試品溶液；第二種處理方式:放入盛有100 ml煮沸的蒸餾水燒杯中，水浴30 min，晾至室溫，攪碎，攪勻，離心，取上清液作為供試品溶液；第三種處理方式:放入至盛有甲醇100 ml的燒杯中，靜置30 min，攪碎后，攪勻，離心，取上清液作為供試品溶液。渭南和銅川產(chǎn)地的鮮丹參采取相同的處理方式對鮮丹參進(jìn)行處理，總共獲得供試樣品9份，做好標(biāo)記，4℃冰箱備用。

2.3 色譜條件

色譜柱:Waters C18（250 mm× 4.6 mm，5μm）；柱溫:27℃。丹參酮ⅡA測定，流動相乙腈-0.1%磷酸溶液（22∶78）；檢測波長270 nm，進(jìn)樣量:20 μL，流速1 ml/min，理論板數(shù)按丹參酮ⅡA峰計算應(yīng)不低于2 000。丹酚酸B測定，流動相甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59）；檢測波長288 nm，進(jìn)樣量:20 μL，流速1 mL/min，理論塔板數(shù)按丹酚酸B峰計算，應(yīng)不低于4 000。

2.4 樣品含量測定

取制備好的供試品溶液，依據(jù)設(shè)定好的檢測條件對不同產(chǎn)地丹酚酸B和丹參酮IIA質(zhì)量分?jǐn)?shù)進(jìn)行檢測，用外標(biāo)法計算。

2.5 其他

系統(tǒng)適用性試驗、精密度試驗、重復(fù)性試驗、穩(wěn)定性試驗、回收率試驗以及線性考察等方法參照《中國藥典》2015年版四部丹參中丹參酮ⅡA和丹酚酸B含量測定方法進(jìn)行。

3 結(jié)果與分析

3.1 不同產(chǎn)地丹酚酸B和丹參酮IIA含量測定

經(jīng)檢測，不同產(chǎn)地丹參丹酚酸B和丹參酮IIA的含量不同，總體而言銅川丹參品質(zhì)最優(yōu)，丹酚酸B和丹參酮IIA均顯著優(yōu)于渭南，渭南的丹參品質(zhì)優(yōu)于商洛，它們兩者之間比較具有顯著差異（均P＜0.05），詳見表1。

表1 不同產(chǎn)地丹酚酸B和丹參酮IIA質(zhì)量分?jǐn)?shù)測定結(jié)果（n=3）

3.2 不同處理方式對丹酚酸B和丹參酮IIA含量的影響

盡管產(chǎn)地不同，所有經(jīng)過立即處理的鮮丹參丹酚酸B和丹參酮IIA含量均高于經(jīng)自然晾曬后變干的鮮丹參，除第一種蒸餾水處理的鮮丹參丹酚酸B和丹參酮IIA含量與自然晾曬無明顯差異外，其余2種處理方式均能夠顯著增加鮮丹參丹酚酸B和丹參酮IIA含量（均P＜0.05）。經(jīng)切片后沸水煮沸后的第二種處理方式丹酚酸B含量高于另外三種處理方式，總體而言第二種處理方式高于第三種處理方式，第三種處理方式顯著高于第一種處理方式。數(shù)據(jù)詳見表2。

表2 不同處理方式對丹酚酸B和丹參酮IIA含量的影響

4 討論

經(jīng)HPLC檢測，銅川產(chǎn)地丹酚酸B和丹參酮IIA含量均最高，說明產(chǎn)地不同品質(zhì)存在明顯差異，可能與當(dāng)?shù)氐臍夂颉⑼寥赖纫蛩卮嬖诿芮嘘P(guān)系。與此同時，研究發(fā)現(xiàn)，通過不同處理方式對鮮丹參進(jìn)行處理，不同產(chǎn)地丹酚酸B和丹參酮IIA含量幾乎存在相同的規(guī)律，即相較于用蒸餾水直接水提，甲醇提和沸水提丹酚酸B和丹參酮IIA明顯較高，認(rèn)為是經(jīng)沸水和甲醇處理后，存在于細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞漿之間的能夠?qū)⒌し铀酈轉(zhuǎn)化為其他物質(zhì)的生物活性酶活性降低，分解丹酚酸B的能力降低所致[6]。相較于甲醇，沸水對生物酶活性的破壞更為徹底，故而經(jīng)沸水預(yù)處理后的鮮丹參丹酚酸B含量更高，這一現(xiàn)象同樣體現(xiàn)了丹參酮ⅡA的含量變化，故而推測鮮丹參體內(nèi)是否也存在一種影響丹參酮ⅡA穩(wěn)定性的物質(zhì)，這需要進(jìn)一步的研究進(jìn)行證明。