索 娟，趙 元，盧錦華，陳劍平*

（1.深圳市中醫(yī)院，廣州中醫(yī)藥大學(xué)第四臨床醫(yī)學(xué)院，廣東 518033；2.深圳南粵藥業(yè)有限公司，廣東 518110）

慢性腎臟?。╟ronic kidney disease,CKD）是各種因素引起的慢性疾病，且其腎臟結(jié)構(gòu)和功能障礙持續(xù)3個(gè)月以上［1］。目前西醫(yī)對(duì)慢性腎臟病的治療主要是控制原發(fā)病、采取對(duì)癥處理及減慢其進(jìn)展速度等。盡管現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)該病發(fā)病機(jī)制研究日益深入，但其臨床治療尚未取得突破性進(jìn)展。慢性腎臟病屬中醫(yī)“虛勞”、“關(guān)格”、“溺毒”等的范疇，其病機(jī)以脾腎虛損為本，水濕、濕熱、濁毒、瘀血為標(biāo)，虛實(shí)夾雜。脾陽虧損、腎陽衰微，陽不化陰、腎陰耗竭，進(jìn)而累及心、肝、胃等多個(gè)臟器，其病位主要在脾腎［1］?！端貑枴ぶ琳嬉笳撈罚骸爸T濕腫滿，皆屬于脾”，蓋脾主運(yùn)化水液。如其健運(yùn)失常，津液不得正常流通，則留聚為濕，濕積而成痰。腎主水，腎氣不足，膀胱氣化不利，水液排泄障礙，亦可聚水成飲，飲凝成痰，終致腎病的發(fā)生發(fā)展，由此可見，脾腎二臟在痰飲的形成占有舉足輕重的地位，故曰：“脾腎相關(guān)”，因此，健脾益腎法可用于臨床治療CKD。

健脾益腎方由“玉屏風(fēng)散”、“四精丸”、“大黃甘草湯”加減而成，包括黃芪、山藥（懷）、丹參、白術(shù)（生）、肉蓯蓉、豆蔻、大黃（生）、甘草（炙）8味中藥，具有健脾益腎、通腑瀉濁之功。方中黃芪、山藥、生白術(shù)益氣健脾祛濕，白豆蔻溫中化濕行氣，丹參活血化瘀，大黃通腑瀉濁，肉蓯蓉補(bǔ)腎壯陽、潤腸通便，甘草調(diào)和諸藥。健脾益腎方是本院的臨床協(xié)定處方，該方加減用于治療慢性腎臟病療效確切，且已在臨床運(yùn)用多年［2-5］。臨床研究表明，健脾益腎方可顯著提高血液白蛋白含量，顯著降低血液中的尿酸、肌酐、尿素以及尿液中的蛋白質(zhì)含量［2，4］；另有研究表明其作用可能與通過NF-κB通路抑制炎癥反應(yīng)［6］、促進(jìn)線粒體生成、融合，減少線粒體自噬及裂變，改善線粒體的質(zhì)量控制網(wǎng)絡(luò)［7］等有關(guān)。但具體的活性物質(zhì)及其作用機(jī)制仍不明確。因此，探討其關(guān)鍵活性成分及其作用機(jī)制對(duì)臨床應(yīng)用及其進(jìn)一步的開發(fā)都具有積極意義。

1 材料與方法

1.1 健脾益腎方有效活性成分的篩選和靶點(diǎn)的收集 在中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫和分析平臺(tái)（https://tcmspw.com/tcmsp.php，TCMSP）和中醫(yī)藥整合藥理學(xué)研究平臺(tái)（Integrative Pharmacology-based Research Platform of Traditional Chinese Medicine,TCMIP）v2.0檢索健脾益腎方中黃芪、山藥、丹參、白術(shù)、肉蓯蓉、豆蔻、大黃、甘草的化學(xué)成分，篩選條件為口服生物利用度（OB）≥30%且類藥性（DL）≥0.18；在TCMSP及其Swiss Target Prediction（http://www.swisstargetprediction.ch）網(wǎng)站查詢這些活性成分所對(duì)應(yīng)的候選靶標(biāo)。

1.2 慢性腎臟病疾病靶點(diǎn)的篩選 在人類基因數(shù)據(jù)庫（GeneCards，https://www.genecards.org/）、《人類孟德爾 遺 傳》數(shù) 據(jù) 庫（OMIM，https://www.omim.org/）、Drugbank（https://go.drugbank.com/）、療效藥靶數(shù)據(jù)庫（TTD，http://db.idrblab.net/ttd/）中檢索慢性腎臟病所對(duì)應(yīng)的靶標(biāo)，關(guān)鍵詞為Chronic kidney disease，將各個(gè)數(shù)據(jù)庫所得靶標(biāo)匯總?cè)ブ?，得到慢性腎臟病的疾病靶標(biāo)。

1.3 健脾益腎方治療慢性腎臟病的蛋白互作網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 在疾病靶點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)化數(shù)據(jù)庫Uniprot中，將蛋白種屬設(shè)置為“Homo sapiens（Human）”，獲取健脾益腎方及其慢性腎臟病所有靶點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)基因名。取健脾益腎方與慢性腎臟病候選靶標(biāo)的交集，即為健脾益腎方治療慢性腎臟病的靶標(biāo)。將上述獲得的靶標(biāo)錄入String數(shù)據(jù)庫（https://string-db.org/），獲得基因間互作關(guān)系，隨后，將基因關(guān)系導(dǎo)入Cytoscape 3.7.1，構(gòu)建蛋白互作網(wǎng)絡(luò)。通過Network Analyzer插件選擇節(jié)點(diǎn)的拓?fù)涮卣髦抵蟹隙戎行男裕―egree Centrality）值、接近中心性（Closeness Centrality）值及其中間中心性（Between Centrality）值均大于各自均值的節(jié)點(diǎn)為關(guān)鍵靶標(biāo)。

1.4 GO富集分析和KEGG通路富集分析 將“1.3”中得到的關(guān)鍵靶標(biāo)通過David數(shù)據(jù)庫進(jìn)行GO富集分析，并采用R語言進(jìn)行KEGG通路富集分析，篩選具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的條目（P＜0.05）。

1.5 “中藥-關(guān)鍵活性成分-核心靶標(biāo)-信號(hào)通路”可視化網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 將健脾益腎方各味藥的候選化合物、關(guān)鍵靶標(biāo)、相關(guān)通路信息導(dǎo)入Cytoscape 3.7.1軟件，構(gòu)建“中藥-關(guān)鍵活性成分-核心靶標(biāo)-信號(hào)通路”網(wǎng)絡(luò)［8］，采用Cytoscape插件cytoHubba篩選大于平均自由度到最大自由度的節(jié)點(diǎn)作為核心網(wǎng)絡(luò)節(jié)點(diǎn)，以探討健脾益腎方的整體藥理作用。

1.6 關(guān)鍵活性成分與核心靶標(biāo)的分子對(duì)接 選擇核心網(wǎng)絡(luò)節(jié)點(diǎn)中主要活性成分與關(guān)鍵靶標(biāo)進(jìn)行分子對(duì)接。在PDB數(shù)據(jù)庫尋找關(guān)鍵靶標(biāo)的PDB文件，在TCMSP數(shù)據(jù)庫下載活性成分的mol2文件，利用Auto Dock Vina軟件進(jìn)行分子對(duì)接。

2 結(jié)果

2.1 健脾益腎方有效活性成分篩選及其靶標(biāo)收集 健脾益腎方有效活性成分共篩選得到221個(gè)活性成分，其中黃芪12個(gè)，山藥16個(gè)，丹參64個(gè)，白術(shù)6個(gè)，肉蓯蓉4個(gè)，豆蔻9個(gè)，大黃15個(gè)，甘草85個(gè)，黃芪、甘草共有活性成分5個(gè)，黃芪、白術(shù)共有活性成分1個(gè)，黃芪、豆蔻、甘草共有活性成分1個(gè)，黃芪、肉蓯蓉、甘草、豆蔻共有活性成分1個(gè)，丹參、豆蔻共有活性成分1個(gè)，肉蓯蓉、大黃共有活性成分1個(gè)。TCMSP網(wǎng)站中查詢得到藥物靶標(biāo)254個(gè)，Swiss Target Prediction共查詢得到藥物靶標(biāo)154個(gè)，剔除重復(fù)靶標(biāo)，共查詢得到藥物候選靶標(biāo)254個(gè)。

2.2 慢性腎臟病疾病靶點(diǎn)的篩選 在GeneCards數(shù)據(jù)庫中共檢索得到14 131個(gè)候選靶標(biāo)、OMIM數(shù)據(jù)庫145個(gè)候選靶標(biāo)、Drugbank數(shù)據(jù)庫178個(gè)靶標(biāo)、TTD數(shù)據(jù)庫26個(gè)候選靶標(biāo)，將各個(gè)數(shù)據(jù)庫所得靶標(biāo)匯總并去除重復(fù)靶標(biāo)，共檢索慢性腎臟病所對(duì)應(yīng)的候選靶標(biāo)14167個(gè)。

2.3 健脾益腎方與慢性腎臟病“藥物-疾病”交集靶點(diǎn)的篩選及蛋白互作網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建 健脾益腎方與慢性腎臟病共249個(gè)候選靶標(biāo)，將其導(dǎo)入String數(shù)據(jù)庫中，設(shè)置minimum required interaction score為0.900，去除與其他靶標(biāo)無關(guān)聯(lián)的孤立靶標(biāo)共40個(gè)，將209個(gè)蛋白互作信息導(dǎo)入cytoscape 3.7.1中，其相互作用可視化圖如圖1所示，其中靶標(biāo)的節(jié)點(diǎn)面積越大代表度值越大；靶標(biāo)之間的邊線越粗代表介數(shù)中心性（betweenness）越大。前30位基因之間的作用頻次統(tǒng)計(jì)見圖2。其中蛋白頻次前5位的有酶結(jié)合基因：淀粉樣β前體蛋白（APP）、非受體酪氨酸激酶（SRC）、AKT絲氨酸/蘇氨酸激酶1（AKT1）、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活子3（STAT3），凋亡過程的負(fù)調(diào)控基因：磷酸肌醇-3-激酶調(diào)節(jié)亞基1（PIK3R1）。說明這些基因在健脾益腎方治療慢性腎臟病中發(fā)揮著重要作用。

圖2 健脾益腎方與慢性腎臟病共有靶標(biāo)相互作用頻次前30位靶標(biāo)

2.4 GO富集分析與KEGG信號(hào)通路富集分析 將圖1中的共有靶標(biāo)網(wǎng)絡(luò)通過拓?fù)涮卣髦涤?jì)算，篩選大于度中心性值、接近中心性值及中間中心性值均值的節(jié)點(diǎn)為關(guān)鍵靶標(biāo)，共32個(gè)，包括ESR1、APP、SRC、STAT3、EGFR、PIK3R1、PPARG、AKT1、NCOA1、RELA、PPARA、FOS、CASP3、CDK1、RB1、MAPK8、CCND1、APOB、PSMD3、CDK5、PRKCA、IL6、PCNA、NCOA2、MDM2、F2、VEGFA、HIF1A、NR3C1、AR、CASP8、PTK2。32個(gè)關(guān)鍵蛋白靶標(biāo)的相互作用關(guān)系見圖3。將“2.3”中得到的32個(gè)關(guān)鍵蛋白靶標(biāo)通過David 6.8數(shù)據(jù)庫進(jìn)行GO功能注釋分析，結(jié)果顯示共獲得具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）的413個(gè)生物學(xué)過程（BP）、61個(gè)細(xì)胞組分（CC）、128個(gè)分子功能（MF）。說明健脾益腎方主要通過調(diào)控對(duì)藥物的反應(yīng)、凋亡過程的負(fù)調(diào)控、老化、對(duì)乙醇的反應(yīng)、氧化還原過程、細(xì)胞增殖、蛋白質(zhì)磷酸化、蛋白質(zhì)自磷酸化、一碳代謝過程及碳酸氫鹽運(yùn)輸?shù)壬飳W(xué)過程，作用于胞質(zhì)溶膠、質(zhì)膜、核質(zhì)、細(xì)胞外泌體、細(xì)胞外空間、蛋白質(zhì)復(fù)合物、突觸后膜、不對(duì)稱突觸、膜筏、基底外側(cè)質(zhì)膜等細(xì)胞組分，影響酶結(jié)合、碳酸鹽脫水酶活性、藥物結(jié)合、RNA聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄因子活性，配體激活的序列特異性DNA結(jié)合、蛋白激酶活性、類固醇激素受體活性、蛋白激酶結(jié)合、相同的蛋白質(zhì)結(jié)合、氧化還原酶活性、蛋白質(zhì)結(jié)合等分子功能。詳見圖4～6。將“2.3”中得到的32個(gè)關(guān)鍵蛋白靶標(biāo)經(jīng)信號(hào)通路富集最終得到151條調(diào)控通路，其中與慢性腎臟病相關(guān)的前10位信號(hào)通路分別為VEGF信號(hào)通路、胰島素抵抗、PI3K-Akt信號(hào)通路、TNF信號(hào)通路、FoxO信號(hào)通路、HIF-1信號(hào)通路、細(xì)胞凋亡、ErbB信號(hào)通路、甲狀腺激素信號(hào)通路、IL-17信號(hào)通路。見圖7。

圖1 健脾益腎方與慢性腎臟病共有靶標(biāo)的蛋白互作網(wǎng)絡(luò)圖

圖3 健脾益腎方治療慢性腎臟病的核心靶標(biāo)

圖4 健脾益腎方治療慢性腎臟病潛在靶標(biāo)生物過程的GO分析

圖7 健脾益腎方治療慢性腎臟病排名前10位的KEGG信號(hào)通路

2.5“中藥-關(guān)鍵活性成分-核心靶點(diǎn)-信號(hào)通路”可視化網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建 為了更直觀地觀察健脾益腎方治療慢性腎臟病的相互作用關(guān)系，本研究在Cytoscape軟件中構(gòu)建“中藥-關(guān)鍵活性成分-核心靶點(diǎn)-信號(hào)通路”網(wǎng)絡(luò)圖，見圖8，圖中箭頭狀節(jié)點(diǎn)代表藥物成分，圓形節(jié)點(diǎn)代表靶點(diǎn)，菱形節(jié)點(diǎn)代表信號(hào)通路，三角形節(jié)點(diǎn)代表中藥藥味。圖中共502個(gè)節(jié)點(diǎn)，平均自由度為12.570，度值最大的靶標(biāo)為ESR1，度值最大的化合物為槲皮素（MOL000098，quercetin）。取前10位自由度的節(jié)點(diǎn)作為核心網(wǎng)絡(luò)，依次為槲皮素、山柰酚（MOL000422，kaempferol）、木犀草素（MOL000006，luteolin）、雌激素受體1（ESR1）、雄激素受體（AR）、前列腺素-內(nèi)過氧化物合酶1（PTGS1）、過氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARG）、核受體共激活劑2（NCOA2）、甘 草。結(jié) 果 說 明 基 因ESR1、AR、PTGS1、PPARG、NCOA2與健脾益腎方的活性成分關(guān)聯(lián)性最強(qiáng)。文獻(xiàn)研究表明，選擇性雌激素調(diào)節(jié)劑雷洛昔芬可調(diào)控ESR1表達(dá)［9］，減輕腎臟纖維化［10］，減慢血清肌酐的增加速度，并顯著減慢了腎小球?yàn)V過率的減少［11］。血管鈣化是CKD的常見并發(fā)癥，是一種炎癥性疾病；Pang H等［12］的研究表明，巨噬細(xì)胞中沉默AR可抑制無機(jī)磷酸鹽誘導(dǎo)的人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞鈣化。Verzola D等［13］研究報(bào)道，在睪酮存在時(shí)，AR調(diào)控JNK/c-Jun信號(hào)通路的激活，誘導(dǎo)近端小管細(xì)胞凋亡，這可能是增加近曲小管細(xì)胞凋亡易感性的關(guān)鍵細(xì)胞事件。代謝綜合征患者中PTGS1水平與CKD患病率有關(guān)［14］；高血壓是CKD的危險(xiǎn)因素，而PTGS1和PPARG均為高血壓患者中CKD的易感基因［15］。核受體共激活劑可顯著增強(qiáng)核受體的轉(zhuǎn)錄活性，Zhou T等［16］的研究表明CKD患者血清中NCOA2與NCOA1、NCOA3、缺氧誘導(dǎo)因子-1α及血管內(nèi)皮生長因子正相關(guān)，而VEGF是CKD疾病的危險(xiǎn)因素。以上說明經(jīng)過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)篩選出的關(guān)鍵靶點(diǎn)與CKD的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切；另外，八味藥中甘草與其他藥味的聯(lián)系最為緊密，也從側(cè)面印證了甘草調(diào)和諸藥的功效。見圖9。

圖8 健脾益腎方治療慢性腎臟病“中藥-關(guān)鍵活性成分-核心靶點(diǎn)-信號(hào)通路”可視化網(wǎng)絡(luò)圖

圖9 健脾益腎方治療慢性腎臟病核心網(wǎng)絡(luò)圖

圖5 健脾益腎方治療慢性腎臟病潛在靶標(biāo)細(xì)胞組分的GO分析

圖6 健脾益腎方治療慢性腎臟病潛在靶標(biāo)分子功能的GO分析

2.6 關(guān)鍵活性成分與核心靶標(biāo)的分子對(duì)接驗(yàn)證 將“2.5”項(xiàng)下所得的活性成分與關(guān)鍵靶標(biāo)進(jìn)行分子對(duì)接驗(yàn)證，對(duì)文中所得的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行驗(yàn)證。配體與受體結(jié)合能越低，結(jié)合可能性越大越穩(wěn)定。見圖10和表1。由表1可知，木犀草素和AR得分最高，為-8.5；得分最低的是山柰酚與ESR1，得分-6.9；對(duì)接結(jié)合能均小于-5.0 kcal/mol［17,18］，說明本文篩選出的活性成分與關(guān)鍵靶標(biāo)的結(jié)合活性較好，篩選出的活性成分可能是健脾益腎方發(fā)揮抗慢性腎臟病的關(guān)鍵活性成分，健脾益腎方可能通過篩選出的關(guān)鍵靶標(biāo)發(fā)揮治療慢性腎臟病的作用。

表1 關(guān)鍵活性成分與關(guān)鍵靶標(biāo)的結(jié)合能

圖10 關(guān)鍵活性成分與關(guān)鍵靶標(biāo)的分子對(duì)接三維圖

3 討論

中藥復(fù)方是中醫(yī)臨床治療疾病的首選方式，但由于其活性成分復(fù)雜、作用靶點(diǎn)數(shù)目較多及其中藥系統(tǒng)調(diào)控的特點(diǎn)，傳統(tǒng)單一的研究思路并不適用，因此需要尋求合適的研究方法闡釋其作用機(jī)制。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)就是在這樣的背景下應(yīng)運(yùn)而生，其通過數(shù)據(jù)挖掘技術(shù)將中藥活性成分及其作用靶點(diǎn)、疾病發(fā)生發(fā)展的靶標(biāo)、生物信息學(xué)等構(gòu)建“中藥-關(guān)鍵活性成分-核心靶標(biāo)-信號(hào)通路”網(wǎng)絡(luò)。本研究即是探索健脾益腎方與慢性腎臟病的關(guān)聯(lián)性網(wǎng)絡(luò)，以期全面細(xì)致地預(yù)測(cè)和發(fā)現(xiàn)健脾益腎方治療慢性腎臟病的作用機(jī)制。

本研究通過網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫的篩選，共得到221個(gè)活性成分，其中122個(gè)活性成分可能與慢性腎臟病有關(guān)，其中槲皮素、山柰酚、木犀草素可能發(fā)揮關(guān)鍵性作用。研究表明槲皮素可通過降低血糖、抗氧化應(yīng)激、抗炎及抑制腎臟纖維化等機(jī)制對(duì)腎臟起保護(hù)作用［19,20］。山柰酚通過阻斷轉(zhuǎn)化生長因子和炎性細(xì)胞因子的激活，進(jìn)而降解腎臟組織中細(xì)胞外基質(zhì)積聚而改善腎臟纖維化疾?。?1］。木犀草素可通過激活抗氧化蛋白及抗氧化酶的表達(dá)，清除ROS，反饋性抑制NF-KB通路，保護(hù)腎臟系膜細(xì)胞［22］。

健脾益腎方與慢性腎臟病的249個(gè)共有靶標(biāo)中，共篩選出大于度中心性值、接近中心性值及中間中心性值均值的節(jié)點(diǎn)為關(guān)鍵靶標(biāo)32個(gè)，包括ESR1、APP、SRC等。對(duì)關(guān)鍵靶標(biāo)進(jìn)行GO功能分析及KEGG信號(hào)通路富集分析，得出了健脾益腎方治療慢性腎臟病可能的生物過程、調(diào)控的分子功能、作用的細(xì)胞組分及調(diào)控的信號(hào)通路信息；根據(jù)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的分析結(jié)果及現(xiàn)有文獻(xiàn)研究成果，健脾益腎方治療慢性腎臟病可能與改善組織局部血供（HIF-1 signaling pathway）、促進(jìn)血管生成（VEGF signaling pathway）、改善氧化應(yīng)激狀態(tài)（FoxO signaling pathway）、調(diào)節(jié)慢性炎癥（IL-17 signaling pathway、TNF signaling pathway）、改善甲狀腺激素水平（thyroid hormone signaling pathway）、改善慢性腎臟病的胰島素抵抗（insulin resistance、PI3KAkt signaling pathway）、抑制慢性腎臟病細(xì)胞凋亡（apoptosis、ErbB signaling pathway）有關(guān)。例如，減少血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）的表達(dá)在慢性腎臟疾病中起著至關(guān)重要的作用，HIF-1α可能參與慢性腎臟病的進(jìn)展，可作為評(píng)價(jià)CKD的指標(biāo)之一［23］。He Y等［24］的研究表明，姜黃素通過阻斷mTOR/HIF-1α/VEGF信號(hào)通路的激活而具有腎臟保護(hù)作用。CKD主要致病因素白蛋白通過改變?nèi)毖跽T導(dǎo)因子（HIF）/缺氧反應(yīng)元件途徑抑制血管內(nèi)皮生長因子［25］。研究表明，腎纖維化是具有各種病因的進(jìn)行性慢性腎臟疾病的常見病理標(biāo)志，抗缺氧作用的新有效療法可減輕腎臟纖維化并抑制CKD的進(jìn)展［26］。氧化應(yīng)激的增加和抗氧化能力的下降亦與腎功能減退相關(guān)［27］。激活FoxO信號(hào)通路可抑制腎間質(zhì)纖維化和氧化應(yīng)激［28］。Mehrotra P等［29］的研究表明，IL-17可能通過募集中性粒細(xì)胞參與AKI誘導(dǎo)的纖維化的發(fā)病。王妮妮［30］研究表明，慢性腎臟病是甲狀腺功能減退的高危因素，甲狀腺功能減退又可加速腎臟病變進(jìn)展、增加CKD患者全因死亡率和心血管疾病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。研究亦表明，慢性腎臟病患者常出現(xiàn)胰島素抵抗，胰島素抵抗既是CKD致病因素，又是其進(jìn)展的機(jī)制之一［31］，可導(dǎo)致腎臟疾病的進(jìn)展及代謝紊亂，因此改善胰島素抵抗可能是降低慢性腎臟病患者心血管病死率的重要治療靶點(diǎn)［32］。

本文建立了“中藥-關(guān)鍵活性成分-核心靶標(biāo)-信號(hào)通路”相互作用網(wǎng)絡(luò)圖，并篩選了健脾益腎方治療慢性腎臟病核心網(wǎng)絡(luò)圖，結(jié)果顯示活性成分槲皮素、山柰酚、木犀草素及關(guān)鍵靶標(biāo)ESR1、AR、PTGS1、PPARG、NCOA2在核心網(wǎng)絡(luò)中發(fā)揮重要作用；而且分子對(duì)接結(jié)果同樣顯示這些活性成分與關(guān)鍵靶標(biāo)的對(duì)接得分均小于-5.0 kcal/mol，對(duì)接活性良好。說明本研究通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)篩選出的活性成分可以作為健脾益腎方治療慢性腎臟病的關(guān)鍵活性成分，亦說明了中藥復(fù)方治療疾病時(shí)，多成分作用于多靶點(diǎn)的系統(tǒng)調(diào)控特點(diǎn)。

綜上所述，本研究通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法分析了健脾益腎方治療慢性腎臟病可能的作用靶標(biāo)及途徑，建立了“中藥-關(guān)鍵活性成分-核心靶標(biāo)-信號(hào)通路”相互作用網(wǎng)絡(luò)圖，揭示了健脾益腎方治療慢性腎臟病的多維調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，說明健脾益腎方中多種活性成分具有調(diào)節(jié)慢性腎臟病的功能，且可通過多種信號(hào)通路發(fā)揮作用，最終達(dá)到調(diào)節(jié)慢性腎臟病的作用，為健脾益腎方的進(jìn)一步開發(fā)利用提供參考。本研究是基于網(wǎng)絡(luò)大數(shù)據(jù)所做的預(yù)測(cè)，研究結(jié)果還需要通過進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究加以驗(yàn)證。