高寶龍，范春剛，王 震，鄭瑋麗，王妙姝,2，楊 賽

（河北新希望天香乳業(yè)有限公司，河北保定 072150；2.河北省益生功能性乳制品技術(shù)創(chuàng)新中心，河北保定 072150）

黃曲霉毒素是由真菌類生物所產(chǎn)生的一種代謝產(chǎn)物，在人們生活中比較常見[1]。人們食用含有黃曲霉毒素的食物，毒素便會在身體中逐漸積累，進(jìn)而威脅人體健康，其主要體現(xiàn)在：①對人類以及動物的組織器官產(chǎn)生損傷，進(jìn)而抑制免疫功能；②對人類以及動物的肝、胃、腎等致畸、致癌、致突變而引發(fā)癌的發(fā)生等；③對于嬰幼兒的健康也會產(chǎn)生影響，嬰幼兒的一些解毒器官尚未發(fā)育完善，如果食用的乳汁或奶粉等食品中含有黃曲霉素殘留，將嚴(yán)重威脅嬰幼兒健康[2]。

黃曲霉毒素M1有時(shí)也在原料奶中出現(xiàn)，但是在牛奶中的含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于其他食品中的含量，如果不及時(shí)排查原因降低其風(fēng)險(xiǎn)也會對消費(fèi)者造成一定潛在威脅。牛奶中黃曲霉毒素的產(chǎn)生主要為奶牛采食發(fā)霉變質(zhì)飼料（霉變飼料黃曲霉毒素以黃曲霉毒素B1形式存在）后，體內(nèi)的飼料會發(fā)生轉(zhuǎn)化，黃曲霉毒素由B1形式轉(zhuǎn)化為另一種黃曲霉毒素M1形式并隨奶牛產(chǎn)奶而進(jìn)入牛奶及奶制品當(dāng)中[3]。因此在奶牛飼喂過程中需要保證飼料的質(zhì)量及品質(zhì)，對消費(fèi)者負(fù)責(zé)。

隨著人們生活水平的提高，牛奶在人們的飲食結(jié)構(gòu)中占據(jù)非常重要的地位，人們對于健康的重視度也越來越高，因此為了有效保證牛奶的食品安全，必須建立起有效的黃曲霉毒素M1殘留檢測方法，從國家標(biāo)準(zhǔn)來看，牛奶中黃曲霉毒素M1的最大允許量為0.5 μg/kg，而河北新希望天香乳業(yè)有限公司企業(yè)內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)牛奶中黃曲霉毒素M1的最大允許量為0.2 μg/kg[4]。目前有關(guān)牛奶中黃曲霉毒素M1殘留檢測技術(shù)有金標(biāo)試紙法、原位衍生熒光法、液相色譜法電子鼻法和光學(xué)免疫傳感器法。

1 牛奶中黃曲霉毒素M1殘留的檢測技術(shù)

1.1 金標(biāo)試紙法

金標(biāo)試紙法是一種快速檢測方法，其原理是基于抗體抗原結(jié)合反應(yīng)，因其檢測方法快速而受到企業(yè)的青睞，也成為企業(yè)檢測牛奶中黃曲霉毒素M1殘留檢測的主要技術(shù)之一。企業(yè)使用的試紙條應(yīng)用競爭抑制免疫層析的原理，只需在商品化的檢驗(yàn)試劑盒上觀察結(jié)果，操作簡便、快速，并且不受場地條件的約束，操作過程中不需其他儀器設(shè)備的輔助，已成為一種應(yīng)用最為廣泛和發(fā)展最為成熟的生物檢測與分析方法，同時(shí)也在研究制造人工抗體，提升金標(biāo)試紙法的靈敏性和穩(wěn)定性，進(jìn)一步擴(kuò)大金標(biāo)試紙法在檢測牛奶中黃曲霉毒素M1殘留中的應(yīng)用。

1.2 原位衍生熒光法

黃曲霉毒素具有熒光特性，根據(jù)其熒光特性在365 nm波長紫外光激發(fā)下，G族黃曲霉毒素在450 nm波長處為黃綠色熒光，B族黃曲霉毒素發(fā)射波長425 nm處為藍(lán)色熒光，這是檢測黃曲霉毒素的基本原理之一。但是此方法需要大型精密儀器，成本相對較高，同時(shí)也需要專業(yè)性要求高的檢測人員。由于檢測時(shí)間相對較長，很難滿足現(xiàn)場快速檢測需求[5]。利用黃曲霉毒素基線平穩(wěn)、熒光信號強(qiáng)的特性，在儀器內(nèi)對黃曲霉毒素進(jìn)行原位光化學(xué)衍生，增強(qiáng)黃曲霉毒素的熒光效應(yīng)，提高檢測靈敏度，將光化學(xué)衍生模塊與檢測器集成于一體，儀器檢測時(shí)間為10 s，縮短了檢測時(shí)間，簡化了檢測步驟，大大提高了檢測效率。

1.3 液相色譜法

液相色譜法具有相對準(zhǔn)確性好、靈敏度高的特性，因而得到業(yè)內(nèi)的廣泛認(rèn)可。液相色譜法根據(jù)溶解度及吸附作用的不同，采用高壓輸液系統(tǒng)，將不同極性的緩沖液及溶劑泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)分離，將目標(biāo)化合物從被檢測的樣品中完全提取出來，進(jìn)而利用熒光檢測計(jì)在一定的波長條件下對食品中黃曲霉毒素的含量進(jìn)行測定，以達(dá)到檢測黃曲霉毒素殘留的目的。根據(jù)前處理的不同，基本分為液液萃取、多功能凈化、C18硅膠柱純化、免疫親和柱純化。液相色譜法可以做到高提取率，高純化，因除去了內(nèi)源干擾，可以發(fā)揮出色譜準(zhǔn)確定性定量的優(yōu)勢。

1.4 電子鼻法

電子鼻是一種電子感官儀，由傳感系統(tǒng)和自動化識別系統(tǒng)兩大系統(tǒng)組成，也是近年來新興的一種檢測方法。其將物理、神經(jīng)、數(shù)學(xué)、材料以及生理等方面的理論運(yùn)用到一起，建立一種識別氣味的數(shù)學(xué)模型，這樣可以通過快速的識別復(fù)雜氣味、氣體來檢測霉變食物。該法是間接檢測黃曲霉毒素的一種方法，即檢測受黃曲霉毒素污染后一些揮發(fā)性物質(zhì)的改變，比如烷烴、芳香烴、酮、醛類物質(zhì)，而不是直接檢測黃曲霉毒素。傳感器對不同氣味響應(yīng)值有差異，利用對特征性氣味感知而檢測這些物質(zhì)的變化，然后建立偏最小二乘法判別分析等數(shù)學(xué)方法[6]。如果要檢測牛奶中黃曲霉毒素殘留也可利用電子鼻法，但是由于牛奶中黃曲霉含量相對較低，因此檢測結(jié)果準(zhǔn)確度較其他方法也相對低一些。

1.5 光學(xué)免疫傳感器法

近來新興起的利用傳感器檢測的方法-光學(xué)免疫傳感器法是一種非標(biāo)記光學(xué)檢測法，具體原理是通過光敏元件利用光學(xué)對生物分子（黃曲霉毒素）產(chǎn)生的光學(xué)信號來識別其變化，然后進(jìn)一步通過檢測免疫反應(yīng)來進(jìn)行確認(rèn)，其中光敏元件是重要的元件組成部分[7]。也可利用傳感器（生物傳感器、酶傳感器）與電化學(xué)方法相結(jié)合來檢測生物分子（黃曲霉毒素），再通過分析樣品與傳感器響應(yīng)之間的線性關(guān)系得出檢測結(jié)果。此方法檢測下限低、相對簡便快速，但也會受到活性保留程度、生物分子固定量等因素的影響，使得生物傳感器的制備技術(shù)不成熟，未來還需再做進(jìn)一步改善。

2 結(jié)語

總之隨著國際食品貿(mào)易的日益擴(kuò)大，人們需求量和消費(fèi)能力不斷提高，奶制品市場消費(fèi)也隨之?dāng)U大，因此為人類提供健康、營養(yǎng)、鮮活的奶制品就顯得尤為重要。①奶牛養(yǎng)殖業(yè)從業(yè)主體應(yīng)當(dāng)加強(qiáng)學(xué)習(xí)行業(yè)內(nèi)先進(jìn)的養(yǎng)殖技術(shù)，加強(qiáng)對奶牛飼養(yǎng)過程中飼料質(zhì)量的把控和預(yù)防，規(guī)范奶牛養(yǎng)殖過程管理，從源頭減少牛奶中黃曲霉毒素含量[8]，從而保證奶產(chǎn)品的安全性。②企業(yè)以及科研機(jī)構(gòu)仍要持續(xù)的對黃曲霉毒素的檢測進(jìn)行研究。以上幾種黃曲霉毒素M1殘留的檢測技術(shù)在該領(lǐng)域內(nèi)有著很大的應(yīng)用價(jià)值和發(fā)展前景，但是這幾種方法各自有不足之處。因此，新型黃曲霉毒素殘留的檢測技術(shù)會取代原來傳統(tǒng)的檢測技術(shù)，在該領(lǐng)域發(fā)揮更大的作用。