王秀蘭 肖志國(guó) 高春山 陳偉強(qiáng) 張大彪 郎奎宇 陳嬋娟 李冠穎

摘 要：為培育出冷水魚新品種，開展了以美洲紅點(diǎn)鮭（Salvelinus fontinalis）為母本、花羔紅點(diǎn)鮭（S. malma）為父本的種間單列雜交試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果顯示，種間雜交的受精率為97.9%;發(fā)眼積溫190～214.8 ℃·d，發(fā)眼率95.6%;出苗積溫393.3～466.1 ℃·d，孵化率90%，出苗26.8萬尾;畸形率2‰，存活率95.8%，獲得雜交種仔魚25.5萬尾。在室內(nèi)利用玻璃鋼水槽對(duì)稚魚進(jìn)行培育，養(yǎng)殖成活率98%，利用水泥池在室內(nèi)和室外進(jìn)行幼魚培育，養(yǎng)殖成活率96.1%。雜交子代不僅具有部分花羔紅點(diǎn)鮭的生物性狀，而且生長(zhǎng)速度是花羔紅點(diǎn)鮭的2.3倍，抗病力比花羔紅點(diǎn)鮭高70%。

關(guān)鍵詞：美洲紅點(diǎn)鮭（Salvelinus fontinalis）;花羔紅點(diǎn)鮭（Salvelinus malma）;雜交育種

花羔紅點(diǎn)鮭（Salvelinus malma）為中小型冷水性稀有魚類，在我國(guó)僅分布于綏芬河、圖們江和鴨綠江上游支流里[1]，珍稀名貴，市場(chǎng)售價(jià)高，供不應(yīng)求，但生長(zhǎng)速度較慢;美洲紅點(diǎn)鮭（S. fontinalis）是冷水魚產(chǎn)業(yè)廣泛養(yǎng)殖的魚類，生長(zhǎng)速度快，但繁殖期易患癤瘡病和水霉病，死亡率高[2]，市場(chǎng)售價(jià)低，滯銷。雜交育種周期短，效果明顯，一般在子代即可表現(xiàn)出雜種優(yōu)勢(shì)[3]，鮭科魚類的屬間和屬內(nèi)雜交已有報(bào)道[4-8]， 本研究以市場(chǎng)為導(dǎo)向，旨在通過以美洲紅點(diǎn)鮭為母本、花羔紅點(diǎn)鮭為父本的種間雜交，培育出具有部分花羔紅點(diǎn)鮭形態(tài)特征，受市場(chǎng)歡迎，比花羔紅點(diǎn)鮭抗病力強(qiáng)、生長(zhǎng)速度快的新的養(yǎng)殖品種。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)地點(diǎn)

2020年1月10日至2021年1月19日，試驗(yàn)在長(zhǎng)白山保護(hù)開發(fā)區(qū)福順祥冷水魚有限公司進(jìn)行，水源為山泉水，水質(zhì)清澈， pH值6.7～7.5，溶解氧8～10 mg/L。

1.2 親本來源

美洲紅點(diǎn)鮭雌魚來自漁場(chǎng)自繁體系，年齡3+齡;花羔紅點(diǎn)鮭雄魚采自鴨綠江上游長(zhǎng)白江段，經(jīng)漁場(chǎng)培育至3+齡。

1.3 親本放養(yǎng)

培育池為30 m2的水泥池，規(guī)格為長(zhǎng)10 m×寬3 m×深0.8 m，水深0.5～0.6 m;進(jìn)出水口設(shè)置攔魚網(wǎng)柵，出水口閘板控制水位。2020年1月10日進(jìn)行親魚放養(yǎng)，且雌、雄分養(yǎng)，具體放養(yǎng)情況見表1。

1.4 親本培育

根據(jù)美洲紅點(diǎn)鮭比花羔紅點(diǎn)鮭性成熟季節(jié)早的規(guī)律，將花羔紅點(diǎn)鮭雄魚和美洲紅點(diǎn)鮭雌魚分別放養(yǎng)在漁場(chǎng)的上游和下游的魚池進(jìn)行培育，每天11∶00點(diǎn)進(jìn)行水溫監(jiān)測(cè)，記錄水溫?cái)?shù)據(jù)，花羔紅點(diǎn)鮭培育水溫1～10 ℃，美洲紅點(diǎn)鮭的培育水溫1～13 ℃。飼料采用鮭鱒魚配合飼料，每天上、下午各投喂一次，按魚體重的0.5%～1.5%投喂。及時(shí)清刷進(jìn)、出水口攔魚柵和魚池。池水每2～3 h交換一次，溶解氧不低于6 mg/L。每天觀察魚的攝食和活動(dòng)情況，觀察有無疾病發(fā)生。

1.5 雜交育種

1.5.1 親本性成熟的判斷 在親本培育過程中，隨著繁殖期的到來，親本會(huì)隨著性腺的成熟出現(xiàn)食欲顯著減退，個(gè)別成熟個(gè)體會(huì)發(fā)生水霉病，據(jù)此初步判斷親本的成熟情況。

1.5.2 親本的成熟度檢查 性成熟的美洲紅點(diǎn)鮭雌魚，用手輕壓腹部會(huì)有橙色或橘紅色的卵粒流出。性成熟的花羔紅點(diǎn)鮭雄魚，用手輕壓泄殖腔會(huì)有乳白色的精液流出。

1.5.3 雜交親本挑選 2020年10月12日上午，對(duì)美洲紅點(diǎn)鮭的雌魚和花羔紅點(diǎn)鮭的雄魚進(jìn)行成熟度檢查，并挑選美洲紅點(diǎn)鮭雌魚92尾、花羔紅點(diǎn)鮭雄魚31尾。

1.5.4 等滲液配制 等滲液須現(xiàn)用現(xiàn)配，配制方法：用塑料桶取10 L蒸餾水，稱取2.4 g氯化鉀、2.6 g無水氯化鈣、90.4 g氯化鈉，充分溶解于蒸餾水中。

1.5.5 采卵、采精及人工授精 10月12日下午進(jìn)行雜交試驗(yàn)，繁殖水溫7.3 ℃，雌雄比3：1。采卵、采精及人工授精均在避光、防水的條件下進(jìn)行。先將采卵盆擦干，盛入0.5 L等滲液，采用擠腹采卵法將6尾或9尾雌魚卵擠入，攪拌10～15 s，充分溶解擠破卵的卵黃蛋白，迅即擠入2尾或3尾雄魚的精液，再充分?jǐn)嚢?0～15 s，靜置5～10 min，使卵受精。

1.5.6 受精卵孵化 10月12日至11月24日進(jìn)行受精卵孵化。將受精卵用清水反復(fù)清洗8～10次，洗去剩余的精液和污物，計(jì)數(shù)后盛入3個(gè)孵化桶，盛卵密度9 452粒/L;孵化水流量控制在1～2 L/min，孵化水溫5.1～5.8 ℃，溶解氧不低于6 mg/L;受精卵每天用溴硝丙二醇流水消毒30～40 min，消毒濃度為0.35～0.4 mg/L，至受精卵全部發(fā)眼。

1.5.7 發(fā)眼卵孵化 2020年11月25日至2021年1月19日進(jìn)行發(fā)眼卵孵化。受精卵發(fā)眼后，挑除死卵和未發(fā)眼的卵，采用3組玻璃鋼平列槽孵化。盛卵密度約10萬粒/m2，孵化水溫4.7～5.1 ℃，孵化水流量4～5 L/min，溶解氧不低于6 mg/L。每天及時(shí)挑出死卵、死苗，并旋水4～5次，保證水流暢通，至完全出苗。

1.5.8 育種 2021年3月8日至5月22日，在室內(nèi)利用4個(gè)玻璃鋼水槽進(jìn)行稚魚培育，魚苗規(guī)格0.057 g/尾，放養(yǎng)密度5萬尾/m2，培育水溫5.5 ℃，溶解氧不低于6 mg/L，每天上、下午各投喂豐年蝦無節(jié)幼體1次、配合飼料3次、冰鮮海蚤1次。5月23日至7月25日，在室內(nèi)利用2個(gè)16 m2的圓形水泥池進(jìn)行前期幼魚培育，放養(yǎng)密度7 813尾/m2，每天上、下午各投喂海蚤1次、配合飼料3次。7月26日至8月29日，在室外利用2個(gè)20 m2的水泥池進(jìn)行幼魚后期培育，放養(yǎng)密度5 975尾/m2，培育水溫8～12 ℃，溶解氧不低于6 mg/L，每天投喂配合飼料4次。

2 試驗(yàn)結(jié)果

本試驗(yàn)種間雜交的雌雄比3∶1，共獲得受精卵31.9萬粒，受精率97.9%。孵化積溫100～110 ℃·d時(shí)測(cè)得的受精率為97.9%;發(fā)眼積溫190～214.8 ℃·d，發(fā)眼率95.6%，獲得發(fā)眼卵29.8萬粒。

出苗積溫393.3～466.1 ℃·d，出苗26.8萬尾，孵化率90%，畸形率2‰，存活率95%，獲得雜交種仔魚25.5萬尾。

培育規(guī)格0.5 g/尾的稚魚25萬尾，成活率98%;培育規(guī)格3.4 g/尾的前期幼魚23.9萬尾，成活率95.5%;培育規(guī)格6.8 g/尾的后期幼魚23.1萬尾，成活率96.7%。

3 討論

3.1 通過不同水溫的親本培育，美洲紅點(diǎn)鮭和花羔紅點(diǎn)鮭能同步成熟，實(shí)現(xiàn)種間雜交

美洲紅點(diǎn)鮭和花羔紅點(diǎn)鮭是隸屬鮭科，鮭亞科，紅點(diǎn)鮭屬的不同種類，吉林省花羔紅點(diǎn)鮭的繁殖季節(jié)一般為每年的9月下旬至10月中上旬，而美洲紅點(diǎn)鮭的繁殖季節(jié)一般為每年的10月下旬至11月上旬，將培育花羔紅點(diǎn)鮭雄魚、美洲紅點(diǎn)鮭雌魚的魚池，分別選擇在近水源處和遠(yuǎn)水源處，在培育水溫分別為1～10 ℃、1～13 ℃下進(jìn)行培育，通過降低花羔紅點(diǎn)鮭雄魚的性腺發(fā)育積溫，增加美洲紅點(diǎn)鮭雌魚的性腺發(fā)育積溫，使繁殖期不同的兩種魚類，性腺同步成熟，實(shí)現(xiàn)種間雜交。特別是花羔紅點(diǎn)鮭雄魚在低溫下培育，不僅延長(zhǎng)了成熟期，而且低溫下其精液質(zhì)量好、持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，有利于種間雜交。本研究受孵化設(shè)備限制，只進(jìn)行了一個(gè)批次的種間雜交，事實(shí)上，隨著美洲紅點(diǎn)鮭的陸續(xù)成熟，至少可進(jìn)行三個(gè)批次的種間雜交，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)規(guī)模化繁育。

3.2 美洲紅點(diǎn)鮭和花羔紅點(diǎn)鮭種間單列雜交效果分析

將卵采入等滲液中，避免其與空氣的接觸，同時(shí)，通過攪拌，能夠充分溶解破碎卵的卵黃蛋白，防止吸附精子，提高種間雜交的受精率。從試驗(yàn)結(jié)果來看，種間雜交的受精率97.9%、發(fā)眼率95.6%、孵化率90%、畸形率2‰、存活率95%，說明以美洲紅點(diǎn)鮭為母本、花羔紅點(diǎn)鮭為父本的種間雜交是可行的，種間雜交效果良好。

3.3 為冷水魚產(chǎn)業(yè)提供了新的養(yǎng)殖品種

吉林省冷水魚產(chǎn)業(yè)養(yǎng)殖魚類較少，養(yǎng)殖結(jié)構(gòu)較為單一，極大地限制了冷水魚產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。雜交在魚類育種工作中對(duì)增強(qiáng)子代生存力、豐富遺傳結(jié)構(gòu)、獲得雜種優(yōu)勢(shì)有重要作用[9]，在生產(chǎn)中，紅點(diǎn)鮭種間雜交育種可獲得具有較強(qiáng)雜種優(yōu)勢(shì)的雜交組合[10]。目前，經(jīng)過我們培育，雜交種不僅具有部分花羔紅點(diǎn)鮭的生物性狀，而且生長(zhǎng)速度比花羔紅點(diǎn)鮭快2.3倍，養(yǎng)殖成活率高達(dá)97%，比花羔紅點(diǎn)鮭高70%，充分體現(xiàn)了雜交種的生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)和抗病優(yōu)勢(shì)。

美洲紅點(diǎn)鮭養(yǎng)殖廣泛，易獲得，懷卵量相對(duì)較大，花羔紅點(diǎn)鮭為吉林省稀缺名貴種質(zhì)資源，本研究立足資源優(yōu)勢(shì)，以美洲紅點(diǎn)鮭為母本、以花羔紅點(diǎn)鮭為父本，成功培育出新的養(yǎng)殖品種，有利于冷水魚產(chǎn)業(yè)調(diào)整養(yǎng)殖結(jié)構(gòu)、滿足市場(chǎng)需求、提高養(yǎng)殖效益，前景十分遠(yuǎn)大。

參考文獻(xiàn)：

[1]

解玉浩.東北地區(qū)淡水魚類[M].沈陽(yáng)：遼寧科技出版社，2007：307-310.

[2] 孫大江，王炳謙.鮭科魚類及其養(yǎng)殖狀況[J].水產(chǎn)學(xué)雜志，2010，23（2）：56-63.

[3] 李炎璐，陳超，翟介明，等.魚類雜交育種技術(shù)及其在石斑魚類中的應(yīng)用[J].海洋漁業(yè)，2012，34（1）：102-109.

[4] 張玉勇，白慶利，賈鐘賀，等.山女鱒和虹鱒的雜交子代與其親本后代早期生產(chǎn)性能的比較[J].大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，24（4）：362-365.

[5] 陳術(shù)強(qiáng)，張玉勇，賈智英，等.虹鱒（♀）×山女鱒（♂）雜交種胚胎及仔魚發(fā)育的研究[J].上海海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，19（6）：756-762.

[6] 張玉勇，賈智英，池喜峰，等.虹鱒（♀）×山女鱒（♂）雜交F1及其親本肌肉營(yíng)養(yǎng)成分和肌肉質(zhì)地的比較[J].動(dòng)物學(xué)雜志，2009，44（6）：89-95.

[7] 張玉勇，白慶利，賈智英，等.虹鱒、山女鱒及其雜交子代（虹鱒（♀）×山女鱒（♂））的微衛(wèi)星分析[J].水產(chǎn)學(xué)報(bào)，2009，33（2）：188-195.

[8] 徐革鋒，尹家勝，劉洋，等.哲羅鮭與細(xì)鱗鮭屬間遠(yuǎn)緣雜交的初步研究[J].中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)，2009，16（6）：959-966.

[9] 樓允東，李小勤.中國(guó)魚類遠(yuǎn)緣雜交研究及其在水產(chǎn)養(yǎng)殖上的應(yīng)用[J].中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)，2006，13（1）：151-158.

[10] 谷偉，郭媛，戶國(guó)，等.美洲紅點(diǎn)鮭、白斑紅點(diǎn)鮭及雜交后代遺傳分析[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2016，47（7）：48-55.

（收稿日期：2021-09-09）