陳 英

（周至縣食品藥品檢驗(yàn)檢測中心，陜西西安 710400）

蘇丹紅共有4個(gè)組分，為蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ，是一種紅色顆?；蚍勰畹募t色染料常用于工業(yè)上色如鞋、地板等的增光，因?yàn)橛兄掳┳饔梦：θ梭w健康，我國和歐盟都禁止其用于食品生產(chǎn)[1]。市面上有一些不法分子為了產(chǎn)品成色漂亮好出售，依然違法添加工業(yè)染料。

目前，蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ檢測方法主要有薄層色譜法[2]、紫外可見分光光度法[3]、近紅外顯微成像光譜法[4]、液相色譜法[5-6]、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[7-8]和化學(xué)發(fā)光分析法[9]，這些方法前處理復(fù)雜、試劑用量大、檢測周期長、準(zhǔn)確度不高，不適應(yīng)實(shí)際工作中遇到的多種復(fù)雜基質(zhì)中蘇丹紅的篩查測定。本試驗(yàn)通過對(duì)色譜條件和質(zhì)譜參數(shù)的研究、優(yōu)化，建立了高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜同時(shí)分析蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的方法。本方法前處理簡單，7 min即可同時(shí)測出蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的含量，方法快速簡單，結(jié)果準(zhǔn)確，可以用于食品中非法添加蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的篩查。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀：Qtrap 5500三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀（美國AB SCIEX公司）；配有電噴霧離子源（ESI）；LC20A超高效液相色譜儀（日本Shimadzu公司）；MS1003S電子天平（瑞士Mettler Toledo公司）；Milli-Q超純水儀（美國Millipore公司）；MFV-24智能氮吹儀（廣州德泰儀器科技有限公司）。

1.2 藥品及試劑

實(shí)驗(yàn)用蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)品，純度均大于95%，購自Dr.Ehrenstorfer GmbH；甲醇、乙腈（色譜純，美國Mreda公司）；甲酸（色譜純，美國Fisher Scientific公司）；水為超純水。

樣品辣椒面、火鍋料、辣條、鴨蛋、鴨血均為市售。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

分別各精密量取適量標(biāo)準(zhǔn)溶液，加乙腈制成每1 mL中各約含1.0 mg的溶液，為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液密封，于4 ℃保存。分別量取上述蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液適量，用甲醇稀釋成約0.5 mg/mL的混合對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取混合對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，加空白樣品基質(zhì)提取液配制系列混合基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.4 樣品處理方法

提取。取待測試樣適量混勻，研細(xì)，稱取粉末5.0 g（準(zhǔn)確至0.001 g），置50 mLpvc離心管中，加15 mL乙腈超聲提?。üβ?00 W，頻率50 kHz）30 min，以6000 r/min離心5 min，取上清有機(jī)液，殘?jiān)?5 mL乙腈復(fù)提一次，合并兩次有機(jī)液于雞心瓶，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干，備用。

凈化。將上述提取的樣品用1 mL的乙腈溶解，混勻，轉(zhuǎn)移到氧化鋁層析柱上，用正己烷洗脫，氮吹濃縮置近干，1 mL乙腈復(fù)溶，過0.22 μm濾膜，備用。

1.5 色譜條件和質(zhì)譜條件

色譜柱：Waters UPLC BEH柱（3.0 μm，2.1mm×100 mm）；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：5 μL；流動(dòng)相：A相為0.1%甲酸水溶液，B相為乙腈溶液，進(jìn)行梯度洗脫，流速：0.6 mL/min。

電離源模式：電噴霧離子化；電離源極性：正離子模式；霧化氣：氮?dú)?；掃描方式：正離子掃描；檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；電噴霧電壓：4000 V；離子源溫度：150 ℃、碰撞電壓（CE）為20～30 V、去簇電壓（DP）30～40 V。具體待測物的準(zhǔn)確質(zhì)量數(shù)及碎片離子為：蘇丹紅Ⅰ249.1/156.1，249.1/232.2；蘇丹紅Ⅱ277.3/156.1，277.3/160.1；蘇丹紅Ⅲ253.2/156.1，253.2/197.0；蘇丹紅Ⅳ381.1/224.3，381.1/275.8。

2 結(jié)果和分析

2.1 質(zhì)譜方法的建立

將蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液分別稀釋成濃度約為 200 μg/L，按照上述色譜和質(zhì)譜條件進(jìn)樣檢測，在7 min內(nèi)蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ能得到很好分離，方法條件滿足辣椒面、火鍋料、辣條、鴨蛋、鴨血中的蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的測定。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢出限

在上述本實(shí)驗(yàn)色譜和質(zhì)譜條件下，取1.3混合系列標(biāo)準(zhǔn)溶液0～500 μg/L，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以定量離子峰面積y對(duì)質(zhì)量濃度x（μg/L）做線性回歸，得到蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的線性方程和相關(guān)系數(shù)。蘇丹紅Ⅰ：y=1 271.7x+3 854.8，蘇丹紅Ⅱ：y=1 540.1x+4 678.5，蘇丹紅Ⅲ：y=1 383.2x+2 432.3，蘇丹紅Ⅳ：y=1 262.1x+2 743.3，r2均大于等于0.999。將混合系列溶液的最低濃度點(diǎn)溶液稀釋后進(jìn)樣分析，測定信噪比，取信噪比約為3的溶液濃度作為定性檢測限，信噪比約為10的溶液濃度作為定量檢測限。檢出限和定量限為1.0~6.0 μg/kg。

2.3 精密度和重復(fù)性試驗(yàn)

按本實(shí)驗(yàn)條件，在5種不同基質(zhì)樣品中進(jìn)行3個(gè)添加水平（0.1 μg/mL、0.2 μg/mL、0.5 μg/mL）的加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，每個(gè)添加水平平行實(shí)驗(yàn)6次。蘇丹紅Ⅰ的平均回收率為89.3%、93.5%、91.9%；蘇丹紅Ⅱ的平均回收率為92.2%、91.4%、104.9%；蘇丹紅Ⅲ的平均回收率為87.9%、88.0%、90.5%；蘇丹紅Ⅳ的平均回收率為85.1%、86.9%、91.5%，平均相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為4.05%、3.2%、6.18%，表明該方法具有良好的精密度和準(zhǔn)確度。可滿足食品中蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的分析 要求。

2.4 樣品測定

應(yīng)用建立的本方法，對(duì)市場銷售的50批次辣椒面、火鍋料、辣條、鴨蛋、鴨血樣品進(jìn)行了篩查，所測樣品中均未檢出蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ。

3 結(jié)論

本研究建立的UPLC-MS/MS高分辨率質(zhì)譜檢測方法，可同時(shí)測定食品中非法添加蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ，樣品沒有復(fù)雜的處理過程，操作簡便，可在7 min內(nèi)完成整個(gè)分析，提高了檢驗(yàn)效率。采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的MRM模式進(jìn)行定性和定量檢測，靈敏度、準(zhǔn)確度高，適用于食品中非法添加蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的檢測。