趙麗萍,陳浩,宋敏
1.新疆維吾爾自治區(qū)產品質量監(jiān)督檢驗研究院(烏魯木齊 830011);2.新疆維吾爾自治區(qū)烏魯木齊市經濟技術開發(fā)區(qū)疾病預防控制中心(烏魯木齊 830011)
黑桑椹,又稱“藥?!保亲匀唤鐦O為罕見的稀貴桑樹半栽培半野生資源,也是中國唯一的黑桑種,栽培適應地只限于新疆[1]。黑桑椹作為維吾爾族民間傳統(tǒng)藥材,具有活血補腦、通脈護肝、強腎利尿、降壓降脂等作用[2]。黑桑椹成熟后,因存儲時間短,運輸易損壞,除生食外,通常會將其晾曬成黑桑椹干食用。
農藥可有效預防病蟲害,在果蔬種植中被廣泛使用,農藥殘留可通過食物鏈在人體內積累,造成神經系統(tǒng)紊亂,引起染色體畸變,導致癌變或畸形[3],農藥殘留問題受到廣泛關注,農藥殘留檢測技術一直是國內研究熱點[4-5],但中國對新疆黑桑椹干中農藥殘留的檢測少有報道。
食品中農藥殘留的前處理方法多采用液-液萃取,固相萃取凈化濃縮[6-7],這些方法普遍存在操作步驟繁瑣、有機溶劑消耗量大等問題[8]。QuEChERS法是近年來發(fā)展迅速的一種農藥多組分殘留檢測前處理方法,該法因快速、簡便、廉價、高效、安全等優(yōu)點而被廣泛用于農藥多殘留快速檢測[9-12]?;赒uEChERS法開發(fā)氣質聯(lián)用檢測黑桑椹干中農藥殘留的方法,旨在建立一種簡單快速、重復性好,且能同時測定黑桑椹干中多種農藥殘留的方法。
TSQ 9000三重四極桿氣質聯(lián)用儀(美國Thermo公司);SIGMA 3K15冷凍離心機(德國希格瑪公司);IKA RV10旋轉蒸發(fā)儀(德國艾卡集團)。
甲拌磷、氯唑磷、甲拌磷砜、甲拌磷亞砜、對硫磷、水胺硫磷、甲基異柳磷、腐霉利、丙環(huán)唑、甲氰菊酯、氯氟氰菊酯、噠螨靈、氰戊菊脂、溴氰菊酯、環(huán)氧七氯(內標)標準品(100 μg/mL,農業(yè)部環(huán)境保護科研監(jiān)測所);乙腈(分析純,天津市致遠化學試劑有限公司);乙酸乙酯(分析純,上海山浦化工有限公司);丙酮(分析純,國藥集團化學試劑有限公司)。
取14種農藥標準品各1支,用丙酮反復轉移并定容至10 mL混勻,配制成質量濃度10 μg/mL的標準儲備溶液,冷藏備用。按照樣品前處理方法,提取空白基質溶液,配制質量濃度分別為0.005,0.010,0.050,0.100和0.500 μg/mL的基質混合標準工作溶液;分別吸取1.0 mL的上述混合標準工作溶液,準確加入20 μL質量濃度5 μg/mL的環(huán)氧七氯內標溶液。
將樣品剪碎研磨后備用,稱取10 g(精確至0.01 g)制備后樣品于50 mL離心管中,加入10 mL乙腈和1 g氯化鈉,高速勻漿1 min,按4 200 r/min 離心5 min,取5 mL上清液到含有885 mg硫酸鎂、150 mg PSA、15 mg GCB離心管中,渦旋1 min;按4 200 r/min 離心5 min,取2 mL上清液氮氣吹至近干,加入1 mL乙酸乙酯復溶,加入20 μL 10 μg/mL的內標溶液環(huán)氧七氯,混勻后上機測定。
色譜柱,TG-5SILMS柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm);進樣口280 ℃;進樣量1 μL,不分流進樣。升溫程序:90 ℃保持1.5 min,以25 ℃/min升溫至180℃保持1 min,以5 ℃/min升溫至280 ℃,以10 ℃/min升溫至300 ℃,保持2 min;載氣,高純氦氣(純度99.999%),流速1.0 mL/min。
電離方式采用電子轟擊(EI);電離能量70 eV;傳輸線溫度280 ℃;離子源溫度280 ℃;采用多反應監(jiān)測(SRM)方式;溶劑延遲時間5 min。
2.1.1 前處理優(yōu)化
黑桑椹干中色素、有機酸、糖等干擾物質含量較高,試驗證明,QuEChERS法操作簡便,PSA可有效吸附樣品中有機酸、脂肪酸和糖等物質;GCB對色素、甾醇、芳香烴具有較好吸附作用,可明顯降低基質效應。
2.1.2 質譜條件優(yōu)化
14種農藥的氣相色譜-質譜總離子流圖見圖1,其中9(丙環(huán)唑),11(氯氟氰菊酯),13(氰戊菊脂)和14(溴氰菊酯)號組分各分離出2組峰形,互為同分異構體。由圖1可知,經條件優(yōu)化,14種組分在31 min前全部出分,且各組分峰形較好,分離效果好。分別選擇質量數(shù)較大、響應較高的碎片離子進行二級碎裂,采用儀器軟件Auto SRM優(yōu)化碰撞電壓,建立質譜檢測條件,母離子、子離子及最佳碰撞能量見表1。
圖1 14種農藥的氣相色譜-質譜總離子流圖
表1 14種農藥SRM參數(shù)
用空白基質將農殘混合標準溶液稀釋成0.005~0.5 μg/mL的標準系列工作溶液,以濃度為橫坐標,定量離子的峰面積為縱坐標進行線性擬合。結果表明,在0.005~0.5 μg/mL的范圍內各組分線性關系良好,相關系數(shù)r在0.998 1以上,以3倍信噪比(S/N)計算檢測方法的檢出限,結果見表2,各組分檢出限在0.001~0.005 mg/kg,低于國家標準的限量值[13]。
表2 14種農殘線性范圍和檢出限
為驗證方法的準確性,向黑桑椹干空白樣品中添加14種農藥混合標準溶液,添加濃度分別為0.1,0.5和1.0 mg/kg,按照前處理方法進行處理,每個水平重復5次,結果見表3。
表3 14種農殘加標回收率和相對標準偏(n=5)
由表3可知,加標量0.1 mg/kg時,回收率為85.3%~96.7%,相對標準偏差SRSD為5.2%~8.1%;加標量0.5 mg/kg時,回收率為86.8%~102.1%,相對標準偏差SRSD為5.3%~8.2%;加標量1.0 mg/kg時,回收率為88.9%~104.6%,相對標準偏差SRSD為5.2%~8.1%。結果表明,3組加標樣品的回收率均在80%~120%之間,相對標準偏差SRSD均不大于10%,且加標濃度越高,回收率越好,由此可知,該方法可靠,重現(xiàn)性較好。
稱取10 g(精確至0.01 g)制備后樣品,加入0.1 μg/mL標準溶液,同1.3小節(jié)的方法前處理后加入內標混勻上機,平行測定6次,用于驗證方法的精密度,結果見表4,該方法測定的14種農殘的精密度范圍為0.9%~2.3%,該方法精密度較好。
表4 精密度(n=6)
針對黑桑椹干建立14種農藥殘留的檢測方法,并進行方法學論證,結果表明,該方法可在31 min內完成檢測,在0.005~0.5 μg/mL范圍內各組分具有良好的線性關系,相關系數(shù)r在0.998 1以上;方法檢出限為0.001~0.005 mg/kg;在3個不同濃度的添加水平下,回收率為85.3%~104.6%,相對標準偏差SRSD為5.2%~8.2%,精密度為0.9%~2.3%。因此,該方法操作簡便、快速、靈敏度高、精密度好,適合進行黑桑椹干中14種農藥殘留的快速檢測,該方法的建立,不僅對黑桑椹干中農藥殘留的檢測具有一定應用價值,還可為其他農產品中農藥殘留檢測提供技術參考。