廣東省廣州市番禺區(qū)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測(cè)所 廣東廣州 511450

1 優(yōu)化高校液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)水產(chǎn)品孔雀石綠的實(shí)驗(yàn)材料及方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料、試劑、儀器設(shè)施

本次實(shí)驗(yàn)所用的乙腈、甲醇、甲酸、色譜純均由Honeywell 公司提供，而國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司則是負(fù)責(zé)提供氨水、無(wú)水乙酸銨、分析純等，此外雅水處理技術(shù)有效公司負(fù)責(zé)提供超純水、超純水機(jī)。實(shí)驗(yàn)選擇的羅非魚、鯽魚、草魚及鱖花魚全部來(lái)自當(dāng)?shù)氐霓r(nóng)貿(mào)市場(chǎng)及超市，并且是通過隨機(jī)抽樣而來(lái)。同時(shí)，實(shí)驗(yàn)過程用到的標(biāo)準(zhǔn)孔雀石綠、隱性孔雀石綠等全部都得德國(guó)的Dr.Ehrenstorfer公司所提供。實(shí)驗(yàn)中所用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)儀器由沃特公司提供，同時(shí)，其他用到的XFH 型均質(zhì)器、3-30K 型離心機(jī)、DC 型氮吹儀器皆選擇了國(guó)內(nèi)外知名企業(yè)的產(chǎn)品。

1.2 溶液配制

實(shí)驗(yàn)所用的5mmol/L 乙酸銨溶液制備過程如下：在1000mL的水中加入0.3850g 的無(wú)水乙酸銨，并借助冰乙酸將完全溶解后的溶液PH 數(shù)值調(diào)整到4.5，讓其通過0.2μm 的濾膜。工作溶液的配置過程如下：使用天平準(zhǔn)確稱量孔雀石綠、隱色孔雀石綠，通過使用乙腈將之溶解之后配置成為500μg/mL 的母液，并在經(jīng)過逐級(jí)稀釋以及使用乙腈進(jìn)行定熔之后，將之制作成混合外標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，其濃度為100μg/L，隨后使用內(nèi)標(biāo)物D5 孔雀石綠及D6 隱色孔雀石綠，配置成混合標(biāo)準(zhǔn)液為100μg/L 的工作溶液，將之全部放置在-18℃避光條件下進(jìn)行保存。

1.3 樣品處理的優(yōu)化

傳統(tǒng)的樣品處理步驟如下：以GB/T19857-2005 為根據(jù)，選擇3 份陰性已知狀態(tài)下的生鮮羅非魚作為樣品并進(jìn)行加標(biāo)處理，具體孔雀石綠及隱色孔雀石綠溶液加標(biāo)數(shù)量為2.5μg/kg 和5.0μg/kg。在此之后，嚴(yán)格遵循GB/T19857-2005 標(biāo)準(zhǔn)下的針對(duì)鮮活水產(chǎn)品及加工水產(chǎn)品的處理方式要求開展檢測(cè)。經(jīng)過優(yōu)化處理之后的實(shí)驗(yàn)過程步驟如下：在50mL 的離心管中加入5.0g 的勻漿樣品，并將之前制定的D5 孔雀石綠及D6 隱色孔雀石綠混合內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液選取一定數(shù)量加入其中，確保兩種工作溶液的測(cè)定最終含量結(jié)果為2.00μg/kg。在此之后，將20ml 的乙腈及5g 酸性氧化鋁物質(zhì)，隨后使用多管漩渦混合儀器，以2500r/min 的速度處理5 分鐘，在全面提取物質(zhì)之后將其中的雜質(zhì)有效清除。在此之后，以8000r/min 的速度處理5 分鐘，并在15ml 的離心管中加入混合儀器中處理完成的上清液4ml，之后將之放置在45℃的水浴環(huán)境下使用氮吹儀器進(jìn)行處理，之后使用1ml 的乙酸銨-乙腈定容液進(jìn)行定容處理，使用多管漩渦混合儀器，以2000r/min 的速度處理4 分鐘，并在通過0.22μm 濾膜之后，準(zhǔn)備進(jìn)行檢測(cè)。

1.4 氧化鋁實(shí)驗(yàn)

在這一步操作中，通過使用優(yōu)化之后的實(shí)驗(yàn)樣品前處理方法，使用酸性、中性及堿性的氧化鋁三種物質(zhì)開展雜質(zhì)去除凈化對(duì)比實(shí)驗(yàn)，添加量均維持在5g 的水平，且每一種實(shí)驗(yàn)物質(zhì)設(shè)置6 個(gè)平行樣品。除此之外，需要分別使用2g、3g、4g、5g、6g 添加量的酸性氧化鋁開展雜質(zhì)去除凈化對(duì)比實(shí)驗(yàn)。同時(shí)，在具體的實(shí)驗(yàn)操作中，全部使用孔雀石綠及隱色孔雀石綠的實(shí)際加標(biāo)回收率衡量不同性質(zhì)氧化鋁添加量條件下的回收率數(shù)據(jù)影響，且二者的實(shí)際加標(biāo)濃度維持在2.0μg/kg 水平上。

在此之后，使用經(jīng)過優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)樣品前處理方式針對(duì)尚未檢測(cè)出孔雀石綠及隱色孔雀石綠的羅非魚樣品處理為定熔液，并向其中加入之前制備的混合外標(biāo)工作溶液，確保標(biāo)準(zhǔn)工作曲線外標(biāo)濃度數(shù)值分為維持在0.5、1.0、2.0、5.9、6.0、10.010.0μg/L 水平上。同時(shí)，將之前制備的混合內(nèi)標(biāo)工作溶液加入其中，借此形成一個(gè)內(nèi)標(biāo)濃度為2.0μg/L 的標(biāo)準(zhǔn)性質(zhì)工作曲線。

將濃度水平100μg/L 的混合外標(biāo)工作溶液分別加入25、75、125μL 到陰性已知的羅非魚肉實(shí)驗(yàn)樣品中，將之放置在4℃的環(huán)境條件下冷藏過夜之后，使用前文優(yōu)化之后的處理方式進(jìn)行檢測(cè)，并將回收率及精密度數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)算。

2 結(jié)果分析

2.1 優(yōu)化之前的檢測(cè)結(jié)果

根據(jù)本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，以GB/T19857-2005 為依據(jù)的測(cè)定生鮮水產(chǎn)品及加工水產(chǎn)品孔雀石綠方式進(jìn)行檢測(cè)，回收率數(shù)據(jù)基本維持在70%-120%的基本要求水平上，但多次檢測(cè)結(jié)果的穩(wěn)定性較差，不具備較為優(yōu)秀的重復(fù)性，并且耗費(fèi)的檢驗(yàn)試劑數(shù)量及前處理工作時(shí)間較多。

2.2 優(yōu)化之后的回收率及精密度結(jié)果

分別將濃度為100μg/L 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液以0.025、0.075、0.125ml 的數(shù)量加入到5g 的陰性已知羅非魚產(chǎn)品樣品中，隨后以優(yōu)化之后的方式開展檢測(cè)，孔雀石綠的回收率及精密度結(jié)果分別為102.4%、103.5%、104.4%以及2.3%、10.4%、1.7%，而隱色孔雀石綠的回收率及精密度結(jié)果為91.1%、95.3%、91.6%及4.1%、2.7%、1.2%。

3 結(jié)語(yǔ)

傳統(tǒng)的水產(chǎn)品孔雀石綠檢測(cè)方式，在回收率數(shù)據(jù)上較為不穩(wěn)定，且樣品前處理時(shí)間過長(zhǎng)。經(jīng)過優(yōu)化之后的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法孔雀石綠檢測(cè)方式，經(jīng)過試驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)其回收率較為穩(wěn)定且結(jié)果精密度較高，值得推廣使用。