牛桂鋒

（山東省諸城市畜牧業(yè)發(fā)展中心 山東濰坊 262200）

奶牛乳房炎是目前危害奶牛養(yǎng)殖業(yè)的最重要疾病之一，根據(jù)奶牛乳房炎的臨床表現(xiàn)可將其分為臨床型乳房炎和隱性型乳房炎，引起奶牛乳房炎的病原很多，其中最主要的病因是病原微生物感染。能夠引起奶牛乳房炎的病原微生物有140多種，其中主要包括球菌、桿菌、真菌、支原體和病毒等，根據(jù)病原微生物的來源和傳播途徑等，可將這些病原微生物分為環(huán)境性微生物和傳染性微生物兩種。除了這些病原微生物以外，環(huán)境衛(wèi)生條件差、飼料營養(yǎng)品質(zhì)失衡及粗暴養(yǎng)殖同樣也是奶牛乳房炎的重要誘因。

奶牛乳房炎的頻繁發(fā)生不僅會阻礙奶牛養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展，同樣也會對消費者的健康造成影響，如何能夠快速準確的診斷奶牛乳房炎并有效的治療及預防該病一直是研究人員研究的重點，本文從乳房炎的流行情況、不同類型的診斷方法及常用疫苗的免疫效果及存在的問題進行了綜合講解，以期為后續(xù)相關制劑的研發(fā)及飼養(yǎng)人員的合理選擇提供參考和指導。

1 奶牛乳房炎的流行情況

據(jù)報道，奶牛乳房炎在全球主要的奶牛養(yǎng)殖區(qū)都是廣泛流行的，國外地區(qū)的奶牛乳房炎平均發(fā)病率為25%～60%，美國的奶牛乳房炎發(fā)病率較高，可達50%；而在歐洲的牛奶主要產(chǎn)區(qū)如丹麥、芬蘭、瑞士、法國等，臨床型奶牛乳房炎的發(fā)病率在16%左右，在我國的重要鄰國俄羅斯，乳房炎的發(fā)病率可達38%。與國外相比，我國奶牛乳房炎的發(fā)病情況更為嚴重，發(fā)病率通常為20%～75%，而在部分地區(qū)發(fā)病率甚至超過75%。由此可見，如何及時準確的診斷奶牛乳房炎并有效治療，同時對奶牛乳房炎進行合理的免疫防護，對降低我國奶牛乳房炎的發(fā)病率，促進我國奶牛養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展是十分重要的[1]。

2 奶牛乳房炎的診斷

臨床型奶牛乳房炎具有明顯的臨床癥狀，因此較容易診斷。奶牛乳房炎的準確診斷主要是針對隱性型奶牛乳房炎，傳統(tǒng)的診斷方法包括病原分離鑒定、乳汁體細胞計數(shù)、乳汁pH值檢測、酶檢測、乳汁導電率檢測等，雖然能夠?qū)﹄[性型乳房炎進行檢測，但存在靈敏度不高、主觀判斷較多容易造成診斷誤差、不易于進行大規(guī)模檢測等問題。因此，本文主要是介紹診斷隱性型奶牛乳房炎的新的診斷方法[2]。

2.1 單重PCR檢測方法

隨著分子生物學的大力發(fā)展，聚合酶鏈式反應（PCR）被廣泛的應用于病原微生物的檢測，而病原微生物感染是導致奶牛乳房炎的最主要原因。因此，有大量研究人員通過設計檢測誘導奶牛乳房炎發(fā)病的主要病原微生物（如金黃色葡萄球菌、乳源無乳鏈球菌等）的特異性檢測引物，進而對隱性型奶牛乳房炎進行檢測。該方法與傳統(tǒng)的病原分離鑒定相比，其靈敏度和特異性更高，且更適用于大批量的流行病學檢測，但由于奶牛乳房炎通常是由多種病原微生物混合感染引起，因此研究人員又在單重PCR檢測的基礎上建立了多重PCR檢測方法。

2.2 多重PCR檢測方法

為了同時檢測能夠引起奶牛乳房炎的多種病原微生物，研究人員建立了多重PCR檢測方法，其中最常見的是檢測乳房鏈球菌、無乳鏈球菌、停乳鏈球菌和金黃色葡萄球菌的四重PCR體系和檢測金黃色葡萄球菌、無乳鏈球菌和停乳鏈球菌的三重PCR檢測方法。多重PCR檢測方法克服了單重PCR僅能檢測單一病原的缺點，但由于要同時檢測多種病原，所以需要對PCR的反應體系和程序進行最佳的優(yōu)化，也降低了檢測方法的靈敏度。

2.3 實時熒光定量PCR檢測方法

實時熒光定量PCR檢測方法是通過在傳統(tǒng)PCR檢測的基礎上加入了熒光染料或熒光探針，從而可以實時檢測樣品中的病原微生物含量，目前已有報道有單獨檢測金黃色葡萄球菌的熒光定量檢測方法及同時檢測金黃色葡萄球菌、乳房鏈球菌、無乳鏈球菌的多種熒光定量檢測方法。熒光定量檢測方法較傳統(tǒng)的PCR檢測方法相比靈敏度更高、更適用于大規(guī)模的臨床樣品檢測，同時可以對病原進行定量檢測，但由于成本高、技術復雜，很難在基層和養(yǎng)殖企業(yè)中進行大規(guī)模推廣。

2.4 環(huán)介導等溫擴增技術（LAMP）

環(huán)介導等溫擴增技術是一種新型的體外等溫擴增檢測特異性核酸的檢測技術，該方法通過設計針對靶基因不同區(qū)域的引物，可在較短時間內(nèi)對目的基因進行指數(shù)擴增。且該檢測方法中可加入不同的指示劑，因此不需進行核酸凝膠電泳便可觀察，臨床檢測上操作更為簡單。目前有報道的有關于牛乳中金黃色葡萄球菌、乳鏈球菌和大腸桿菌的檢測方法。但由于該方法對引物設計要求較高，容易產(chǎn)生非特異型擴增導致假陽性，因此臨床應用上還需進一步改進。

3 奶牛乳房炎的疫苗

疫苗免疫一直是預防傳染性疾病的最常用方法之一，且近年來國內(nèi)外的研究人員在奶牛乳房炎相關疫苗的研發(fā)方面取得了矚目的成果。目前，根據(jù)疫苗的成分可將奶牛乳房炎疫苗分為滅活苗、活苗、亞單位疫苗、載體疫苗和核酸疫苗[3]。

3.1 奶牛乳房炎滅活疫苗

滅活疫苗主要是通過甲醛等滅活劑將細菌培養(yǎng)物滅活后加入適當?shù)拿庖咦魟┲苽涞?，目前商品化的奶牛乳房炎滅活苗有主要針對葡萄球菌、大腸桿菌和分枝桿菌的單價疫苗以及大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的二價疫苗。雖也有研究人員成功研發(fā)了鏈球菌奶牛乳房炎滅活疫苗，但由于該疫苗交叉免疫原性差，僅能夠抵抗同源鏈球菌的攻擊，因此該疫苗很難商品化。

3.2 奶牛乳房炎弱毒疫苗

弱毒或減毒疫苗主要是通過自然篩選或人工傳代致弱的方式，篩選出致病力弱或無致病能力的毒株進而制備的疫苗，該疫苗能夠在動物體內(nèi)增殖，因此無需加強免疫便可產(chǎn)生持久的保護力。目前，關于奶牛乳房炎弱毒疫苗的研究相對較少，僅有部分研究利用金黃色葡萄球菌減毒株制備了弱毒疫苗，并證明該疫苗能夠誘導牛奶產(chǎn)生特異性抗體，減輕奶牛乳房炎的臨床癥狀。

3.3 奶牛乳房炎亞單位疫苗

奶牛乳房炎亞單位疫苗指的是通過傳統(tǒng)方法分離純化或載體表達引起奶牛乳房炎的病原微生物的莢膜多糖、類毒素、表面蛋白等物質(zhì)，并混合適當?shù)拿庖咦魟┧苽涞囊呙纭Ｄ壳瓣P于奶牛乳房炎亞單位疫苗的報道有利用金黃色葡萄球菌的莢膜多糖CP5和CP8以及無乳鏈球菌主要黏附蛋白Fb s、Lm b、Srr和Sip以及重組表達停乳鏈球菌的Gap C1蛋白及金黃色葡萄球菌的tlsdB和TRAP蛋白制備的，且動物試驗證明奶牛乳房炎亞單位疫苗能夠激活機體有效的免疫應答，有很好的進一步研發(fā)的潛在價值。

4 總結(jié)

雖然到目前為止有多種檢測和診斷奶牛乳房炎的方法，但由于奶牛養(yǎng)殖戶的重視程度不高，隱性型奶牛乳房炎的發(fā)病情況被嚴重忽視，因此飼養(yǎng)人員應合理的選擇適當?shù)脑\斷方法，以及早診斷和發(fā)現(xiàn)隱性型奶牛乳房炎發(fā)病的病牛，及早治療降低損失。針對奶牛乳房炎的疫苗近年來也得到了大規(guī)模的發(fā)展，但目前常用的商品化疫苗仍然為傳統(tǒng)的滅活疫苗，新型疫苗的研發(fā)仍較多處于實驗室階段，如何研發(fā)出針對臨床的高效的多價疫苗仍然是研發(fā)人員需要關注的重點之一。█