寧玉明，潘一帆，李范珠

丹參酮IIA對阿霉素耐藥人乳腺癌細(xì)胞的多藥耐藥逆轉(zhuǎn)作用及機(jī)制研究

寧玉明1，潘一帆1，李范珠2

1.杭州市富陽區(qū)婦幼保健院，浙江 杭州 311400 2.浙江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，浙江 杭州 311400

研究丹參酮IIA對阿霉素耐藥人乳腺癌細(xì)胞MCF-7/ADR的多藥耐藥逆轉(zhuǎn)作用及相關(guān)機(jī)制。分別用丹參酮IIA、阿霉素、阿霉素聯(lián)合丹參酮IIA處理人乳腺癌MCF-7細(xì)胞和MCF-7/ADR細(xì)胞，采用MTT法檢測細(xì)胞增殖率；流式細(xì)胞術(shù)檢測丹參酮IIA干預(yù)后MCF-7/ADR細(xì)胞內(nèi)阿霉素蓄積量的變化；檢測丹參酮IIA干預(yù)后MCF-7/ADR細(xì)胞三磷酸腺苷（adenosine triphosphate，ATP）消耗量的變化；采用qRT-PCR、Western blotting法檢測丹參酮IIA干預(yù)后MCF-7/ADR細(xì)胞ATP結(jié)合轉(zhuǎn)運蛋白B1（ATP-binding cassette transporter B1，）、和基因和蛋白表達(dá)的變化。丹參酮IIA顯著抑制MCF-7及MCF-7/ADR細(xì)胞增殖（＜0.05），呈劑量相關(guān)性；丹參酮IIA能夠逆轉(zhuǎn)MCF-7/ADR細(xì)胞的多藥耐藥性（＜0.05），增加MCF-7/ADR細(xì)胞內(nèi)阿霉素的蓄積（＜0.05），減少MCF-7/ADR細(xì)胞的ATP消耗（＜0.05），顯著下調(diào)和基因和蛋白表達(dá)（＜0.05）。丹參酮IIA能夠通過調(diào)控ABCG2、ABCC1介導(dǎo)的轉(zhuǎn)運，逆轉(zhuǎn)MCF-7/ADR細(xì)胞的多藥耐藥性。

丹參酮IIA；阿霉素；乳腺癌；多藥耐藥；ABC轉(zhuǎn)運蛋白

乳腺癌是全世界女性最常見的癌癥之一，也是女性癌癥死亡的主要原因[1]?；熓侵委熑橄侔┑闹饕R床手段之一。自20世紀(jì)30年代后期引入化療以來，已經(jīng)有200多種化合物被批準(zhǔn)用于腫瘤治療。然而癌細(xì)胞不斷發(fā)展的多藥耐藥性嚴(yán)重限制了化療藥物的作用，顯著降低了其臨床療效。乳腺癌細(xì)胞的耐藥性往往具有多重機(jī)制，其中基因表達(dá)導(dǎo)致的多藥耐藥最受關(guān)注，特別是三磷酸腺苷結(jié)合盒（adenosine triphosphate-binding cassette，ABC）家族成員如ABCB1、ABCG2和ABCC1的過表達(dá)，增加了細(xì)胞毒性藥物的外排，導(dǎo)致化療藥物細(xì)胞內(nèi)積累減少，療效降低甚至發(fā)生耐藥。因此，抑制或下調(diào)ABC轉(zhuǎn)運蛋白的表達(dá)成為逆轉(zhuǎn)多藥耐藥的策略之一[2-3]。自1981年第1個ABCB1抑制劑維拉帕米被報道以來，多種ABC轉(zhuǎn)運體抑制劑相繼被研究開發(fā)，但由于其親和力較低、藥物間不可預(yù)測的相互作用和毒性，很少用于臨床常規(guī)治療[2,4-5]。此外，大多數(shù)已被報道的ABC轉(zhuǎn)運蛋白抑制劑在體內(nèi)并沒有表現(xiàn)出預(yù)期的抗癌效果[6]。因此，開發(fā)新型ABC轉(zhuǎn)運蛋白抑制劑的研究仍在進(jìn)行中。

阿霉素屬于蒽環(huán)類藥物，是目前治療乳腺癌最有效的化療藥物之一[7]。心臟毒性是其主要不良反應(yīng)之一。阿霉素是ABCB1、ABCG2及ABCC1的反應(yīng)底物[8-9]。丹參酮IIA是丹參的脂溶性有效成分，《中國藥典》2020年版將其作為丹參提取物的質(zhì)量控制指標(biāo)之一[10-12]。丹參酮IIA具有心血管保護(hù)、抗腫瘤的作用[13-20]。研究發(fā)現(xiàn)，丹參酮IIA可以增加阿霉素在阿霉素耐藥人乳腺癌細(xì)胞MCF-7/ADR中的蓄積，提示丹參酮IIA可能有逆轉(zhuǎn)人乳腺癌獲得性多藥耐藥的作用[21]。本研究考察丹參酮IIA對MCF-7/ADR細(xì)胞的多藥耐藥逆轉(zhuǎn)作用及相關(guān)機(jī)制，以期為乳腺癌治療提供一定的理論依據(jù)。

1 材料

1.1 細(xì)胞株

人乳腺癌MCF-7細(xì)胞及MCF-7/ADR細(xì)胞由浙江大學(xué)藥學(xué)院應(yīng)曉英研究員惠贈。

1.2 藥品與試劑

丹參酮IIA（批號I14010E8，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%）、鹽酸維拉帕米（批號K1417048，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥99%）購自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；鹽酸阿霉素（批號1050-C190901，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%）購自浙江海正藥業(yè)股份有限公司；ABCG2選擇性抑制劑Ko143（質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%）、二甲基亞砜（DMSO）、Triton X-100、cocktail蛋白酶抑制劑購自美國Sigma-Aldrich公司；DMEM培養(yǎng)基（批號10566-016）、0.25%胰酶-0.02%EDTA、胎牛血清、雙抗購自美國Gibco公司；HBSS、PBS購自杭州吉諾生物制品有限公司；MTT購自美國Amresco公司；三磷酸腺苷（adenosine triphosphate，ATP）檢測試劑盒、RIPA裂解液（批號P0013）、PMSF（批號ST506）、SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液（批號P0015）購自碧云天生物技術(shù)有限公司；BCA蛋白檢測試劑盒（批號CW0014S）購自北京康為世紀(jì)生物科技有限公司；TRIzol?Reagent購自英國Invitrogen公司；The first strand cDNA synthesis kit購自美國Thermo Fisher Scientific公司；GoTaq?Qpcr Master Mix購自美國Promega公司；引物由上海生工生物工程有限公司設(shè)計并合成；ABCB1單克隆抗體（批號ab170904）、ABCC1單克隆抗體（批號ab180960）、ABCG2單克隆抗體（批號ab108312）購自英國Abcam公司；GAPDH單克隆抗體（批號E021010-01）購自美國ImmunoWay公司；山羊抗兔抗體（926-68071）、山羊抗鼠抗體（926-32210）購自美國LI-COR公司；其他試劑購自國藥集團(tuán)有限公司，均為分析純或色譜純。

1.3 儀器

CP225D電子天平（德國Sartorius公司）；Mill-Q超純水儀（美國Millipore公司）；倒置顯鏡（Nikon公司）；低溫離心機(jī)、5% CO2培養(yǎng)箱、生物安全柜、Nano Drop分光光度計（美國Thermo Fisher Scientific公司）；SpectraMax M2酶標(biāo)儀、FACSCalibur流式細(xì)胞儀（美國MD公司）；PCR儀（德國Eppendorf公司）；qRT-PCR儀、蛋白質(zhì)電泳及電轉(zhuǎn)移裝置（美國Bio-Rad公司）；奧德賽紅外熒光成像分析系統(tǒng)（美國LI-COR公司）。

2 方法

2.1 細(xì)胞培養(yǎng)

MCF-7細(xì)胞用含10%胎牛血清、1%雙抗、1%-谷氨酰胺的DMEM培養(yǎng)基，于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，MCF-7/ADR細(xì)胞另加入1.840 μmol/L鹽酸阿霉素維持耐藥性。當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到80%～90%，用胰酶消化后傳代。

2.2 MTT法考察丹參酮IIA對MCF-7和MCF-7/ADR細(xì)胞存活率的影響

取對數(shù)生長期的MCF-7和MCF-7/ADR細(xì)胞，PBS漂洗2次，胰酶消化后，1000 r/min離心5 min，用DMEM培養(yǎng)基重懸，以1×104/mL接種于96孔板，培養(yǎng)24 h。吸去培養(yǎng)基，每孔加入150 μL終濃度為0.034、0.170、0.340、0.680、1.700、3.400、17.000、34.000、68.000 μmol/L的丹參酮IIA溶液，另設(shè)空白組加入不含藥物的培養(yǎng)基，孵育48 h，棄去培養(yǎng)基，每孔加入100 μL MTT溶液（0.5 mg/mL），繼續(xù)培養(yǎng)4 h，棄去上清液，加入150 μL DMSO，搖床振搖10 min，用多功能酶標(biāo)儀測定570 nm處的吸光度（）值，計算細(xì)胞存活率。

細(xì)胞存活率＝(實驗－空白)/(對照－空白)

2.3 MTT法考察丹參酮IIA對MCF-7和MCF-7/ADR細(xì)胞阿霉素敏感性的影響

取對數(shù)生長期的MCF-7和MCF-7/ADR細(xì)胞，PBS漂洗2次，胰酶消化后，1000 r/min離心5 min，用DMEM培養(yǎng)基重懸，以1×104/mL接種于96孔板，培養(yǎng)24 h。吸去培養(yǎng)基，每孔加入150 μL終濃度為0.023、0.230、2.300、11.499、22.998、45.996、91.993、183.986 μmol/L的阿霉素溶液，或各濃度阿霉素聯(lián)合丹參酮IIA（0.034、0.340 μmol/L）、各濃度阿霉素聯(lián)合鹽酸維拉帕米（2.200 μmol/L）、各濃度阿霉素聯(lián)合Ko143（1.065 μmol/L），繼續(xù)孵育48 h。按“2.2”項下方法測定值，并計算半數(shù)抑制濃度（half inhibitory concentration，IC50）、耐藥逆轉(zhuǎn)倍數(shù)及耐藥指數(shù)。

耐藥逆轉(zhuǎn)倍數(shù)＝阿霉素IC50/聯(lián)合用藥IC50

耐藥指數(shù)＝MCF-7細(xì)胞IC50/(MCF-7/ADR細(xì)胞IC50)

2.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測丹參酮IIA對MCF-7/ADR細(xì)胞內(nèi)阿霉素蓄積的影響

MCF-7/ADR細(xì)胞以3×105/孔接種于6孔板，培養(yǎng)24 h。吸去培養(yǎng)基，PBS漂洗1次，設(shè)置對照組、丹參酮IIA（0.034、0.340 μmol/L）組、維拉帕米（2.200 μmol/L）組和Ko143（1.065 μmol/L）組，各給藥組加入1 mL含相應(yīng)藥物的DMEM培養(yǎng)基，預(yù)孵育1或3 h，棄去培養(yǎng)基，另加入1 mL含18.400 μmol/L阿霉素的上述各培養(yǎng)基繼續(xù)孵育4 h，對照組只加入含18.400 μmol/L阿霉素的培養(yǎng)基，吸去培養(yǎng)基，PBS洗3次，用250 μL胰酶消化2 min后，加入DMEM培養(yǎng)基終止消化，1000 r/min離心5 min，棄上清，冰PBS吹勻，1000 r/min離心5 min，PBS洗滌3次，過70 μm濾膜，加至96孔板，采用流式細(xì)胞儀測定阿霉素?zé)晒鈴?qiáng)度。

2.5 丹參酮IIA對MCF-7/ADR細(xì)胞ATP消耗的影響

取對數(shù)生長期的MCF-7/ADR細(xì)胞，以1×105/孔接種于24孔板，培養(yǎng)48 h，PBS洗3次，設(shè)置對照組、丹參酮IIA（0.340、1.700、3.400 μmol/L）組和維拉帕米（2.200 μmol/L）組，各組加入0.5 mL含相應(yīng)藥物的DMEM培養(yǎng)基，對照組加入不含藥物的培養(yǎng)基，培養(yǎng)48 h。按ATP檢測試劑盒說明書處理細(xì)胞，用酶標(biāo)儀化學(xué)發(fā)光模塊檢測相對光單位值，通過ATP標(biāo)準(zhǔn)曲線換算成ATP濃度，用BCA蛋白試劑盒檢測每孔細(xì)胞蛋白水平校正ATP濃度。

2.6 丹參酮IIA對MCF-7/ADR細(xì)胞相關(guān)基因表達(dá)的影響

MCF-7/ADR細(xì)胞以2.5×105/mL接種于6孔板，2 mL/孔，培養(yǎng)48 h，吸去培養(yǎng)基，PBS漂洗2次，設(shè)置對照組、丹參酮IIA（0.340、1.700、3.400 μmol/L）組和維拉帕米（2.200 μmol/L）組，各組加入1.5 mL含相應(yīng)藥物的DMEM培養(yǎng)基，對照組加入不含藥物的培養(yǎng)基，培養(yǎng)48 h。PBS洗3次，按照試劑盒說明書提取細(xì)胞總RNA并合成cDNA，進(jìn)行qRT-PCR分析。引物序列見表1。

表1 引物序列

2.7 丹參酮IIA對MCF-7/ADR細(xì)胞相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

MCF-7/ADR細(xì)胞以2.5×105/mL接種于25 cm2培養(yǎng)瓶，4 mL/瓶，培養(yǎng)48 h后，吸去培養(yǎng)基，PBS漂洗2次，設(shè)置對照組、丹參酮IIA（0.340、0.680、1.700、3.400 μmol/L）組和維拉帕米（2.200 μmol/L）組，各組加入4 mL含相應(yīng)藥物的DMEM培養(yǎng)基，對照組加入不含藥物的培養(yǎng)基，培養(yǎng)48 h。收集細(xì)胞，4 ℃、3000 r/min離心5 min，棄上清，加入150 μL RIPA裂解液（含cocktail蛋白酶抑制劑及PMSF），于冰上裂解30 min，4 ℃、12 000 r/min離心15 min，取上清，采用BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白質(zhì)量濃度，100 ℃煮沸10 min，于?70 ℃保存。蛋白樣品經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳，轉(zhuǎn)至PVDF膜，加入5%牛血清蛋白封閉1～2 h，分別加入ABCB1、ABCG2、ABCC1抗體（1∶1000）和GAPDH抗體（1∶5000），4 ℃搖床孵育過夜；加入熒光二抗（1∶5000），室溫避光孵育2 h，TBST緩沖液漂洗5次，8 min/次，采用紅外熒光成像分析系統(tǒng)掃描。

2.8 統(tǒng)計學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 丹參酮IIA對MCF-7和MCF-7/ADR細(xì)胞存活率的影響

如圖1所示，丹參酮IIA（17.000、34.000、68.000 μmol/L）作用于MCF-7細(xì)胞48 h后，MCF-7細(xì)胞存活率明顯降低；丹參酮IIA（0.680、1.700、3.400、17.000、34.000、68.000 μmol/L）作用于MCF-7/ADR細(xì)胞48 h后，MCF-7/ADR細(xì)胞存活率明顯降低。因此后續(xù)丹參酮IIA分別選取不高于0.340、3.400 μmol/L的濃度對MCF-7和MCF-7/ADR進(jìn)行實驗。

3.2 丹參酮IIA對MCF-7和MCF-7/ADR細(xì)胞阿霉素敏感性的影響

如表2所示，阿霉素分別作用于MCF-7和MCF-7/ADR細(xì)胞48 h后，IC50值分別為（1.799±0.109）μmol/L和（34.865±2.383）μmol/L，表明MCF-7/ADR細(xì)胞具備耐藥性。與阿霉素組比較，ABCB1經(jīng)典抑制劑維拉帕米、ABCG2選擇性抑制劑Ko143及丹參酮IIA均能引起MCF-7/ADR細(xì)胞阿霉素的IC50值顯著降低（＜0.05），0.034、0.340 μmol/L丹參酮IIA對MCF-7/ADR細(xì)胞多藥耐藥的逆轉(zhuǎn)倍數(shù)分別為1.473、2.510倍。維拉帕米、Ko143對MCF-7和MCF-7/ADR細(xì)胞活性的影響已在前期實驗經(jīng)過考察，本研究中所用濃度均為無毒劑量。結(jié)果提示丹參酮IIA可顯著增強(qiáng)MCF-7/ADR細(xì)胞對阿霉素的敏感性。

圖1 丹參酮IIA對MCF-7和MCF-7/ADR細(xì)胞增殖的影響(, n = 3)

表2 丹參酮IIA對MCF-7/ADR細(xì)胞的多藥耐藥逆轉(zhuǎn)作用(, n = 3)

與阿霉素組比較：*＜0.05**＜0.01

*<0.05**<0.01doxorubicin group

3.3 丹參酮IIA對MCF-7/ADR細(xì)胞內(nèi)阿霉素蓄積的影響

如圖2所示，孵育時間為1 h時，維拉帕米、Ko143均能顯著增加MCF-7/ADR細(xì)胞內(nèi)阿霉素蓄積（＜0.05），丹參酮IIA對MCF-7/ADR細(xì)胞內(nèi)阿霉素蓄積作用不明顯。當(dāng)孵育時間延長至3 h時，各給藥組MCF-7/ADR細(xì)胞內(nèi)阿霉素蓄積量均顯著升高（＜0.05、0.01），維拉帕米對MCF-7/ADR細(xì)胞內(nèi)阿霉素蓄積作用最明顯，Ko143的作用最弱，結(jié)果與多藥耐藥逆轉(zhuǎn)實驗基本一致。

3.4 丹參酮IIA對MCF-7/ADR細(xì)胞ATP消耗的影響

ABC轉(zhuǎn)運蛋白利用ATP作為能量來源介導(dǎo)轉(zhuǎn)運，細(xì)胞內(nèi)ATP消耗結(jié)果見圖3，丹參酮IIA（0.340、1.700、3.400 μmol/L）處理MCF-7/ADR細(xì)胞后，胞內(nèi)ATP消耗量顯著降低（＜0.05），呈劑量相關(guān)性，提示丹參酮IIA可能對包括ABCB1在內(nèi)的多種ABC轉(zhuǎn)運蛋白均有抑制作用。

3.5 丹參酮IIA對MCF-7/ADR細(xì)胞ABCB1、ABCC1和ABCG2基因表達(dá)的影響

如圖4所示，與對照組比較，丹參酮IIA（3.400 μmol/L）組MCF-7/ADR細(xì)胞mRNA表達(dá)水平顯著降低（＜0.05），丹參酮IIA（0.340、1.700、3.400 μmol/L）組MCF-7/ADR細(xì)胞mRNA表達(dá)水平顯著降低（＜0.01），丹參酮IIA（1.700、3.400 μmol/L）組MCF-7/ADR細(xì)胞mRNA表達(dá)水平顯著降低（＜0.01），提示丹參酮IIA對MCF-7/ADR細(xì)胞多藥耐藥的逆轉(zhuǎn)作用可能與下調(diào)和mRNA表達(dá)有關(guān)。

與對照組比較：*P＜0.05 **P＜0.01，下圖同

圖3 丹參酮IIA對MCF-7/ADR細(xì)胞內(nèi)ATP消耗的影響(, n = 3)

3.6 丹參酮IIA對MCF-7/ADR細(xì)胞ABCB1、ABCC1和ABCG2蛋白表達(dá)的影響

如圖5所示，與對照組比較，丹參酮IIA（0.340、0.680、1.700、3.400 μmol/L）組MCF-7/ADR細(xì)胞ABCG2蛋白表達(dá)水平顯著降低（＜0.05），丹參酮IIA（1.700、3.400 μmol/L）組MCF-7/ADR細(xì)胞ABCC1蛋白表達(dá)水平顯著降低（＜0.05），丹參酮IIA對MCF-7/ADR細(xì)胞ABCB1蛋白表達(dá)無明顯影響，提示丹參酮IIA逆轉(zhuǎn)MCF-7/ADR細(xì)胞的多藥耐藥作用與抑制ABCG2和ABCC1蛋白表達(dá)有關(guān)。

圖4 丹參酮IIA對MCF-7/ADR細(xì)胞ABCB1、ABCG2和ABCC1mRNA表達(dá)的影響(, n = 3)

4 討論

隨著我國對中醫(yī)藥傳承創(chuàng)新發(fā)展的重視，探索中藥聯(lián)合化療藥物的療效及作用機(jī)制將是抗腫瘤的發(fā)展方向之一。研究表明，丹參酮IIA對阿霉素誘導(dǎo)的心臟毒性具有保護(hù)作用[17]；阿霉素與丹參酮IIA可協(xié)同抑制肝癌HepG2細(xì)胞[22]；丹參酮IIA具有一定的多藥耐藥逆轉(zhuǎn)作用，可通過下調(diào)結(jié)腸癌細(xì)胞ABCB1表達(dá)從而增強(qiáng)5-氟尿嘧啶的抗癌活性[23]；丹參酮IIA能夠通過抑制胎盤ABCB1的表達(dá)而降低其外排功能[24]，降低ABCB1、DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶II（topoisomerase II，TOPO II）的表達(dá)逆轉(zhuǎn)小鼠Lewis肺癌獲得性多藥耐藥性（耐阿霉素）[25]。丹參酮IIA對人ER陰性乳腺癌細(xì)胞具有多藥耐藥逆轉(zhuǎn)作用，其作用機(jī)制可能與下調(diào)多藥耐藥基因表達(dá)有關(guān)[26]。丹參酮IIA可通過抑制ABCC1的活性增強(qiáng)阿霉素對耐藥胃癌細(xì)胞的抗癌作用[27]。本研究通過聯(lián)用丹參酮IIA與阿霉素，考察其對MCF-7/ADR細(xì)胞多藥耐藥的逆轉(zhuǎn)作用及機(jī)制。

圖5 丹參酮IIA對MCF-7/ADR細(xì)胞ABCB1、ABCG2和ABCC1蛋白表達(dá)的影響(, n = 3)

本研究發(fā)現(xiàn)，丹參酮IIA對MCF-7和MCF-7/ADR細(xì)胞具有一定的抗腫瘤活性，并且丹參酮IIA聯(lián)合阿霉素能夠有效逆轉(zhuǎn)MCF-7/ADR細(xì)胞的多藥耐藥性。維拉帕米是ABCB1轉(zhuǎn)運蛋白的底物，能夠與抗癌藥物競爭ABCB1轉(zhuǎn)運蛋白，抑制其外排，從而逆轉(zhuǎn)多藥耐藥[28]，Ko143是ABCG2的抑制劑[29]，因此在MCF-7/ADR細(xì)胞耐藥逆轉(zhuǎn)實驗中分別選擇維拉帕米和Ko143作為陽性對照藥物，結(jié)果顯示，維拉帕米的耐藥逆轉(zhuǎn)倍數(shù)最高，Ko143的耐藥逆轉(zhuǎn)倍數(shù)最低，而丹參酮IIA的逆轉(zhuǎn)倍數(shù)界于二者之間。阿霉素攝取實驗結(jié)果與耐藥逆轉(zhuǎn)實驗基本一致，提示阿霉素雖然是多種ABC轉(zhuǎn)運蛋白的底物，但MCF-7/ADR細(xì)胞對其耐藥的最主要原因可能是ABCB1介導(dǎo)的轉(zhuǎn)運作用，丹參酮IIA逆轉(zhuǎn)MCF-7/ADR細(xì)胞阿霉素耐藥的主要作用機(jī)制可能與其競爭性抑制ABCB1對阿霉素的外排作用有關(guān)，但也不排除丹參酮IIA對多種ABC轉(zhuǎn)運蛋白均有一定的綜合下調(diào)作用。

為了進(jìn)一步探討丹參酮IIA逆轉(zhuǎn)MCF-7/ADR細(xì)胞多藥耐藥的作用機(jī)制，考察丹參酮IIA對MCF-7/ADR細(xì)胞、、基因和蛋白表達(dá)的影響，發(fā)現(xiàn)MCF-7/ADR細(xì)胞中、、基因和蛋白表達(dá)顯著升高，丹參酮IIA對和mRNA和蛋白表達(dá)均有明顯的下調(diào)作用，但對ABCB1的下調(diào)作用不明顯。對于ABCB1介導(dǎo)的調(diào)控，推測丹參酮IIA可能發(fā)揮了維拉帕米類似的與抗癌藥物競爭ABCB1引起外排抑制的作用。以上研究表明，丹參酮IIA能夠通過調(diào)控多種ABC轉(zhuǎn)運體尤其是和基因和蛋白表達(dá)，逆轉(zhuǎn)MCF-7/ADR細(xì)胞的多藥耐藥性。

丹參酮IIA是中藥丹參中天然的抗腫瘤成分[30]，本研究表明，丹參酮IIA對于有效逆轉(zhuǎn)化療中出現(xiàn)的多藥耐藥現(xiàn)象提供了一種新的策略，其有可能作為一種潛在化療增敏劑用于治療乳腺癌，對于腫瘤的臨床治療具有重要意義。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Reversal effect and mechanism of tanshinone IIA on multidrug resistance of doxorubicin-resistant human breast cancer cells

NING Yu-ming1, PAN Yi-fan1, LI Fan-zhu2

1.Hangzhou Fuyang Women and Children Hospital, Hangzhou 311400, China 2.College of Pharmaceutical Science, Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou 311400, China

To study the reversal effect of tanshinone IIAon multidrug resistance of doxorubicin-resistant human breast cancer cells MCF-7/ADR and related mechanisms.Human breast cancer MCF-7 cells and MCF-7/ADR cells were respectively treated with tanshinone IIA, doxorubicin, doxorubicin + tanshinone IIA, cell proliferation rate was detected by MTT method; Doxorubicin accumulation in MCF-7/ADR cells after tanshinone IIAintervention was detected by flow cytometry; Change of adenosine triphosphate (ATP) consumption in MCF-7/ADR cells after tanshinone IIAintervention was detected; qRT-PCR and Western blotting were used to detect ATP-binding cassette transporter B1 (),andgenes and protein expressions in MCF-7/ADR cells after tanshinone IIAintervention.Tanshinone IIAsignificantly inhibited the cell proliferation of MCF-7 and MCF-7/ADR cells (< 0.05), with dose-dependent; Tanshinone IIAreversed the multidrug resistance of MCF-7/ADR cells (< 0.05), increased the accumulation of doxorubicin in MCF-7/ADR cells (< 0.05), reduced the ATP consumption of MCF-7/ADR cells (< 0.05), down-regulated the expressions ofandgenes and proteins (< 0.05).Tanshinone IIAcan reverse the multidrug resistance of MCF-7/ADR cells by regulating the transport mediated by ABCG2 and ABCC1.

tanshinone IIA; doxorubicin; breast cancer; multidrug resistance; ABC transporter

R285.5

A

0253 - 2670(2021)22 - 6890 - 07

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.22.014

2021-06-17

杭州市科技計劃項目（20171226Y187）

寧玉明（1976—），女，博士，研究方向為藥物新劑型及藥物臨床應(yīng)用研究。Tel: 13968190002 E-mail: cndnym@163.com

[責(zé)任編輯 李亞楠]