施裔磊 俞曉燕

(上海美加凈日化有限公司，上海 200333)

1 研究背景

1.1 o-傘花烴-5-醇簡(jiǎn)介

o-傘花烴-5-醇(IPMP)，又名3-甲基-4-異丙基苯酚，分子式為C10H14O，摩爾質(zhì)量為150.22g/mol，常溫下為無(wú)色或白色針狀晶體，易溶于甲醇、乙醇和異丙醇，可溶于乙二醇和丙二醇，不溶于水。IPMP目前作為一種抑菌劑被廣泛應(yīng)用于牙膏、漱口水、化妝品、藥品等領(lǐng)域。

o-傘花烴-5-醇為源自于唇形科植物的天然提取物，為香精油的主要成分。由于生物膜表面的油質(zhì)作用，傳統(tǒng)的殺菌藥物難以滲透至生物膜深處，故只能殺死表層細(xì)菌，無(wú)法對(duì)牙菌斑深處的細(xì)菌進(jìn)行深層殺滅[1]。IPMP因與其疏水性、電解特性和摩爾質(zhì)量有關(guān)的特性，可以穿透至菌斑深層進(jìn)行抗菌作用，能夠迅速浸入到菌膜內(nèi)， 具有良好的滲透作用，用于牙膏中有抗牙菌斑、清新口氣、保持牙齦健康的作用。經(jīng)研究分析，IPMP能夠直接作用于口腔細(xì)菌的生化反應(yīng)酶或其他活性物質(zhì)，從而影響細(xì)胞內(nèi)酶的活性，降低酶活性或者直接使酶失活，最終導(dǎo)致細(xì)胞停止生長(zhǎng)、細(xì)菌死亡[2]。

Karkar等[3]對(duì)含0.1% o-傘花烴-5-醇/0.6%氯化鋅牙膏的護(hù)齦效果進(jìn)行了研究。由224位受試者參與的臨床實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，每天早晚兩次使用該牙膏，連續(xù)刷牙6周和12周后，與使用傳統(tǒng)含氟牙膏(含氟化鈉0.204%)的受試者相比，使用含0.1%o-傘花烴-5-醇/0.6%氯化鋅刷牙的受試者在6周和12周時(shí)，牙齦指數(shù)(GI)、出血指數(shù)(BI)及菌斑指數(shù)(PI)較前者均降低了12.3%、18.5%和13.2%及38.1%、37.8%和24.2%，并具有顯著性差異。

陳雯杰等[1]采用懸液定量殺菌實(shí)驗(yàn)方法，對(duì)IPMP殺滅金黃色葡萄球菌的效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果以含5000 mg/L IPMP與50%二甲亞砜水溶液對(duì)懸液內(nèi)金黃色葡萄球菌作用 5min，或5 000 mg/L IPMP溶液對(duì)懸液內(nèi)金黃色葡萄球菌 15min，殺滅對(duì)數(shù)值均>5.00。結(jié)果表明 o-傘花烴-5-醇/二甲亞砜水溶液可有效殺滅金黃色葡萄球菌。陳敏珊等[4]研究將o-傘花烴-5-醇與葡萄柚提取物復(fù)配組合，并應(yīng)用到牙膏等產(chǎn)品中。二者的聯(lián)合使用對(duì)抑制大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和變異鏈球菌均具有相加作用，特別是對(duì)抑制變異鏈球菌的相加作用明顯。

1.2 o-傘花烴-5-醇的安全性

o-傘花烴-5-醇是一種安全性較高的化合物。經(jīng)美國(guó)化妝品審查專(zhuān)家小組(CIR)評(píng)估[5,6]，小鼠急性經(jīng)口毒性LD50為2.2g/(kg·bw)，屬于低毒物質(zhì)；采用含1%IPMP的凡士林對(duì)家兔進(jìn)行眼刺激實(shí)驗(yàn)，4h內(nèi)家兔結(jié)膜有輕微充血，24h內(nèi)與對(duì)照組的結(jié)果相似，屬微刺激性；采用含10%IPMP乙醇溶液對(duì)豚鼠進(jìn)行皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)，在皮膚表皮每天涂抹0.3mL劑量的受試物，連續(xù)3天，觀察涂抹部位皮膚反應(yīng)，皮膚刺激反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)為0～4分，結(jié)果含10% IPMP乙醇溶液的得分為0.22，刺激性極低。對(duì)53名女性受試者皮膚刺激性臨床實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，皮膚經(jīng)涂抹含0.1%及1.0%的凡士林，24h后涂抹部位皮膚未出現(xiàn)刺激反應(yīng)；對(duì)27名男性受試者皮膚致敏性臨床實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)同樣顯示，o-傘花烴-5-醇對(duì)皮膚的致敏強(qiáng)度極弱。同時(shí)，還有許多研究對(duì) IPMP 的急性腸外毒性、短期口服毒性、短期腸外毒性、亞慢性口服毒性、和致突變毒性等方面進(jìn)行評(píng)估，CIR專(zhuān)家小組得出化妝品中o-傘花烴-5-醇含量在0.5%的上限范圍內(nèi)使用是安全的。

目前，國(guó)內(nèi)外相關(guān)法規(guī)如《化妝品安全技術(shù)規(guī)范(2015版)》、《牙膏用原料規(guī)范(GB22115)》、《歐盟化妝品法規(guī) (EC)No 1223/2009》等均對(duì)o-傘花烴-5-醇在化妝品、牙膏等產(chǎn)品中作為防腐劑使用時(shí)的用量進(jìn)行了規(guī)定，其在產(chǎn)品中的最大允許使用濃度均為0.1%。在日本，o-傘花烴-5-醇被作為一種抑菌成分廣泛用于藥品和日化產(chǎn)品中。其中，在牙膏等口腔健康產(chǎn)品中的最大允許濃度為0.05%。IPMP被FDA批準(zhǔn)作為一種直接或間接的食品添加劑使用，CIR專(zhuān)家小組批準(zhǔn)在化妝品中的使用濃度限制為0.5%。

1.3 研究現(xiàn)狀

目前，關(guān)于o-傘花烴-5-醇含量的檢測(cè)方法主要有氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法液和高效液相色譜法等。孫宗喜等[7]通過(guò)氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)聯(lián)用技術(shù)對(duì)柴胡根莖中的揮發(fā)油成分進(jìn)行了分析和鑒定。結(jié)果顯示，柴胡根和莖兩部位共鑒定出了正己醛、2-戊基呋喃、棕櫚酸、麝香草酚、o-傘花烴-5醇等95中化合物。其中，o-傘花烴-5-醇主要存在于柴胡的根中，采用GC-MS的方法進(jìn)行定量分析，其含量為8.31%，是柴胡根揮發(fā)油中的主要化學(xué)成分之一。采用該方法研究得出，甘肅與湖北、河南等地所產(chǎn)柴胡揮發(fā)油在化合物種類(lèi)和揮發(fā)油和含量上有較大的差異，為中草藥化學(xué)組分的定性定量研究提供了科學(xué)的分析手段。

王娟等[8]研究用高效液相色譜儀來(lái)檢測(cè)洗手液中3-甲基-4-異丙基苯酚(o-傘花烴-5-醇)的含量，該方法操作簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確快速，可以直接配制樣品溶液檢測(cè)，不需要樣品前處理。其最低定量檢測(cè)濃度為10mg/kg，相關(guān)系數(shù)R2=0.9997，o-傘花烴-5-醇在1μg/mL～200μg/mL的濃度范圍內(nèi)線性相關(guān)，回收率范圍為98%～100%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.125%，表明該方法具有很好的準(zhǔn)確度和可靠性。夏澤敏等[9]研究用高效液相色譜法測(cè)定化妝水、潔面乳及美白霜等化妝品中o-傘花烴-5-醇的含量，采用甲醇溶解樣品，離心分離并過(guò)濾后直接進(jìn)樣分析，方法操作簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確度高，適用于不同配方體系化妝品中o-傘花烴-5-醇含量的檢測(cè)，對(duì)規(guī)范化妝品中防腐劑的使用及保障消費(fèi)者的健康安全有著積極的意義。

高效液相色譜法由于對(duì)高沸點(diǎn)，強(qiáng)極性，熱不穩(wěn)定，大分子復(fù)雜混合物的分離分析具有氣相色譜法無(wú)法比擬的優(yōu)勢(shì)，因而其研究及應(yīng)用更為廣泛。本方法提出的高效液相色譜測(cè)定口腔清潔護(hù)理產(chǎn)品中o-傘花烴-5-醇含量的方法，相比其他檢測(cè)方法，具有前處理簡(jiǎn)單、定性定量準(zhǔn)確、檢測(cè)結(jié)果不易受雜質(zhì)或色澤干擾等諸多優(yōu)點(diǎn)，與氣質(zhì)聯(lián)用儀相比，液相色譜儀價(jià)格更加低廉，性?xún)r(jià)比較高，更適合在口腔護(hù)理用品生產(chǎn)企業(yè)和第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)中推廣使用。

2 實(shí)驗(yàn)原理

牙膏樣品用50%甲醇水溶液分散，經(jīng)超聲提取其中o-傘花烴-5-醇成分，然后離心分離并過(guò)濾處理，濾液用帶二極管陣列檢測(cè)器的高效液相色譜儀分析測(cè)定，采用外標(biāo)法，通過(guò)峰面積定量計(jì)算樣品中o-傘花烴-5-醇的含量。

3 分析條件的選擇與優(yōu)化

3.1 提取溶劑的選擇

o-傘花烴-5-醇不溶于水，而牙膏試樣在水溶液中經(jīng)磁力攪拌和超聲提取后，易于分散。若采用純水作為本方法的提取溶劑，雖然可以將牙膏試樣較好地分散，但純水不能起到完全溶解o-傘花烴-5-醇的目的；另外，由于牙膏試樣遇到甲醇會(huì)在表面形成硬殼，很難提取到牙膏內(nèi)部，所以純甲醇溶液也不適合作為本方法的提取溶劑。

所以，既要考慮到可以較好的溶解對(duì)照品，又要考慮到可以將牙膏試樣分散并提取其中o-傘花烴-5-醇的目的，本方法最終選用甲醇/水溶液體系作為本方法的提取溶劑。

3.1.1 提取溶劑濃度的確立

由于牙膏中含有大量的增稠劑，用水分散時(shí)，水比例大時(shí)，一些增稠劑溶于水中，不利于微孔濾膜過(guò)濾；水比例小，又不利于牙膏分散均勻。為確定甲醇/水溶液最佳比例，稱(chēng)取1.0g(精確至0.0001g)牙膏試樣于100mL容量瓶中，用0% ～ 100%甲醇水溶液溶解并定容至刻度，磁力攪拌至均勻，超聲提取10min后觀察其溶解及分散情況。如表1所示，在50%甲醇水溶液中，o-傘花烴-5-醇對(duì)照品為略溶(1g“o-傘花烴-5-醇”在100mL的溶劑中溶解)，且該溶劑也可將牙膏試樣較好的分散開(kāi)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果較為理想。

表1 對(duì)照品及牙膏試樣的溶解性

3.1.2 提取時(shí)間的確立

采用磁力攪拌的方式將牙膏溶液攪拌至均勻，后放入超聲波清洗器中進(jìn)行超聲提取。超聲提取5min，10min，20min，30min，60min，測(cè)定峰面積。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，將試樣溶液超聲10min后，在本方法色譜條件下，o-傘花烴-5-醇的峰面積幾乎沒(méi)有變化，可以達(dá)到提取平衡，所以最終選擇10min作為本方法牙膏樣品中目標(biāo)物質(zhì)的提取時(shí)間。

3.1.3 最終選擇的前處理?xiàng)l件

牙膏試樣：先擠去約20mm，再稱(chēng)取1g(精確至 0.0001g)試樣于100mL燒杯中，用約80mL 50%甲醇水溶液溶解，磁力攪拌至分散均勻，超聲提取10min后，轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用50%甲醇水溶液定容至刻度。搖勻后，將試樣溶液轉(zhuǎn)移至50mL離心管中，4000r/min以上離心分離10min。冷卻至室溫后，上清液經(jīng)0.45μm有機(jī)相濾膜過(guò)濾，備用。

漱口水試樣：稱(chēng)取1g(精確至0.0001g)試樣于100mL容量瓶中，用50%甲醇水溶液溶解并定容至刻度。搖勻后，上清液經(jīng)0.45μm有機(jī)相濾膜過(guò)濾，備用。

3.2 檢測(cè)器及檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

液相色譜連接的檢測(cè)器有示差折光檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器、質(zhì)譜檢測(cè)器、紫外檢測(cè)器等。示差檢測(cè)器通用性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)單，凡是具有與流動(dòng)相折光率不同的試樣組分，均可使用示差折光檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，但靈敏度低，流動(dòng)相、環(huán)境溫度的變化會(huì)引起折光率的變化，因此，它既不適用于痕量分析，也不適用于需要梯度洗脫試樣的檢測(cè)。質(zhì)譜檢測(cè)器靈敏度高，定性定量準(zhǔn)確，但價(jià)格比較昂貴，難以在中小企業(yè)得到推廣。熒光檢測(cè)器只適用于具有熒光的有機(jī)化合物的檢測(cè)，也不適合牙膏中，o-傘花烴-5-醇的檢測(cè)。

紫外檢測(cè)器是一種比較普及的檢測(cè)器，適用于對(duì)紫外光或可見(jiàn)光有吸收性能試樣的檢測(cè)。其特點(diǎn)：使用面廣、靈敏度高(檢測(cè)下限為10g/mL)、對(duì)溫度和流速變化不敏感、線性范圍寬、可檢測(cè)梯度溶液洗脫的試樣。

按照本方法的色譜條件，在190～400nm下進(jìn)行紫外掃描，如圖1所示，o-傘花烴-5-醇在195nm、216nm及279nm均有最大的吸收，由于在195nm及217nm波長(zhǎng)處如甲醇溶劑等干擾物質(zhì)吸收較多，出峰情況較為復(fù)雜，易對(duì)測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生干擾。同時(shí)，考慮到牙膏試樣組分復(fù)雜，為了能準(zhǔn)確測(cè)定其含量，選擇279nm作為紫外檢測(cè)器的檢測(cè)波長(zhǎng)。

圖1 對(duì)照品o-傘花烴-5-醇的紫外掃描譜圖

3.3 流動(dòng)相條件的選擇

3.3.1 水相的選擇

在反相色譜中，在流動(dòng)相中加入磷酸二氫鉀，能使流動(dòng)相保持一定的離子強(qiáng)度，可改善峰型，減少拖尾。但鹽濃度過(guò)高，又容易損傷色譜柱?；谖墨I(xiàn)資料，選擇乙腈作為有機(jī)相，磷酸二氫鉀緩沖溶液作為水相，比較不同濃度及pH條件磷酸二氫鉀緩沖溶液對(duì)o-傘花烴-5-醇峰形的影響。

如表2所示，當(dāng)磷酸二氫鉀緩沖溶液濃度為10mmol/L時(shí)，目標(biāo)峰的不對(duì)稱(chēng)度為0.99，已經(jīng)達(dá)到了實(shí)驗(yàn)的要求；如表3所示，當(dāng)pH值在3.5～4.7的范圍內(nèi)，磷酸二氫鉀緩沖溶液對(duì)色譜峰與溶劑峰的分離度沒(méi)有明顯的影響，所以，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中無(wú)需在對(duì)10mmol的磷酸二氫鉀緩沖溶液的pH值進(jìn)行調(diào)整。綜合表2及表3的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，本方法流動(dòng)相中最終選擇的水相條件為：磷酸二氫鉀緩沖溶液(10mmol/L)。

表2 磷酸二氫鉀緩沖溶液濃度對(duì)o-傘花烴-5-醇色譜峰不對(duì)稱(chēng)度的影響

表3 不同流動(dòng)相pH對(duì)于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響

3.3.2 有機(jī)相的選擇

固定水相為10 mmol/L磷酸二氫鉀緩沖溶液，分別比較采用有機(jī)相乙腈和甲醇時(shí)的出峰情況。發(fā)現(xiàn)乙腈比甲醇有較好的洗脫性，出峰情況也更佳。故本方法選擇乙腈作為流動(dòng)相中的有機(jī)相。

3.3.3 流動(dòng)相比例的選擇

調(diào)節(jié)流動(dòng)相中有機(jī)相與水相的比例可改變“目標(biāo)物質(zhì)”出峰的時(shí)間及峰形。為此，考察了流動(dòng)相體系中“乙腈”與“磷酸二氫鉀緩沖溶液(10mmol/L)”的比例對(duì)o-傘花烴-5-醇出峰情況的影響。當(dāng)流動(dòng)相中乙腈∶磷酸二氫鉀緩沖溶液(10mmol/L)=38∶62(V/V)時(shí)，o-傘花烴-5-醇色譜峰與溶劑峰的分離情況較好，o-傘花烴-5-醇的出峰時(shí)間約為15.0min左右。綜合考慮各個(gè)因素，最終選擇乙腈∶磷酸二氫鉀緩沖溶液(10mmol/L)=38∶62(V/V)時(shí)，流量為1.5mL/min時(shí)，即可以達(dá)到較理想的分離效果。

3.4 色譜條件的優(yōu)化

按照3.1～3.3確立的色譜條件，對(duì)照品色譜圖如圖2所示，分析一個(gè)o-傘花烴-5-醇對(duì)照品溶液需要的時(shí)間為16min。

圖2 對(duì)照品液相色譜圖(等度洗脫)

由于牙膏配方體系復(fù)雜，在用以上色譜條件分析市售不含o-傘花烴-5-醇的陰性牙膏試樣時(shí)發(fā)現(xiàn)，在20min左右會(huì)有一個(gè)很大的“雜質(zhì)峰”(如圖3所示)；另外，通過(guò)分析市售的其他約40款陽(yáng)性和陰性牙膏試樣的色譜峰發(fā)現(xiàn)，在20min左右均會(huì)出現(xiàn)該“雜質(zhì)”色譜峰，說(shuō)明該“雜質(zhì)”為牙膏體系中的主要成分，具有普遍性。在本方法中，若將“牙膏試樣”的進(jìn)樣時(shí)間定為16min，則在“牙膏試樣”連續(xù)進(jìn)樣的過(guò)程中，牙膏試樣中目標(biāo)物質(zhì)的色譜峰會(huì)受到前面幾針未出盡的“雜質(zhì)峰”的影響，從而影響了方法的精密度；若將“牙膏試樣”的進(jìn)樣時(shí)間定為60min以上，則分析時(shí)間太長(zhǎng)，降低了工作效率。

圖3 陰性牙膏試樣液相色譜圖(梯度洗脫)

所以，在連續(xù)進(jìn)樣時(shí)，為了使組分復(fù)雜的樣品不干擾下一個(gè)樣品檢測(cè)，同時(shí)，也為了加快分析樣品的時(shí)間，使得“等度洗脫”時(shí)“20min”出現(xiàn)的“雜質(zhì)峰”盡快走出色譜柱，采用梯度洗脫的方式(如表4所示)，35min即可分析一個(gè)樣品，提高了檢測(cè)效率。

表4 梯度洗脫程序

按照表4中的梯度洗脫程序，市售含o-傘花烴-5-醇的牙膏試樣及口腔噴霧劑產(chǎn)品的色譜圖分別如圖4、圖5所示。

圖4 市售某含“o-傘花烴-5-醇”牙膏試樣液相色譜圖(梯度洗脫)

圖5 市售某含“o-傘花烴-5-醇”口腔噴霧劑液相色譜圖(梯度洗脫 )

3.5 最終儀器條件

液相色譜柱參數(shù)：Dionex AcclaimTM 120型C18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)及配套保護(hù)柱(4.0mm×10mm，5μm)；檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器；檢測(cè)波長(zhǎng)：279nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：20μL。o-傘花烴-5-醇對(duì)照品用等度洗脫方式分析，牙膏試樣用梯度洗脫方式分析，洗脫程序如表4。

3.6 方法性能指標(biāo)

3.6.1 方法的線性關(guān)系

分別配制濃度為1.0μg/mL，2.5μg/mL，5.0μg/mL，7.5μg/mL，10.0μg/mL，12.5μg/mL，15.0μg/mL，在本方法的色譜條件下進(jìn)樣檢測(cè)，并以o-傘花烴-5-醇對(duì)照品質(zhì)量濃度(X)為橫坐標(biāo)，峰面積(Y)為縱坐標(biāo)作圖，同時(shí)用最小二乘法進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)工作曲線及回歸方程見(jiàn)表5，圖6。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在1.00～15.0μg/mL的濃度范圍內(nèi)，對(duì)照品質(zhì)量濃度與峰面積值具有良好的線性關(guān)系。

表5 對(duì)照品o-傘花烴-5-醇的回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性范圍

圖6 對(duì)照品o-傘花烴-5-醇標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

3.6.2 對(duì)照品穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

配制濃度約為 10.0μg/mL 的o-傘花烴-5-醇對(duì)照品溶液，考察對(duì)照品濃度在10日內(nèi)的穩(wěn)定性。如表6所示，對(duì)照品溶液中o-傘花烴-5-醇含量10日內(nèi)測(cè)定結(jié)果的RSD為0.75%，說(shuō)明對(duì)照品溶液存放一周后其o-傘花烴-5-醇含量仍然比較穩(wěn)定。

表6 o-傘花烴-5-醇對(duì)照品(10.0μg/mL)10日穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

3.6.3 方法的最低檢出濃度和最低定量濃度的確定

將對(duì)照品溶液稀釋進(jìn)樣，測(cè)定峰高信噪比為10∶1時(shí)o-傘花烴-5-醇濃度確定為方法的定量濃度；測(cè)定峰高信噪比為3∶1時(shí)添加的o-傘花烴-5-醇濃度確定為方法的檢出濃度。

向不含o-傘花烴-5-醇的陰性牙膏試樣中定量添加標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照前處理方法處理后，測(cè)定峰高信噪比為10∶1時(shí)o-傘花烴-5-醇濃度確定為方法的定量限；測(cè)定峰高信噪比為3∶1時(shí)添加的o-傘花烴-5-醇濃度確定為方法的檢出限。以上測(cè)定結(jié)果如表7所示。

表7 方法的檢出限、定量限、檢出濃度和定量濃度

3.6.4 系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)

精密吸取同一濃度為 10.0μg/mL 的ο-傘花烴-5-醇對(duì)照品溶液，在本色譜條件下，連續(xù)6次進(jìn)樣(等度洗脫)，測(cè)定其峰面積及保留時(shí)間。結(jié)果顯示，ο-傘花烴-5-醇峰面積的RSD為0.20%，保留時(shí)間的RSD為0.06%。

3.6.5 方法的精密度

精密稱(chēng)取某含ο-傘花烴-5-醇的市售牙膏試樣1份，每份約1g(精確至0.0001g)，按前處理?xiàng)l件處理后，連續(xù) 6次進(jìn)樣(梯度洗脫)，測(cè)定目標(biāo)峰其峰面積及保留時(shí)間。結(jié)果顯示，牙膏中ο-傘花烴-5-醇峰面積的RSD為0.91%，保留時(shí)間的RSD為0.36%，牙膏樣品中目標(biāo)物質(zhì)含量的RSD為0.92%。

精密稱(chēng)取某含ο-傘花烴-5-醇的牙膏試樣6份，每份約1g(精確至0.0001g)，按前處理?xiàng)l件處理后，按本方法確定的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得試樣中ο-傘花烴-5-醇的平均含量為440.1μg/g，RSD為1.63%。

3.6.6 方法的加標(biāo)回收率

目前國(guó)內(nèi)市售牙膏樣品配方中的磨擦劑體系主要分為碳酸鈣、二氧化硅及磷酸氫鈣三種。為考察本方法對(duì)不同磨擦劑體系牙膏樣品的適用性和檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，選取三種具有代表性的市售陰性牙膏試樣，分別進(jìn)行低、中、高三個(gè)添加水平的加標(biāo)回收率試驗(yàn)，按照本方法的前處理?xiàng)l件及色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率，如表8所示，o-傘花烴-5-醇在添加濃度100～400mg/kg范圍內(nèi)，回收率在98.42%～101.39%之間。

表8 牙膏試樣加標(biāo)回收率試驗(yàn)結(jié)果

3.6.7 干擾因素的排除

麝香草酚，又名2-異丙基-5-甲基苯酚，是我國(guó)《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)(GB2760)》中允許使用的食品香料。在牙膏、漱口水等香精中也會(huì)添加使用。麝香草酚與o-傘花烴-5-醇為同分異構(gòu)體，為考察本方法色譜條件下，麝香草酚的出峰情況是否會(huì)對(duì)目標(biāo)物產(chǎn)生干擾，對(duì)以上兩種物質(zhì)進(jìn)行了色譜分析，考察兩種物質(zhì)在同一色譜條件下的分離情況。如圖7所示。

圖7 本方法條件下目標(biāo)物與麝香草酚的分離情況

在本方法色譜條件下，o-傘花烴-5-醇與麝香草酚可以完全分離，所以，樣品中麝香草酚的存在不會(huì)影響本方法中目標(biāo)物質(zhì)的檢測(cè)。

4 結(jié)果與討論

4.1 市售口腔護(hù)理產(chǎn)品中o-傘花烴-5-醇含量的檢測(cè)

牙膏，漱口水等口腔護(hù)理產(chǎn)品配方成分復(fù)雜，各企業(yè)產(chǎn)品配方，所用原料等都不盡相同。為驗(yàn)證在本色譜條件下，對(duì)于不同配方體系牙膏等產(chǎn)品，是否存在影響目標(biāo)物質(zhì)檢測(cè)的干擾因素，收集了市場(chǎng)上具有代表性的45款牙膏、漱口水和口腔噴霧劑產(chǎn)品。其中1款牙膏及1款口腔噴霧劑包裝的成分表上標(biāo)注添加“o-傘花烴-5-醇”成分，另外43款產(chǎn)品的成分表上未標(biāo)注。

檢測(cè)結(jié)果顯示，1款牙膏中o-傘花烴-5-醇的含量為440.0mg/kg，1款口腔噴霧劑中的含量為185.8mg/kg，另外43款產(chǎn)品中o-傘花烴-5-醇的含量為“未檢出”。以上檢測(cè)結(jié)果與產(chǎn)品成分信息一致，且符合國(guó)家相關(guān)法律法規(guī)中對(duì)于o-傘花烴-5-醇限量使用的要求。同時(shí)，也驗(yàn)證了本方法對(duì)于不同配方體系口腔護(hù)理產(chǎn)品的適用性。

4.2 方法驗(yàn)證

為考察在本方法色譜條件下，在不同實(shí)驗(yàn)室及操作環(huán)境下實(shí)驗(yàn)結(jié)果的平行性和準(zhǔn)確性，邀請(qǐng)了3家檢測(cè)機(jī)構(gòu)及1家口腔護(hù)理用品生產(chǎn)企業(yè)的實(shí)驗(yàn)室對(duì)本方法的實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行了驗(yàn)證。如表8所示，在重復(fù)性實(shí)驗(yàn)條件下，四家實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的線性良好，R2在0.9997～0.9999之間；回收率均能滿(mǎn)足標(biāo)準(zhǔn)文本的回收率要求，o-傘花烴-5-醇在添加濃度100mg/kg～400mg/kg范圍內(nèi)，本標(biāo)準(zhǔn)方法的回收率在96.3%～101.4%之間；方法的精密度良好，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=6)在0.41%～1.63%之間；對(duì)于同一款牙膏樣品(含o-傘花烴-5-醇)，四家實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.06%。

表9 方法驗(yàn)證情況匯總

5 結(jié)論

綜上所述，本法利用高效液相色譜法，對(duì)牙膏中的o-傘花烴-5-醇進(jìn)行了定性、定量的研究。方法具有簡(jiǎn)便快捷，具有重復(fù)性好，靈敏度高等特點(diǎn)。適用于對(duì)口腔護(hù)理產(chǎn)品，如牙膏、漱口水、口腔噴霧劑等產(chǎn)品中o-傘花烴-5-醇含量的檢測(cè)和控制，為生產(chǎn)企業(yè)和質(zhì)量檢測(cè)機(jī)構(gòu)提供了科學(xué)有效的檢測(cè)方法，對(duì)規(guī)范口腔護(hù)理產(chǎn)品中防腐劑的使用，及保護(hù)消費(fèi)者的健康安全有著積極的意義。