李海琴，方紹培，譚美芳，曾艷兵，黃江南，季華員，張帆帆，譚 佳，陳小連，康昭風(fēng)，楊 群，韋啟鵬

（江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 畜牧獸醫(yī)研究所，江西 南昌 330200）

【研究意義】鴨坦布蘇病毒?。―uck Tembusu virus disease，DTMUVD）是由新型黃病毒——鴨坦布蘇病毒（Duck Tembusu virus，DTMUV）引起的一種以蛋鴨產(chǎn)蛋驟降、雛鴨出現(xiàn)頭頸震顫、四肢麻痹等神經(jīng)癥狀為主要特征的急性傳染病[1-2]。該病自2010年在我國東南地區(qū)陸續(xù)發(fā)生，并迅速蔓延至我國各個主要養(yǎng)鴨省市，給養(yǎng)鴨業(yè)造成了嚴重的經(jīng)濟損失[3-6]。疫苗免疫接種是預(yù)防和控制該病的主要措施之一，目前市場上已有預(yù)防鴨坦布蘇病毒病的商品化疫苗。鴨瘟（Duck plague，DP）又稱鴨病毒性腸炎（Duck viral enteritis，DVE），是由皰疹病毒科的鴨瘟病毒（Duck plague virus，DPV）引起的雁形目水禽類的一種急性、熱性、敗血性傳染病[7]。目前我國采用的鴨瘟雞胚化弱毒活疫苗保護雛鴨免受強毒攻擊[8]。隨著養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，鴨病尤其是病毒性疾病的流行日趨嚴重，特別是鴨坦布蘇病毒病和鴨瘟對養(yǎng)鴨業(yè)的打擊是毀滅性的[9-12]，迫切需要對江西地區(qū)規(guī)?；N鴨場鴨坦布蘇病毒病和鴨瘟進行免疫狀況調(diào)查。【前人研究基礎(chǔ)】酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）是血清學(xué)中最常用的檢測方法之一，已有研究應(yīng)用ELISA 方法進行鴨坦布蘇病毒和鴨瘟血清流行病學(xué)調(diào)查和疫苗免疫效果評價[13-17]。【本研究切入點】江西地區(qū)的種鴨養(yǎng)殖發(fā)展迅速，但江西地區(qū)種鴨場鴨坦布蘇病毒病和鴨瘟免疫狀況尚不清楚，應(yīng)用ELISA 方法對江西規(guī)?；N鴨場鴨坦布蘇病毒病和鴨瘟免疫狀況調(diào)查是有效途徑?！緮M解決的關(guān)鍵問題】本研究選定江西省部分規(guī)?；N鴨場，調(diào)查了鴨坦布蘇病毒病和鴨瘟的抗體陽性率，并對不同季度的鴨坦布蘇病毒病和鴨瘟抗體陽性率進行了分析，旨在掌握江西地區(qū)種鴨場鴨坦布蘇病毒病和鴨瘟的免疫狀況，為種鴨場有效防控鴨坦布蘇病毒病和鴨瘟提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 鴨血清 2020年4月—2021年3月，在江西省南昌、吉安、贛州、九江等地的規(guī)?；N鴨場，選取日齡為130～160日齡表觀健康種鴨，共抽取1 233份血清樣品。

1.1.2 試驗試劑 鴨坦布蘇病毒抗體（DTMUV-Ab）酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒和鴨瘟抗體（DPV-Ab）酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒，購自上海臻科生物科技有限公司；配液所用雙蒸水，江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所獸醫(yī)實驗室制備。

1.1.3 儀器 全自動酶標儀（Thermo Multiskan Mk3），洗板機（Thermo Wellwash 4 MK2）；微量移液器（Eppendorf）。

1.2 試驗方法

1.2.1 ELISA 檢測 將待檢血清樣品編號。檢測步驟分別按照鴨坦布蘇酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒和鴨瘟酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒方法操作。

1.2.2 ELISA 檢測結(jié)果判定標準 當(dāng)陽性對照孔OD450值≥1.00；陰性對照孔OD450值平均值≤0.15時，試驗結(jié)果成立。當(dāng)樣品孔OD450值>陰性對照孔平均值+0.15，樣品判為陽性，否則判為陰性。

1.2.3 群體免疫合格率 群體免疫抗體合格率達到70%判定為群體合格[15]。

2 結(jié)果

2.1 流行病學(xué)調(diào)查

對所采集樣本的種鴨場開展流行病學(xué)調(diào)查，飼養(yǎng)品種主要為花邊鴨及大麻鴨，雛鴨多引自四川、廣西等地。被調(diào)查種鴨場主要免疫鴨病毒性肝炎弱毒疫苗、重組禽流感滅活疫苗（H5+H7）、鴨坦布蘇病毒病滅活疫苗、鴨瘟活疫苗、禽霍亂-大腸桿菌二聯(lián)蜂膠滅活苗。場內(nèi)防疫設(shè)施設(shè)備較為落后，鴨場內(nèi)藥品保存及使用存在隱患。

2.2 不同場區(qū)鴨坦布蘇病毒病抗體水平調(diào)查

本次調(diào)查了江西地區(qū)11 個種鴨場，檢測樣品1 233 份。由表1 可知，調(diào)查的鴨場中鴨坦布蘇病毒病抗體水平普遍不高，總陽性率僅為61.1%，低于70%的國家合格率標準。只有E、H、I 3 個場的抗體陽性率超過70%，其中E 場最高，為80.4%；其次為I 場和H 場，合格率分別為73.4%和71.2%。其余場區(qū)均低于國家合格率標準。

表1 不同場區(qū)鴨坦布蘇病毒病抗體檢測結(jié)果Tab.1 The detection results of DTMUVD antibody in different fields

2.3 不同場區(qū)鴨瘟抗體水平調(diào)查

由表2 可知，本研究調(diào)查的11 個種鴨場的鴨瘟抗體水平總陽性率為80.5%，達到了國家的合格率標準。其中I 場最高，為90.8%。11 個場中9 個場鴨瘟抗體陽性率達到了國家合格率標準，場陽性率為81.8%，B場和F場僅為65.2%和63.6%，未達到國家合格率標準。

表2 不同場區(qū)鴨瘟抗體檢測結(jié)果Tab.2 The detection results of DP antibody in different fields

2.4 不同季度鴨坦布蘇病毒病和鴨瘟抗體水平調(diào)查

不同季度規(guī)?；N鴨場鴨坦布蘇病毒病和鴨瘟抗體陽性率結(jié)果（表3）顯示，4 個季度的鴨坦布蘇病毒病抗體水平全年均較低，只有第四季度（70.6%）超過70%的國家合格率標準，第一季度鴨坦布蘇病毒病抗體陽性率最低為54.0%。第二、三、四季度的鴨瘟抗體陽性率超過70%國家合格率標準，第四季度的鴨瘟抗體陽性率最高為89.3%；第一季度的鴨瘟抗體陽性率低于國家合格率標準。

表3 不同季度鴨坦布蘇病毒病與鴨瘟抗體檢測結(jié)果Tab.3 The detection results of DTMUVD、DP antibody in different quarters

3 結(jié)論與討論

本研究通過對江西省不同地區(qū)的11 個規(guī)模化種鴨場的1 233 份血清樣品進行鴨坦布蘇病毒病和鴨瘟抗體檢測，鴨坦布蘇病毒病和鴨瘟抗體總陽性率分別為61.1%和80.5%。因為被調(diào)查鴨場均免疫鴨坦布蘇病毒病疫苗和鴨瘟疫苗，使用鴨坦布蘇病毒和鴨瘟酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒能夠檢測鴨場的鴨坦布蘇病毒病和鴨瘟抗體水平，從而評價其免疫水平狀態(tài)。

鴨坦布蘇病毒病是危害我國種蛋鴨養(yǎng)殖業(yè)的主要疫病之一，黃瑜等[19]對蛋鴨主要病毒性感染檢測與分析結(jié)果顯示江西未開產(chǎn)蛋鴨坦布蘇病毒感染陽性率51.1%，該病給江西省養(yǎng)鴨業(yè)造成了嚴重的經(jīng)濟損失。張英[20-21]等在感染坦布蘇病毒種鴨的種蛋、鴨胚、雛鴨中檢測到坦布蘇病毒，證實鴨坦布蘇病毒可在種鴨中經(jīng)種蛋垂直傳播。鴨坦布蘇病毒既可以通過感染的母鴨發(fā)生垂直傳播，也可感染公鴨，導(dǎo)致公鴨睪丸出血、萎縮，精液質(zhì)量下降，通過感染坦布蘇病毒的公鴨發(fā)生垂直傳播[20,22]。本研究對江西不同地區(qū)的11個免疫種鴨場進行鴨坦布蘇病毒病的血清抗體檢測結(jié)果顯示，鴨坦布蘇病毒病抗體陽性率較低；11個鴨場僅有3個場達到國家合格率標準，其中兩個達到合格率場的陽性率僅為71.2%和73.4%。鴨坦布蘇病毒病抗體水平的季度性調(diào)查結(jié)果顯示，4個季度的鴨坦布蘇病毒病抗體陽性率只有第四季度達到國家合格率標準，其他3個季度均低于70%。

鴨瘟自1957年在我國被發(fā)現(xiàn)以來已有60多年，盡管各地陸續(xù)出現(xiàn)報道，但各分離毒株的抗原性高度保守，疫苗的使用對該病的控制取得了顯著效果[18]。然而，近年來，臨床上病例報道日漸增多[12]，2019 年11月，江西免疫過鴨瘟疫苗的某大型種鴨場出現(xiàn)160日齡麻鴨疑似鴨瘟感染病例，每天死亡200多羽，病死率20%，損失慘重。研究還發(fā)現(xiàn)鴨瘟病毒感染鴨后，可侵害鴨的多種組織器官，為全身各組織感染和廣泛的組織嗜性創(chuàng)造條件[23]。鴨瘟的地方性流行已不容忽視，迫切需要對鴨瘟抗體定期監(jiān)測。本研究調(diào)查的11 個種鴨場的鴨瘟總陽性率為80.5%，場陽性率為81.8%；不同場區(qū)之間的陽性率差異較大。不同場區(qū)間的陽性率差異可能與飼養(yǎng)管理、疫苗使用、生物安全措施等多種因素有關(guān)。鴨瘟抗體水平的季度性調(diào)查結(jié)果顯示，鴨瘟抗體陽性率在第二、三、四季度達到國家合格率標準，第四季度鴨瘟抗體陽性率最高為89.3%；不同季度抗體合格率的差異結(jié)果表明氣候是影響種鴨疫苗免疫的重要因素之一，氣溫等環(huán)境因素造成應(yīng)激可能影響疫苗免疫效果。

江西部分地區(qū)種鴨坦布蘇病毒病及鴨瘟免疫狀況調(diào)查結(jié)果表明，種鴨疫苗防疫狀況不容樂觀。鴨坦布蘇病毒病和鴨瘟等對種鴨場危害極大，一旦發(fā)病，會給養(yǎng)殖場帶來巨大的經(jīng)濟損失。種鴨場必須加強種鴨坦布蘇病毒病和鴨瘟防疫，定期監(jiān)測疫苗免疫抗體水平，根據(jù)監(jiān)測情況和疫病流行情況制定科學(xué)的免疫程序，加強對防疫人員的專業(yè)培訓(xùn)，嚴格規(guī)范疫苗接種操作程序，確保免疫劑量和效果。