郭志強(qiáng)，胡海強(qiáng)，謝曉紅，鄺良德，李叢艷，雷 岷，鄭 潔，楊 銳，晏家友，李明暉*

（1.四川省畜牧科學(xué)研究院，動(dòng)物遺傳育種四川重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川成都 610066；2.西南大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，重慶 400715）

銅是動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育不可缺少的微量元素之一，具有促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)、參與機(jī)體造血、影響免疫器官發(fā)育和免疫功能的發(fā)揮以及抗氧化等多種功能。大量研究表明，在動(dòng)物實(shí)際生產(chǎn)中添加高劑量銅，可以獲得明顯的促生長(zhǎng)效果，但過量的銅進(jìn)入體內(nèi)不易被動(dòng)物體吸收，會(huì)隨糞便排出體外，污染環(huán)境，并且銅還會(huì)在動(dòng)物組織中沉積，在人類食用后影響身體健康[1-2]。與硫酸銅相比，檸檬酸銅具有生物學(xué)效價(jià)高、易被動(dòng)物機(jī)體吸收、利用率高等優(yōu)勢(shì)，并能有效減少銅的排放量和殘留量，保護(hù)生態(tài)環(huán)境[3]。Peng 等[4]研究表明，30～60 mg/kg 檸檬酸銅可以顯著提高仔豬的生長(zhǎng)性能，降低了銅在體內(nèi)的殘留，提高仔豬抗氧化功能，降低盲腸大腸桿菌含量，提高乳酸桿菌含量。Yan 等[5]研究發(fā)現(xiàn)，20 mg/kg 檸檬酸銅組仔豬日增重、采食量和耗料增重比與180 mg/kg硫酸銅組無顯著差異，但是檸檬酸銅可以提高仔豬骨髓抗菌肽的表達(dá)量，顯著降低仔豬腹瀉率。晏家友等[6]研究結(jié)果顯示，20 mg/kg 堿式氯化銅、甘氨酸銅和檸檬酸銅組肉兔日增重和耗料增重比顯著優(yōu)于硫酸銅組。歐洲文獻(xiàn)對(duì)銅的推薦量一般是3～10 mg/kg，實(shí)際商品預(yù)混料中添加量一般為4～25 mg/kg，但也有報(bào)道表明100～400 mg/kg 銅可提高育肥兔的生長(zhǎng)速度[7-11]。檸檬酸銅是農(nóng)業(yè)農(nóng)村部2019 年批準(zhǔn)的新型飼料添加劑，目前飼料中關(guān)于檸檬酸銅的研究主要集中在仔豬方面，而關(guān)于在肉兔飼糧中的適宜添加量及對(duì)肉品質(zhì)的研究鮮見報(bào)道。因此，本試驗(yàn)旨在研究飼糧中添加檸檬酸銅對(duì)新西蘭兔生長(zhǎng)性能、屠宰性能和肉品質(zhì)的影響，為檸檬酸銅在肉兔飼料中的科學(xué)應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及試驗(yàn)飼糧 選用體況相近、體重在720 g 左右的28 日齡斷奶的新西蘭兔420 只，隨機(jī)分為5 組，每組84 只，每組分成14 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)6 只，公母各半。對(duì)照組不添加銅，硫酸銅組分別添加20、150 mg/kg硫酸銅，檸檬酸銅組分別添加10、20 mg/kg 檸檬酸銅，各組銅含量實(shí)測(cè)值依次為4.6、24.7、148.4、15.1、24.6 mg/kg。預(yù)試期7 d，正試期42 d。飼糧參照谷子林[7]推薦的營養(yǎng)水平和結(jié)合本地飼料資源設(shè)計(jì)，飼糧制成顆粒飼料。試驗(yàn)飼糧組成及營養(yǎng)成分見表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)成分（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.2 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)前將兔舍清洗干凈并進(jìn)行消毒處理，每籠2 只（公母各1 只），試驗(yàn)期間早晚各飼喂1 次，按常規(guī)進(jìn)行飼養(yǎng)管理和免疫程序，定期消毒，自然采光和通風(fēng)，自由采食和飲水，預(yù)試期7 d，正試期42 d。

1.3 樣品采集與制備 試驗(yàn)結(jié)束前4 d，每組隨機(jī)抽取6 只試驗(yàn)兔（公母各3 只），轉(zhuǎn)移到經(jīng)消毒處理的代謝籠內(nèi)，單籠飼養(yǎng)，并飼喂原組試驗(yàn)飼糧，自由采食和飲水，第1 天適應(yīng)環(huán)境不收集糞尿，第2 天開始分別收集每只試驗(yàn)兔全天的糞樣和尿樣，糞樣用塑封袋收集、尿樣用塑料瓶收集。鮮糞稱重后，在烘箱中65℃烘干24 h后，常溫狀態(tài)下回潮24 h 稱重即糞樣的風(fēng)干重，最后將3 d 的風(fēng)干糞樣混合待測(cè)。將每只兔3 d 的尿樣混合作為該兔最終的尿樣，4℃保存，待測(cè)銅含量。試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天每組隨機(jī)選擇6 只體況相近的試驗(yàn)驗(yàn)兔，耳緣動(dòng)脈采血5 mL，3 500 r/min 離心20 min，取上層血清裝入Eppendorf 管中。采血完成后對(duì)試驗(yàn)兔進(jìn)行屠宰，并分別取心臟、肝臟、腎臟、背最長(zhǎng)肌組織各5 g，用組織管盛裝，以上樣品均在采集后轉(zhuǎn)至-20℃冰箱保存，待測(cè)銅含量。

1.4 測(cè)定指標(biāo)和方法

1.4.1 生產(chǎn)性能 稱量并記錄試驗(yàn)正試期當(dāng)天晨飼前空腹體重和試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天空腹體重，統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)兔在試驗(yàn)期間的采食量，計(jì)算平均日增重、平均日采食量和耗料增重比。

1.4.2 屠宰性能 試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，每組抽取該組體重相近的試驗(yàn)兔6 只，空腹12 h，屠宰前稱重，即為宰前活重，并記錄全凈膛重和半凈膛重，計(jì)算全凈膛率和半凈膛率。

1.4.3 肉品質(zhì) 屠宰后第3～6 腰椎處取2 cm×1 cm×1 cm的背最長(zhǎng)肌肉樣，冷藏于4℃待屠宰后45 min、24 h 時(shí)分別測(cè)定pH45min、pH24h，測(cè)定時(shí)將電極頭部完全包埋在肉樣中，待數(shù)據(jù)穩(wěn)定，讀取數(shù)據(jù)并記錄，每個(gè)肉樣測(cè)定3 次。采用日本KONICAMINOL TACR-10 色差儀測(cè)定肌肉的亮度（L）、紅度（a*）、黃度（b*）。屠宰后從第3～6 腰椎處取3 cm×1 cm×1 cm 的背最長(zhǎng)肌肉樣，稱重記為W1；用鐵絲穿過肉樣一端，懸空掛于紙杯中，肉樣不與紙杯壁接觸，用保鮮膜將紙杯口密封，4℃放置24 h 后，取出肉樣進(jìn)行稱重記為W2，計(jì)算滴水損失率，滴水損失=（W1－W2）/W1×100%。

1.4.4 組織、糞尿和血清銅含量 稱取0.5～1.0 g 樣品于微波消解罐中，加入10 mL 濃硝酸（優(yōu)級(jí)純）隔夜冷消化后，在100℃條件加熱趕酸30 min，冷卻后加入3 mL濃鹽酸（優(yōu)級(jí)純），再100℃加熱趕酸30 min，冷卻后，轉(zhuǎn)入微波消解器（t1：0～1 500 W，0～150℃，30 min；t2：0～1 500 W，150℃，20 min；t3：0～1 500 W，150～170℃，20 min，t4:0～1 500 W，170℃，30 min），冷卻后用一級(jí)水轉(zhuǎn)移至25 mL 容量瓶中，定容搖勻，過濾得待測(cè)溶液后于日立ZA3300 型火焰原子吸收分光光度計(jì)進(jìn)行測(cè)定。血清銅含量采用絡(luò)合比色法，按照南京建成生物工程研究所試劑盒說明書進(jìn)行，用半自動(dòng)生化分析儀（Micorlab300，荷蘭）測(cè)定。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel 2016 進(jìn)行簡(jiǎn)單整合后，采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析（One-Way ANOVA），并采用Duncan′s 法多重比較檢驗(yàn)組間差異顯著性，結(jié)果表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差，以P<0.05 為差異顯著，以P<0.01 為差異極顯著。

2 結(jié)果

2.1 檸檬酸銅對(duì)肉兔生產(chǎn)性能的影響 由表2 可知，飼糧添加硫酸銅和檸檬酸銅均可以提高肉兔采食量和日增重，降低耗料增重比。與對(duì)照組和20 mg/kg 硫酸銅組相比，20 mg/kg 檸檬酸銅可以提高肉兔日增重和采食量（P<0.05），降低耗料增重比（P<0.05），但與150 mg/kg 硫酸銅組差異不顯著。

表2 飼糧中添加檸檬酸銅對(duì)肉兔生長(zhǎng)性能的影響

2.2 檸檬酸銅對(duì)肉兔屠宰性能的影響 由表3 可知，150 mg/kg 硫酸銅組的全凈膛重和半凈膛重高于對(duì)照組、20 mg/kg 硫酸銅組和10 mg/kg 檸檬酸銅組（P<0.05），但與20 mg/kg 檸檬酸銅組無顯著差異。與對(duì)照組相比，所有試驗(yàn)組全凈膛率和半凈膛率均有升高的趨勢(shì)。

表3 飼糧中添加檸檬酸銅對(duì)肉兔屠宰性能的影響

2.3 檸檬酸銅對(duì)肉兔肉品質(zhì)的影響 由表4可知，150 mg/kg硫酸銅組兔肉亮度、pH45min、pH24h和滴水損失均較對(duì)照組降低（P<0.05），但20 mg/kg 檸檬酸銅組兔肉pH45min、pH24h和滴水損失與150 mg/kg 硫酸銅組無顯著差異，且各組兔肉紅度、黃度均無顯著差異。

表4 飼糧中添加檸檬酸銅對(duì)肉兔肉品質(zhì)的影響

2.4 檸檬酸銅對(duì)肉兔排泄物和組織中銅含量的影響 由表5 可知，各試驗(yàn)組糞便、肝臟、腎臟和心臟銅含量均顯著高于對(duì)照組，且150 mg/kg 硫酸銅組的糞便、肝臟、腎臟和心臟銅含量均高于其他試驗(yàn)組（P<0.01）。150 mg/kg 硫酸銅組背最長(zhǎng)肌銅含量高于其他組（P<0.05），各組尿液和血清銅含量均無顯著差異。

表5 飼糧中添加檸檬酸銅對(duì)肉兔排泄物和組織中銅含量的影響

3 討 論

3.1 檸檬酸銅對(duì)肉兔生產(chǎn)性能的影響 眾多研究表明，動(dòng)物對(duì)飼糧中不同銅源的吸收率存在較大差異，因此相同劑量不同銅源的飼糧對(duì)動(dòng)物生產(chǎn)性能的影響也存在較大差異，絡(luò)合銅、銅蛋白鹽和氨基酸螯合銅等有機(jī)銅源添加效果顯著高于無機(jī)硫酸銅[3,6-9]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，20 mg/kg 檸檬酸銅組采食量、日增重和耗料增重比與150 mg/kg 硫酸銅組差異不顯著，說明檸檬酸銅吸收利用率較高，低劑量檸檬酸銅和高劑量硫酸銅在促進(jìn)肉兔生產(chǎn)性能方面效果相當(dāng)。晏家友等[6]研究也表明，飼糧添加20 mg/kg 檸檬酸銅組肉兔日增重顯著優(yōu)于20 mg/kg硫酸銅組。

3.2 檸檬酸銅對(duì)肉兔屠宰性能的影響 本試驗(yàn)中，與對(duì)照組相比，添加檸檬酸銅可以顯著提高宰前活重、全凈膛重和半凈膛重，20 mg/kg 檸檬酸銅與150 mg/kg 硫酸銅作用相當(dāng)，均可一定程度上提高肉兔的屠宰性能，而各組間全凈膛率和半凈膛率無顯著差異。馬德磊[10]研究表明，添加硫酸銅顯著提高生長(zhǎng)肉兔全凈膛重和半凈膛重，而對(duì)全凈膛屠宰率和半凈膛屠宰率無顯著影響。影響全凈膛率的因素較多，除了全凈膛、半凈膛重量以外還包括活重、心臟、消化器官、腸道內(nèi)容物等，飼糧銅在增加胴體重的同時(shí)，相應(yīng)臟器增重也不同程度增加，加之影響因素眾多[7,11-12]，因此檸檬酸銅對(duì)胴體增重的影響不足以影響全凈膛率。

3.3 檸檬酸銅對(duì)兔肉品質(zhì)的影響 本試驗(yàn)中，20 mg/kg檸檬酸銅顯著降低了兔肉滴水損失。歐秀瓊等[13]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加255.22 mg/kg 硫酸銅可以顯著降低四川白鵝的蒸煮損失。眾多研究顯示，隨著飼糧添加銅濃度的升高，各組織中微量元素沉積呈線性增加，組織沉積量由高到低依次為肝臟、腎臟、肌肉、心臟和血漿，肝臟是銅蓄積量的主要器官[14-17]。Peng 等[4]研究表明，仔豬飼糧中加入240 mg/kg 檸檬酸銅可以顯著提高肝、腎銅濃度，30～120 mg/kg 檸檬酸銅組肝腎濃度顯著降低，與本試驗(yàn)中添加20 mg/kg 檸檬酸銅后肉兔的肝臟銅濃度差異不大。因肝銅濃度是評(píng)價(jià)銅營養(yǎng)狀況的重要敏感指標(biāo)[6]，以上結(jié)果說明低劑量檸檬酸銅完全可滿足營養(yǎng)代謝需要。本試驗(yàn)中糞便銅含量隨著銅添加量的增加呈極速增加的態(tài)勢(shì)，而各組尿銅含量差異不顯著，這表明銅主要通過糞便排出，尿中僅排出少量銅[18-19]?？傮w來看，檸檬酸銅組糞便中銅含量顯著低于硫酸銅組，而組織中沉積差異并不顯著，這可能與肉兔對(duì)銅的生物吸收利用方式有關(guān)，作用機(jī)制還需進(jìn)一步研究。

4 結(jié) 論

本研究結(jié)果表明，飼糧中添加檸檬酸銅可以顯著提高肉兔生產(chǎn)性能，改善肉品質(zhì)，減少糞污銅排放，降低環(huán)境污染，20 mg/kg 檸檬酸銅組肉兔增重與150 mg/kg硫酸銅組相當(dāng)，且可以顯著改善肉品質(zhì)。本試驗(yàn)條件下，檸檬酸銅的適宜添加量為20 mg/kg。