孫 斌，唐 琳，張軍芳，孫建富，崔 巖，王 英，王恩澤，李 強(qiáng)，李香子

（延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院，東北寒區(qū)肉?？萍紕?chuàng)新教育部工程研究中心，吉林省肉?？茖W(xué)與產(chǎn)業(yè)技術(shù)重大需求協(xié)同創(chuàng)新中心，吉林延吉 133002）

延邊牛屬寒溫帶山區(qū)的役肉兼用品種，適應(yīng)性強(qiáng)。在延邊等地極為寒冷的冬季，延邊牛也能夠正常地生存、生產(chǎn)，并表現(xiàn)出較為理想的生產(chǎn)性能和遺傳穩(wěn)定性，在-26℃時(shí)才出現(xiàn)明顯不安，但依然能保持正常食欲和反芻。延邊牛既是我國(guó)東北部寶貴的抗寒品種，又是研究大型哺乳動(dòng)物抗寒性能不可多得的優(yōu)秀模型。

解偶聯(lián)蛋白（UCP）是位于線粒體內(nèi)膜上的蛋白質(zhì)家族成員，這些蛋白質(zhì)與能量消耗、生熱、游離脂肪酸的調(diào)節(jié)和活性氧的減少有關(guān)[1]。UCP 能控制線粒體內(nèi)膜兩側(cè)跨膜質(zhì)子，通過(guò)濃度差影響下的氧化磷酸化減緩三磷酸腺苷的產(chǎn)生；UCP 本質(zhì)即依靠解除呼吸鏈中應(yīng)當(dāng)具備的電子傳遞、磷酸化的關(guān)系，使得磷酸化進(jìn)入到空轉(zhuǎn)狀態(tài)[2]。依據(jù)具體的功能，UCP 分為UCP1、UCP2、UCP3、UCP4、UCP5[3]。其中，UCP3 蛋白對(duì)哺乳動(dòng)物的體溫調(diào)節(jié)起著重要作用[4]，主要參與非震顫產(chǎn)熱。UCP3 蛋白為轉(zhuǎn)運(yùn)載體，對(duì)線粒體內(nèi)膜產(chǎn)生影響，最后會(huì)氧化為脂肪酸陰離子，這也會(huì)造成其濃度梯度隨之消失，之后則是產(chǎn)生質(zhì)子漏，造成其合成效率顯著降低，產(chǎn)生一定解偶聯(lián)，同時(shí)將存儲(chǔ)之能量以熱能進(jìn)行釋放，讓動(dòng)物可在寒冷狀態(tài)下維持體溫[5]。

在大鼠中，UCP3基因主要在棕色脂肪中表達(dá)，其次是在闊筋膜張肌、脛骨前肌、腓腸肌和慢抽動(dòng)氧化代謝的肌肉中表達(dá)，在心臟、肺和外周血中也發(fā)現(xiàn)了低表達(dá)的UCP3基因[6]。研究表明，UCP3基因表達(dá)增加是由血漿中脂質(zhì)水平升高所誘導(dǎo)的，在禁食、饑餓、高脂飲食、冷暴露期間[7-8]和直接供應(yīng)脂肪酸都可以使UCP3表達(dá)增加[9]。目前，其他哺乳動(dòng)物（嚙齒類(lèi)動(dòng)物、豬）中UCP3的基因序列已相繼被報(bào)道[10]。本文圍繞延邊牛肌肉組織開(kāi)展針對(duì)性的分析，克隆得到UCP3 的CDS 區(qū)序列，對(duì)其開(kāi)展生物信息學(xué)分析，探究UCP3基因在延邊牛不同組織中的表達(dá)變化，為其抗寒機(jī)理提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集 于2020 年11 月，在延邊德海牧場(chǎng)選取3 頭20 月齡的延邊牛，采集其心、肝、脾、肺、腎、小腸、脂肪和肌肉作為組織樣品，放至冷凍管中并迅速置入液氮中帶回實(shí)驗(yàn)室，保存在-80℃冰箱。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 總RNA 提取試劑TRIzoI Reagent 購(gòu)自Life 公司，RNA 反轉(zhuǎn)錄試劑盒和實(shí)時(shí)熒光定量試劑盒、cDNA 第一鏈合成預(yù)混試劑、PCR 擴(kuò)增2×TaqPCR 預(yù)混試劑II 購(gòu)自天根生化科技（北京）有限公司，瓊脂糖凝膠DNA 回收試劑盒、T4 DNA Ligase、普通質(zhì)粒提取試劑盒、氨芐青霉素、瓊脂糖購(gòu)自生工生物工程（上海）股份有限公司；pMD18-T 購(gòu)自TaKaRa 公司。

1.3 儀器與設(shè)備 干式恒溫器（GL-1800）購(gòu)自海門(mén)其林貝爾儀器制造有限公司，小型臺(tái)式冷凍型離心機(jī)（5417R）購(gòu)自Eppendorf 公司，超微量分光光度計(jì)（NanoDrop 2000）購(gòu)自Thermo 公司，電泳儀（Model 300V）購(gòu)自LABNET 公司，多功能分子成像系統(tǒng)（Azure 600）購(gòu)自Azure Biosystems 公司，梯度PCR儀（TC-5000）購(gòu)自Techne 公司，實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（Mx3005P）購(gòu)自Agilent 公司。

1.4 引物設(shè)計(jì)合成使用Primer Premier 5.0 軟 件，根據(jù)GenBank 中已公布的牛UCP3基因（登錄號(hào)：NM_174210）序列設(shè)計(jì)普通PCR（擴(kuò)增UCP3基因的CDS 區(qū)）及實(shí)時(shí)熒光定量PCR 引物，以管家基因GAPDH（登錄號(hào)：NM_001034034.2）作為內(nèi)參。引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，引物信息見(jiàn)表1。

表1 引物序列

1.5 延邊牛組織總RNA 的提取及cDNA 的合成 按照TRIzol Reagent 試劑盒說(shuō)明書(shū)對(duì)小塊心肌組織樣品的總RNA 進(jìn)行提取，通過(guò)超微量分光光度計(jì)檢測(cè)提取的RNA 質(zhì)量（OD260/OD280），將符合要求的總RNA 進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，-20℃保存，備用。逆轉(zhuǎn)錄采用天根FastKing 一步法試劑盒，反轉(zhuǎn)錄體系50 μL：Total RNA 5 μL（1 μg/μL），5×FastKing-RT Super MIX 10 μL，RNase-free water 35 μL。

1.6 延邊牛UCP3基因CDS 區(qū)克隆 以cDNA 為模板，對(duì)延邊牛UCP3基因CDS 區(qū)進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，擴(kuò)增體系為20 μL：cDNA 模板2 μL（1 μg/μL），上、下游引物各0.5 μL（10 pmol/ μL），2×Taq PCR MasterMix II 10 μL，RNase-free water 7 μL。擴(kuò)增條件為：94℃ 3 min；94℃30 s，58℃ 30 s，72℃ 2 min，35 個(gè)循環(huán)；72℃ 5 min。反應(yīng)結(jié)束后取10 μL 反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。對(duì)符合預(yù)期大小的PCR 產(chǎn)物用瓊脂糖凝膠DNA 回收試劑盒回收。將回收后的目的DNA 片段與pMD18-T載體連接，連接反應(yīng)體系10 μL：目的DNA 片段4 μL（0.1 pmol/ μL），pMD18-T 載體1 μL（0.01 pmol/ μL），10×T4 DNA ligase Buffer 4 μL，T4 DNA Ligase 1 μL，置于16℃反應(yīng)8 h。連接后轉(zhuǎn)化為感受態(tài)細(xì)胞，通過(guò)對(duì)含有氨芐抗性的LB 培養(yǎng)基實(shí)施涂布，經(jīng)由單菌落開(kāi)展擴(kuò)繁，再提取質(zhì)粒，在處理過(guò)程中以提取的質(zhì)粒為模板進(jìn)行PCR 鑒定，生工生物工程（上海）有限公司負(fù)責(zé)對(duì)提取鑒定出的質(zhì)粒進(jìn)行測(cè)序驗(yàn)證。

1.7 延邊牛UCP3基因生物信息學(xué)分析 用NCBI 中BLAST 與黃牛（Bos taurus，登錄號(hào)：NM_174210.1）、水牛（Bubalus bubalis，登錄號(hào)：XM_006073312.2）、綿羊（Ovis aries，登錄號(hào)：NM_001308581.1）、山羊（Capra hircus，登錄號(hào)：XM_005689964.3）、野豬（Sus scrofa，登錄號(hào)：AF128837.1）、北極熊（Ursus maritimus，登錄號(hào)：XM_008707338.1）、野生雙峰駝（Bactrian camel，登錄號(hào)：XM_014556631.2）進(jìn)行同源性對(duì)比分析，MEGA7.0軟件構(gòu)建進(jìn)化樹(shù)，利用在線軟件ProtParam（https://web.expasy.org/protparam/）和ProtScale（https://web.expasy.org/protscale/）預(yù)測(cè)UCP3 蛋白的理化性質(zhì)，NetPhos3.1（http://www.cbs.dtu.dk/services/NetPhos/）、NetOGlyc4.0（http://www.cbs.dtu.dk/services/NetOGlyc/）和Scratch Protein Predictor（http://scratch.proteomics.ics.uci.edu/）預(yù)測(cè)UCP3 蛋白潛在的磷酸化位點(diǎn)、糖基化位點(diǎn)及二硫鍵分析，SignalP 4.1 Server（http://www.cbs.dtu.dk/services/ Signal P-4.1/）預(yù)測(cè)UCP3 蛋白信號(hào)肽，TargetP 1.1 Server（http://www.cbs.dtu.dk/services/ TargetP-1.1/index.php）和PSORT（https://www.genscript.com/psort.html）分析UCP3 蛋白的亞細(xì)胞定位，SOPMA（https://npsaprabi.ibcp.fr/cgi-bin/npsaautomat.pl?Page=npsasopma.html）和PHYRE2（http://www.sbg.bio.ic.ac.uk/phyre2/html/page.cgi?id=index）預(yù)測(cè)UCP3 蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu)。

1.8 延邊牛各組織相對(duì)表達(dá)量分析 以GAPDH 為內(nèi)參基因進(jìn)行qRT-PCR 分析延邊牛各組織樣品中UCP3基因的相對(duì)表達(dá)量，反應(yīng)體系20 μL：2×SuperReal Premixplus 10 μL，50×Rox Reference Dye 0.3 μL，上、下游引物各0.6 μL（10 pmol/μL），cDNA 模板1 μL（1 μg/μL），RNase-free ddH2O 7.5 μL。每個(gè)待測(cè)樣品設(shè)置3 個(gè)重復(fù)，反應(yīng)程序：95℃ 15 min；95℃ 10 s，55℃30 s，72℃ 32 s，35 個(gè)循環(huán)；95℃ 15 s，60℃ 1 min，95℃ 15 s。

1.9 統(tǒng)計(jì)分析 運(yùn)用2?ΔΔCT法對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，利用SPSS 19.0 軟件對(duì)UCP3基因在延邊牛不同組織中的表達(dá)水平進(jìn)行單因素方差分析，以P<0.05 為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 PCR 擴(kuò)增結(jié)果 利用超微量分光光度計(jì)測(cè)定RNA質(zhì)量（OD260/OD280），測(cè)定值在1.8～2.0，RNA 結(jié)構(gòu)的完整性好，無(wú)蛋白以及DNA 污染，可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物采用1%的瓊脂糖凝膠電泳分析，可見(jiàn)1條1 100 bp 左右的DNA 片段（圖1），與預(yù)期大小一致。

圖1 延邊牛UCP3 基因CDS 區(qū)擴(kuò)增結(jié)果

2.2UCP3基因序列的生物信息學(xué)分析

2.2.1 序列分析結(jié)果 由圖2 可知，延邊牛UCP3基因與黃牛、水牛、綿羊、山羊、野豬、北極熊、野生雙峰駝的同源性分別為100%、99.82%、97.33%、97.44%、90.50%、90.09%、90.72%?；诙喾N物種UCP3 核苷酸序列，運(yùn)用MEGA7.0 描繪發(fā)育樹(shù)得出，研究基因和黃牛、水牛之間的親緣關(guān)系相對(duì)較近，而和野雞之間的親緣關(guān)系則是相對(duì)最遠(yuǎn)。

圖2 UCP3 基因系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)

2.2.2 UCP3 蛋白質(zhì)的理化性質(zhì) 通過(guò)ProtParam 對(duì)延邊牛UCP3 蛋白的理化性質(zhì)進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，該蛋白質(zhì)的分子質(zhì)量為34 205.74 ku，理論等電點(diǎn)（Theoretical pI）為9.46，蛋白分子式為C1526H2414N416O434S21，總原子數(shù)為4 811。UCP3基因共編碼311 個(gè)氨基酸，氨基酸組成如表1 所示，其中Leu（L）最多，且不含Pyl（O），氨基酸組成結(jié)果顯示，帶負(fù)電殘基總數(shù)（Asp+Glu）21 個(gè)，帶正電殘基總數(shù)（Arg+Lys）33 個(gè)，消光系數(shù)29 255，不穩(wěn)定指數(shù)為45.90，說(shuō)明該蛋白為不穩(wěn)定蛋白，脂溶系數(shù)為81.54，在體外網(wǎng)狀紅細(xì)胞的半衰期為30 h，總平均親水性為0.018，表明其具有一定的親水性。

利用ProtScale 在線軟件預(yù)測(cè)延邊牛UCP3 蛋白質(zhì)的疏水性，結(jié)果如圖3 所示，組成UCP3 的氨基酸中親水性殘基所占比例較大，整體表現(xiàn)為親水性，與Protparam 軟件預(yù)測(cè)結(jié)果一致。

圖3 UCP3 蛋白疏水性分析

2.2.3 延邊牛UCP3 蛋白的磷酸化位點(diǎn)和糖基化位點(diǎn)利用在線軟件Net Phos3.1 對(duì)UCP3 潛在的磷酸化位點(diǎn)進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，UCP3 存在28 處潛在的磷酸化位點(diǎn)，包括3 處潛在的Tyr 磷酸化位點(diǎn)、10 處潛在的Thr 磷酸化位點(diǎn)、15 處潛在的Ser 磷酸化位點(diǎn)。

分別用在線軟件NetOGlyc 4.0 和NetNGlyc 1.0 對(duì)UCP3 潛在的O-糖基化位點(diǎn)和N-糖基化進(jìn)行分析，UCP3 存在4 個(gè)潛在的O-糖基化位點(diǎn)，分別位于第7、12、13、14 位氨基酸處；存在1 個(gè)N-糖基化潛在位點(diǎn)，位于第184 位氨基酸處。

2.2.4 延邊牛UCP3 蛋白跨膜區(qū)預(yù)測(cè)及信號(hào)肽、亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè) 利用TMHMM 2.0 Server 在線軟件分析跨膜結(jié)構(gòu)域，結(jié)果顯示，該基因的編碼產(chǎn)物不存在跨膜螺旋結(jié)構(gòu)，跨膜螺旋氨基酸殘基數(shù)量的預(yù)測(cè)值為4.590 98，蛋白質(zhì)前60 個(gè)氨基酸的跨膜螺旋數(shù)預(yù)測(cè)值為0.877 78，位于膜細(xì)胞質(zhì)側(cè)的總概率為0.045 22。

表2 UCP3 蛋白的氨基酸組成

利用SignalP 4.1 Server 在線軟件進(jìn)行分析，區(qū)分信號(hào)肽和非信號(hào)肽臨界值為D=0.450，UCP3 預(yù)測(cè)D=0.168。根據(jù)信號(hào)肽假說(shuō)推測(cè)UCP3 編碼蛋白不存在信號(hào)肽，屬于非分泌蛋白。

用TargetP 1.1 Server 和PSORT 分析UCP3 蛋白的亞細(xì)胞定位發(fā)現(xiàn)，線粒體作用位點(diǎn)（mTP）所占比例很小為0.058，分泌信號(hào)通路位點(diǎn)（SP）占比為0.506，并且無(wú)信號(hào)肽，因此可推測(cè)其合成后沒(méi)有發(fā)生轉(zhuǎn)運(yùn)；UCP3 蛋白主要分布于線粒體中，其次分布于細(xì)胞質(zhì)，細(xì)胞核中也有少量分布（表3）。

表3 UCP3 蛋白亞細(xì)胞定位

2.2.5 UCP3 蛋白高級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè) UCP3 蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)主要含有α-螺旋（Alpha helix）、延伸鏈（Extended strand）、無(wú)規(guī)卷曲（Random coil）和β-轉(zhuǎn)角（Beta turn）（圖4）。其中α-螺旋有142 個(gè)氨基酸，占45.66%；無(wú)規(guī)卷曲有99 個(gè)氨基酸，占31.83%；延伸鏈有50 個(gè)氨基酸，占16.08%；β-轉(zhuǎn)角有20 個(gè)氨基酸，占6.23%。利用ExPASy 中Swiss-model 平臺(tái)構(gòu)建延邊牛UCP3 蛋白可能的三級(jí)結(jié)構(gòu)模型（圖5），全局模型質(zhì)量估計(jì)值為0.63，與模板相似性為74.92%，按照生物信息學(xué)理論，如果2 種蛋白質(zhì)在連續(xù)100 個(gè)氨基酸范圍內(nèi)有大于40%的一致性，那么它們?cè)诮Y(jié)構(gòu)上則具有較為顯著的相似性，已知結(jié)構(gòu)的蛋白可以作為建立目標(biāo)蛋白結(jié)構(gòu)模型的模板。此種情況下，按照同源建模方法能夠提供詳細(xì)而又準(zhǔn)確的結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)結(jié)果。

圖4 預(yù)測(cè)UCP3 蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)

圖5 UCP3 的三級(jí)結(jié)構(gòu)模型

2.3UCP3基因在延邊牛不同組織間的差異表達(dá) 如圖6所示，UCP3基因在延邊牛8 個(gè)組織中均有表達(dá)，其中在脾、肺、肌肉、小腸中的相對(duì)表達(dá)量最高（P<0.05）；肝臟和腎臟中的表達(dá)量較低，兩者無(wú)顯著差異。

圖6 UCP3 基因在延邊牛各組織中的mRNA 相對(duì)表達(dá)量

3 討 論

畜禽UCP3基因?qū)ιL(zhǎng)性狀的影響一直是動(dòng)物遺傳領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)[11]，而在延邊牛中的研究尚無(wú)報(bào)道。UCP3 是線粒體內(nèi)膜中重要的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，在機(jī)體能量代謝平衡以及體脂代謝過(guò)程中有較為顯著的調(diào)控效果，并參與免疫應(yīng)答和炎癥過(guò)程。在哺乳動(dòng)物中，UCP3 是T3產(chǎn)熱作用的調(diào)節(jié)因子，禁食、恢復(fù)飼喂和注射瘦素等試驗(yàn)可調(diào)控UCP3基因的mRNA 表達(dá)水平，均可提高基礎(chǔ)代謝率[12]。王啟軍等[13]對(duì)動(dòng)物進(jìn)行冷適應(yīng)并檢測(cè)其基因蛋白表達(dá)量變化，發(fā)現(xiàn)UCP3基因可能是骨路肌中重要的體溫調(diào)節(jié)因子，通過(guò)短期內(nèi)產(chǎn)熱來(lái)調(diào)節(jié)骨骼肌中的能量平衡。研究表明，血液中游離脂肪酸（FFA）濃度對(duì)UCP3 蛋白的表達(dá)具有上調(diào)作用[14-16]，UCP3 蛋白在調(diào)節(jié)機(jī)體能量代謝平衡及脂類(lèi)代謝的過(guò)程中具有重要作用，能減少活性氧（ROS）種類(lèi)，保護(hù)細(xì)胞免受破壞[17]。在嚙齒類(lèi)動(dòng)物中UCP3基因表達(dá)主要分布于棕色脂肪組織和哺乳動(dòng)物骨骼肌中[18-19]，和機(jī)體能量代謝存在密切的聯(lián)系，其可調(diào)控骨骼肌葡萄糖和線粒體脂肪轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制，進(jìn)而提供非震顫產(chǎn)熱作用[20-21]。

本研究以延邊牛肌肉為材料成功克隆出UCP3基因，分析結(jié)果顯示延邊牛UCP3 蛋白理化性質(zhì)不穩(wěn)定系數(shù)為45.90，說(shuō)明蛋白理化性質(zhì)不穩(wěn)定。親疏水性分析發(fā)現(xiàn)該蛋白平均親水指數(shù)為-0.49，屬于親水性蛋白。根據(jù)信號(hào)肽假說(shuō)推測(cè)UCP3 編碼蛋白不存在信號(hào)肽，屬于非分泌蛋白。UCP3 蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)以α螺旋和無(wú)規(guī)卷曲為主，這與其轉(zhuǎn)錄模式相符合。蛋白質(zhì)翻譯后修飾是指在mRNA 翻譯后形成蛋白質(zhì)過(guò)程中的一種化學(xué)修飾。蛋白質(zhì)翻譯后修飾在蛋白質(zhì)的功能和活性中起著非常重要的調(diào)節(jié)作用，而蛋白質(zhì)的糖基化和磷酸化是最常見(jiàn)的翻譯后修飾。具體而言，在蛋白質(zhì)合成的過(guò)程中，磷酸基、乙?；?、糖類(lèi)、脂類(lèi)及碳水化合物等生化功能性基團(tuán)在修飾酶的作用下共價(jià)結(jié)合到蛋白質(zhì)骨架上或者側(cè)鏈上。翻譯后修飾會(huì)影響蛋白質(zhì)的生理活性、化學(xué)、成熟度等性質(zhì)，結(jié)構(gòu)變得復(fù)雜、功能更加完善、作用專(zhuān)一性增加、調(diào)控更精確，從而增加蛋白質(zhì)種類(lèi)及功能的多樣性，在細(xì)胞代謝過(guò)程中發(fā)揮著極為關(guān)鍵的作用。

涂榮劍[22]研究證實(shí)UCP3基因在豬的骨骼肌、心臟、脂肪中表達(dá)量比較豐富。倉(cāng)木拉等[23]發(fā)現(xiàn)在人體中UCP3基因主要在骨骼肌中高表達(dá)，在心、肝、腎等組織表達(dá)量很少。Adams 等[24]研究發(fā)現(xiàn)小鼠UCP3 定位于7 號(hào)染色體，且僅在骨骼肌中表達(dá)。本研究檢測(cè)UCP3基因在延邊牛8 個(gè)不同部位的相對(duì)表達(dá)量，結(jié)果顯示UCP3基因在脾臟、肺、肌肉中的表達(dá)量相對(duì)較高，在肝臟中的表達(dá)水平較低。說(shuō)明UCP3基因在不同物種中的表達(dá)規(guī)律有所差異，但目前對(duì)于延邊牛UCP3基因的相關(guān)性研究較少，功能與調(diào)控原理有待確認(rèn)，需開(kāi)展更為深入的分析。

4 結(jié) 論

本研究以延邊牛肌肉為材料克隆出UCP3基因完整CDS 區(qū)，其長(zhǎng)度為1 100 bp，編碼311 個(gè)氨基酸，屬于親水性蛋白，存在28 個(gè)潛在的磷酸化位點(diǎn)，4 個(gè)O-糖基化潛在位點(diǎn)，1 個(gè)N-糖基化潛在位點(diǎn)，不存在信號(hào)肽。UCP3 蛋白是由α-螺旋、延伸鏈、無(wú)規(guī)卷曲和β-轉(zhuǎn)角所組成的混合型蛋白，通過(guò)無(wú)規(guī)則卷曲連接，以α-螺旋為主。實(shí)時(shí)熒光定量PCR 結(jié)果顯示，UCP3基因在延邊牛脾組織中表達(dá)量最高，其次為肺和肌肉組織。本研究結(jié)果可為進(jìn)一步研究延邊牛UCP3基因的功能提供借鑒。