蔡祥焜 鄭立新 張朋朋 張 楠 喬秋爽 田世民※

隨著社會(huì)壓力的不斷增加，人群的亞健康狀態(tài)越來(lái)越普遍。亞健康指的是人體處于健康和疾病之間的一種狀態(tài)，表現(xiàn)為一定時(shí)間內(nèi)的活力降低、功能和適應(yīng)能力減退的癥狀。疲勞性亞健康以疲勞為主要表現(xiàn)，是亞健康最常見(jiàn)的類型之一，包括軀體疲勞和精神疲勞[1]。由于疲勞在不同程度上影響人們的身體健康和生活質(zhì)量，隨著醫(yī)學(xué)模式的轉(zhuǎn)變以及人們對(duì)生活質(zhì)量的要求不斷提高，如何改善疲勞，尤其是軀體疲勞也越來(lái)越得到研究者的關(guān)注。近年來(lái)的研究表明，植物提取物如多酚類、生物堿類、皂苷類、多糖類等為有效和安全的抗疲勞活性成分，在人體疲勞的預(yù)防和消除中有著十分重要的作用[2]。目前瑪咖[3]、黃芪[4]、沙苑子[5]、女貞子[6]、黃精[7]等中藥材對(duì)運(yùn)動(dòng)性疲勞的預(yù)防和恢復(fù)作用已得到研究證實(shí)，但對(duì)以上成分復(fù)配產(chǎn)品的功能性研究還很少涉及。復(fù)合瑪咖片是由瑪咖粉、黃芪提取物、沙苑子提取物、女貞子提取物、黃精提取物為主要原料復(fù)合而成，本研究以ICR小鼠為研究對(duì)象，參照《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》[8]進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，探討復(fù)合瑪咖片對(duì)小鼠緩解體力疲勞作用的影響。

1.材料與方法

1.1 樣品 復(fù)合瑪咖片由某公司提供，是由瑪咖粉、黃芪提取物、沙苑子提取物、女貞子提取物、黃精提取物為主要原料制成的保健食品。標(biāo)志性成分：每100g含蛋白質(zhì)3.1g，粗多糖3.5g。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選用北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供的健康ICR雌性小鼠240只進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，適應(yīng)期結(jié)束體重18～22g。將動(dòng)物分為4個(gè)實(shí)驗(yàn)組，每實(shí)驗(yàn)組60只小鼠，分別進(jìn)行負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)、血清尿素測(cè)定實(shí)驗(yàn)、肝糖原測(cè)定實(shí)驗(yàn)和血乳酸測(cè)定實(shí)驗(yàn)。每實(shí)驗(yàn)組按小鼠體重隨機(jī)分為陰性對(duì)照組和低、中、高3個(gè)劑量組，每組15只。食水自由攝入，動(dòng)物房溫度20～26℃，濕度40%～70%。

1.3 劑量組設(shè)定 復(fù)合瑪咖片推薦人體攝入量為每日3g/(60kg·BW)。低、中、高劑量設(shè)為人體推薦食用量的5倍、10倍、30倍，即0.250g/(kg·BW)、0.500g/(kg·BW)、1.500g/(kg·BW)，同時(shí)設(shè)0g/(kg·BW)陰性對(duì)照組，以去離子水代替受試物。分別稱取0.625g、1.250g、3.750g用去離子水定容至50ml配制低、中、高劑量組，小鼠按20ml/(kg·BW)給予灌胃，連續(xù)灌胃30d后測(cè)定各項(xiàng)指標(biāo)。

1.4 儀器與試劑 全自動(dòng)血生化分析儀(東芝TBA-120FR)、葡萄糖/乳酸分析儀(EKF C-line 15)、游泳箱(金壇華龍實(shí)驗(yàn)儀器廠GB11240-89)、離心機(jī)(Thermo ST40R)、酶標(biāo)儀(Biotek Synergy HIM)。血清尿素氮試劑盒(中生北控生物科技有限公司)，肝糖原測(cè)定試劑盒(南京建成生物工程研究所)，乳酸檢測(cè)芯片(EKF公司)。

1.5 實(shí)驗(yàn)方法

1.5.1 負(fù)重游泳時(shí)間：連續(xù)灌胃30d，末次灌胃30min后，將鼠尾根部綁縛5%體重的鉛絲，置于水深約30cm的泳箱中游泳，水溫控制在(25±1.0)℃，記錄小鼠自游泳開(kāi)始至死亡的時(shí)間。

1.5.2 血清尿素測(cè)定：末次灌胃30min后，小鼠不負(fù)重游泳90min(水溫30℃)，休息60min建立高尿素模型，拔眼球采血1.0ml，2000rpm離心15min，取血清，全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清尿素值。

1.5.3 肝糖原測(cè)定(蒽酮法)：末次灌胃30min后處死動(dòng)物，取肝臟。精確稱取肝臟90mg，加入盛有270μl的堿液試管中，沸水浴煮20min，制備成1%肝糖原檢測(cè)液。空白管加雙蒸水1.0ml、顯色液2.0ml，標(biāo)準(zhǔn)管加標(biāo)準(zhǔn)液1.0ml、顯色液2.0ml，測(cè)定管加雙蒸水0.9ml、糖原檢測(cè)液0.1ml、顯色液2.0ml，混勻后置沸水中煮5min，冷卻后測(cè)定600nm波長(zhǎng)處的OD值。

1.5.4 血乳酸測(cè)定：分別在末次灌胃30min后，小鼠不負(fù)重在溫度30℃的水中游泳10min后停止和休息20min后，取眼眶血20μl加入檢測(cè)試劑中，混勻后上機(jī)測(cè)定血乳酸值。

血乳酸曲線下面積=1/2×(泳前血乳酸值+泳后0min的血乳酸值)×10+1/2×(泳后0min的血乳酸值+泳后休息20min的血乳酸值)×20。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析，首先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊采用Dunnett方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)在數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)正態(tài)或方差齊的要求，采用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。

2.結(jié)果

2.1 復(fù)合瑪咖片對(duì)小鼠體重的影響 0.250g/(kg·BW)、0.500g/(kg·BW)、1.500g/(kg·BW)組的小鼠體重與0g/(kg·BW)組相比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。復(fù)合瑪咖片對(duì)小鼠的體重增長(zhǎng)無(wú)不良影響。

2.2 復(fù)合瑪咖片對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響 由表1可見(jiàn)，0.500g/(kg·BW)組小鼠的負(fù)重游泳時(shí)間明顯長(zhǎng)于0g/(kg·BW)組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表1 復(fù)合瑪咖片對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響

2.3 復(fù)合瑪咖片對(duì)小鼠游泳后血清尿素水平的影響 由表2可見(jiàn)，0.500g/(kg·BW)組小鼠的血清尿素含量明顯低于0g/(kg·BW)組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表2 復(fù)合瑪咖片對(duì)小鼠游泳后血清尿素水平的影響

2.4 復(fù)合瑪咖片對(duì)小鼠肝糖原儲(chǔ)備量的影響 由表3可見(jiàn)，1.500g/(kg·BW)組的小鼠肝糖原儲(chǔ)備量高于0g/(kg·BW)組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表3 復(fù)合瑪咖片對(duì)小鼠肝糖原儲(chǔ)備量的影響

2.5 復(fù)合瑪咖片對(duì)運(yùn)動(dòng)后小鼠血乳酸變化的影響 由表4可見(jiàn)，0.250g/(kg·BW)、0.500g/(kg·BW)、1.500g/(kg·BW)組的小鼠游泳后血乳酸曲線下面積與0g/(kg·BW)組相比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表4 復(fù)合瑪咖片對(duì)小鼠游泳后血乳酸曲線下面積的影響

3.結(jié)論

0.500g/(kg·BW)組小鼠的負(fù)重游泳時(shí)間明顯長(zhǎng)于0g/(kg·BW)組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。0.500g/(kg·BW)組小鼠的血清尿素含量明顯低于0g/(kg·BW)組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。1.500g/(kg·BW)組的小鼠肝糖原儲(chǔ)備量高于0g/(kg·BW)組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。3個(gè)劑量組的小鼠泳后血乳酸曲線下面積與0g/(kg·BW)組相比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。參照2003版《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》中的結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)，在本實(shí)驗(yàn)條件下復(fù)合瑪咖片具有緩解體力疲勞作用。

4.討論

運(yùn)動(dòng)性疲勞是一個(gè)復(fù)雜的生理變化過(guò)程，目前比較認(rèn)同的運(yùn)動(dòng)疲勞的產(chǎn)生機(jī)制主要包括能量耗竭、代謝產(chǎn)物蓄積、和自由基學(xué)說(shuō)等[9]，這三大機(jī)制存在著共同的信號(hào)調(diào)控途徑，能量代謝應(yīng)激可以激活腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase，AMPK)，氧化應(yīng)激同樣也能激活A(yù)MPK，參與機(jī)體抗氧化還原反應(yīng)的調(diào)節(jié)，因此以抗氧化與能量代謝的共同調(diào)控靶點(diǎn)來(lái)設(shè)計(jì)和開(kāi)發(fā)抗疲勞產(chǎn)品是非?？尚械牟呗訹10]。近些年的研究發(fā)現(xiàn)，蛋白質(zhì)、多肽、糖類等食源性抗疲勞活性成分可以通過(guò)及時(shí)補(bǔ)充能源物質(zhì)來(lái)發(fā)揮緩解疲勞作用；多酚類、氨基酸、維生素等可通過(guò)對(duì)自由基的清除作用來(lái)達(dá)到抗疲勞功能,因此高效提取動(dòng)植物中的抗疲勞活性成分，依據(jù)不同的抗疲勞作用機(jī)制復(fù)合配比多種抗疲勞成分將成為新的研究熱點(diǎn)[11]。

瑪咖(Maca)屬于十字花科植物瑪咖獨(dú)行菜，有“南美人參”之譽(yù)，含有蛋白質(zhì)、氨基酸、多糖、生物堿類、芥子油苷類、硫代乙內(nèi)酰脲類、瑪咖烯類、甾醇類等多種化學(xué)成分，自2011年被批準(zhǔn)為新資源食品之后，瑪咖在國(guó)內(nèi)以瑪咖粉和瑪咖提取物的形式廣泛應(yīng)用于食品、保健食品等領(lǐng)域[12]。邱良武[13]等的研究結(jié)果表明，瑪咖能夠提高T-SOD活性，提高肝糖原含量，具有較好的抗疲勞作用。張靜[14]等的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，瑪咖粉能明顯延長(zhǎng)小鼠的力竭游泳時(shí)間，減少運(yùn)動(dòng)時(shí)血清尿素及血乳酸的產(chǎn)生，具有顯著的抗疲勞功效，另瑪咖粉能明顯提高SOD及GSH-Px的活性，減少M(fèi)DA的生成，提示其抗疲勞機(jī)制可能與其抗氧化作用有關(guān)。黃芪多糖是黃芪的主要活性成分之一，可延長(zhǎng)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間，增加肝糖原儲(chǔ)備，降低運(yùn)動(dòng)后血乳酸積累，起到抗疲勞作用[15]。張瑞[16]等基于1H NMR技術(shù)黃芪抗疲勞作用的肌肉代謝組學(xué)研究表明，黃芪可以顯著提高大鼠力竭游泳時(shí)間，其機(jī)制可能與調(diào)控大鼠肌肉中氨基酸代謝有關(guān)。沙苑子主要含有黃酮類、三萜類、氨基酸類、微量元素等多種化學(xué)成分，在清除自由基、抗氧化、抗炎、保肝降脂、抗腫瘤、抗衰老、抗疲勞等方面具有良好的藥理作用[17]。熊勃[18]等的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究表明，沙苑子可以通過(guò)影響海馬、間腦脂肪族IAA、EAA含量及Glu/GABA比值，來(lái)延緩中樞神經(jīng)疲勞的發(fā)生，提高大鼠抗疲勞能力。女貞子及其活性成分紅景天苷具有提高運(yùn)動(dòng)耐力和抗疲勞作用，它們主要是通過(guò)抗氧化應(yīng)激作用改善疲勞引起的組織器官中的抗氧化酶、抗氧化物質(zhì)水平下降，保護(hù)細(xì)胞膜免遭自由基攻擊，從而改善疲勞引起的骨骼肌、心、肝、腎、腦等重要組織器官的損傷，并維護(hù)它們的生理功能[6]。戚世媛等[19]的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，補(bǔ)充女貞子提取物可以調(diào)節(jié)大鼠不同組織中抗氧化酶活性，減少M(fèi)DA的生成，延長(zhǎng)運(yùn)動(dòng)至疲勞的時(shí)間。黃精為百合科植物，含有如甾體皂苷、三萜皂苷、高異黃酮、多糖和凝集素等多種營(yíng)養(yǎng)成分[20]。劉詩(shī)瓊等[21]的研究表明，黃精多糖能提高小鼠游泳耐力、延長(zhǎng)爬桿時(shí)間，提高肝糖原和肌糖原含量，降低血清尿素及血乳酸含量，具有良好的抗疲勞功效。

負(fù)重游泳時(shí)間是衡量小鼠運(yùn)動(dòng)耐力的直觀指標(biāo)，血清尿素、肝糖原以及血乳酸面積可以不同程度的反應(yīng)機(jī)體疲勞程度的強(qiáng)弱。復(fù)合瑪咖片是由瑪咖粉、黃芪提取物、沙苑子提取物、女貞子提取物、黃精提取物為主要原料復(fù)合而成，在本實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)對(duì)負(fù)重游泳時(shí)間、運(yùn)動(dòng)后血清尿素水平、肝糖原貯備量和血乳酸曲線下面積等指標(biāo)的測(cè)定，對(duì)其緩解小鼠體力疲勞作用進(jìn)行了初步研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，復(fù)合瑪咖片可以提高小鼠運(yùn)動(dòng)耐力，延長(zhǎng)小鼠的負(fù)重游泳時(shí)間，降低其運(yùn)動(dòng)后血清尿素水平，提高小鼠的肝糖原含量，具有緩解體力疲勞作用。