柳江楓，楊曄宏，武 樂(lè)，楊俊濤

1中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100005

2南開(kāi)大學(xué)統(tǒng)計(jì)與數(shù)據(jù)科學(xué)學(xué)院，天津 300071

衰老是存在于大多數(shù)生物體的復(fù)雜生物學(xué)過(guò)程，伴隨時(shí)間依賴性的功能衰退[1]。衰老和衰老相關(guān)疾病已為個(gè)體和社會(huì)帶來(lái)日益增長(zhǎng)的負(fù)擔(dān)[2]。因衰老的進(jìn)展機(jī)制復(fù)雜，至今尚不明確，所以一直缺少能夠有效延緩衰老的方案。生物組學(xué)技術(shù)在系統(tǒng)性研究復(fù)雜生物學(xué)過(guò)程中具備優(yōu)勢(shì)，并已應(yīng)用于衰老研究領(lǐng)域[3]。既往研究表明，衰老過(guò)程伴隨基因組不穩(wěn)定、表觀遺傳改變、蛋白質(zhì)穩(wěn)態(tài)丟失和代謝紊亂[1，4]。作為人和小鼠最大的代謝器官，肝臟在衰老過(guò)程中整體變化的研究資料尚不全面。衰老肝臟的生理學(xué)變化不明顯[5- 6]，但分子層面已發(fā)生特征性改變。既往與肝臟衰老相關(guān)的整體性組學(xué)研究大多涉及轉(zhuǎn)錄組學(xué)[7- 8]、DNA甲基化特征[9- 10]、單細(xì)胞測(cè)序[11]等領(lǐng)域，而蛋白質(zhì)組學(xué)研究資料較少。本研究采用串聯(lián)質(zhì)譜標(biāo)簽(tandem mass tag，TMT)標(biāo)記定量和液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，聯(lián)合比較了年輕與年老小鼠肝臟的蛋白質(zhì)組學(xué)與乙?；揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)特征，以期為繼續(xù)深入開(kāi)展衰老研究提供有效數(shù)據(jù)集。

材料和方法

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組野生型雄性C57BL/6J小鼠24只，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，其中，2月齡小鼠14只(年輕組)，18月齡小鼠10只(年老組)。本研究經(jīng)中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用管理與倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理審查編號(hào)ACUC-A02- 2013- 001。

樣本前處理對(duì)小鼠實(shí)施安樂(lè)死后，稱取適量肝臟組織至預(yù)冷的研缽，在液氮環(huán)境將組織研磨成粉末。各樣本分別添加4倍于粉末體積的8 mol/L尿素裂解緩沖液，冰上超聲裂解。離心去除碎片，留上清液作為組織蛋白提取物，用BCA試劑盒(碧云天，P0011)測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。將每7只年輕小鼠的肝臟蛋白樣本混合成1個(gè)樣品，將每5只年老小鼠的肝臟蛋白樣本混合成1個(gè)樣品。混合后的4個(gè)樣品蛋白量相同，用于后續(xù)分析。

用胰酶(Promega，V5280)將各樣品從蛋白質(zhì)酶解為肽段狀態(tài)。根據(jù)TMT試劑盒(Thermo Fisher Scientific，90068)的操作說(shuō)明為各個(gè)樣品的肽段做TMT標(biāo)記。標(biāo)記后的肽段做高效液相色譜分離。用Agilent 300Extend C18(5 μm粒徑，4.6 mm內(nèi)徑，250 mm長(zhǎng))色譜柱分離蛋白質(zhì)組學(xué)分析的樣本，獲得9個(gè)組分。用Thermo Betasil C18(5 μm粒徑，10 mm內(nèi)徑，250 mm長(zhǎng))色譜柱分離乙酰化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)分析的樣本，獲得4個(gè)組分。將應(yīng)用于乙?；揎椃治龅碾亩闻c乙?；瘶?shù)脂(PTM Bio，PTM104)4 ℃共同孵育過(guò)夜。用0.1%三氟乙酸洗脫樹(shù)脂結(jié)合的肽段，留待乙?；揎椃治觥?/p>

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析采用EASY-nLC 1200超高效液相系統(tǒng)進(jìn)行肽段分離。液相色譜流動(dòng)相A相為含0.1%甲酸的水溶液，流動(dòng)相B為含0.1%甲酸和90%乙腈的水溶液。設(shè)置40min液相梯度，流動(dòng)相B從8%提升到80%，流速維持在400 nl/min。

超高效液相系統(tǒng)分離后的肽段被注入NSI離子源進(jìn)行電離，然后進(jìn)入Q ExactiveTMHF-X質(zhì)譜儀進(jìn)行串聯(lián)質(zhì)譜分析。數(shù)據(jù)采集模式選擇數(shù)據(jù)依賴型分析(data-dependent analysis，DDA)模式，一級(jí)掃描選定的母離子進(jìn)入HCD碰撞池進(jìn)行碎裂，肽段母離子及其二級(jí)碎片高分辨率的Orbitrap質(zhì)量分析器檢測(cè)。

數(shù)據(jù)庫(kù)搜索及生物信息分析質(zhì)譜儀生成的原始raw文件用MaxQuant(1.5.2.8)進(jìn)行檢索。數(shù)據(jù)庫(kù)文件選擇2019年6月24日下載并增添反庫(kù)和污染庫(kù)的Swiss-Prot小鼠蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)(17 014條序列)。數(shù)據(jù)庫(kù)搜索參數(shù)與質(zhì)譜儀檢測(cè)參數(shù)保持一致。蛋白質(zhì)組分析的漏切位點(diǎn)設(shè)為2，乙酰化修飾蛋白質(zhì)組分析的漏切位點(diǎn)設(shè)為4。肽段-譜圖匹配、蛋白質(zhì)鑒定和修飾鑒定的假陽(yáng)性率(false discovery rate，F(xiàn)DR)都設(shè)為1%。原始raw文件與MaxQuant搜庫(kù)結(jié)果都通過(guò)iProx[12]上傳至ProteomeXchange，并獲得PXD號(hào)：PXD018003。

MaxQuant生成蛋白質(zhì)、修飾位點(diǎn)鑒定表后，過(guò)濾去除反庫(kù)、污染庫(kù)匹配到的條目，再以每個(gè)樣本的中值做數(shù)據(jù)質(zhì)心化。用Perseus(1.6.5.0)軟件的Significance A算法做差異篩選，Benjamini-Hochberg FDR<0.05的蛋白質(zhì)/位點(diǎn)設(shè)定為差異表達(dá)。用年老小鼠的均值比年輕小鼠的均值計(jì)算每個(gè)蛋白質(zhì)/位點(diǎn)的變化倍數(shù)(fold-change，F(xiàn)C)，F(xiàn)C>1視為衰老過(guò)程中上調(diào)，F(xiàn)C<1視為衰老過(guò)程中下調(diào)。

采用通路分析(ingenuity pathway analysis，IPA)和基因本體(gene ontology，GO)數(shù)據(jù)庫(kù)注釋蛋白質(zhì)，功能富集分析由R包c(diǎn)lusterProfiler[13]實(shí)現(xiàn)。層次聚類分析、主成分分析(principle component analysis，PCA)和圖像可視化由R實(shí)現(xiàn)。乙酰化修飾位點(diǎn)的基序分析應(yīng)用Motif-x算法實(shí)現(xiàn)。

結(jié) 果

年輕與年老小鼠的蛋白質(zhì)組學(xué)整體特征描述蛋白質(zhì)組學(xué)檢測(cè)共生成541 511張二級(jí)譜圖，其中，77 726張二級(jí)譜圖成功匹配到70 092條肽段(40 796條非重復(fù)肽段)，譜圖鑒定率為14.35%，結(jié)果良好。蛋白質(zhì)組學(xué)共鑒定到5831個(gè)蛋白質(zhì)，經(jīng)過(guò)數(shù)據(jù)過(guò)濾篩選，4712個(gè)蛋白質(zhì)可用于定量計(jì)算(圖1A)。肽段長(zhǎng)度主要分布在7～53個(gè)氨基酸范圍內(nèi)(圖1B)，提示胰酶酶切效果好。任意兩樣品間蛋白質(zhì)整體定量的Pearson相關(guān)性系數(shù)≥0.99，提示檢測(cè)體系穩(wěn)定，所得數(shù)據(jù)滿足質(zhì)量控制要求(圖1C)。用層次聚類分析與PCA評(píng)估各樣品整體特征，結(jié)果顯示年輕與年老小鼠肝臟蛋白質(zhì)的整體表達(dá)模式有區(qū)別，且年老小鼠的肝臟蛋白表達(dá)量的變異程度略大于年輕小鼠(圖1D、E)。

A.蛋白質(zhì)組的譜圖、肽段、蛋白質(zhì)鑒定概況；B.蛋白質(zhì)組全部肽段的長(zhǎng)度分布柱狀圖；C.對(duì)蛋白質(zhì)的定量值做log2轉(zhuǎn)換，繪制各樣品定量值的散點(diǎn)圖和密度分布圖，在圖上標(biāo)注樣本間的Pearson相關(guān)性系數(shù)計(jì)算結(jié)果；D.年輕與年老小鼠肝臟蛋白質(zhì)的層次聚類分析(4712個(gè)可定量蛋白，聚類距離=歐氏距離)；E.年輕與年老小鼠肝臟蛋白質(zhì)的主成分分析A.identified spectra and peptides for proteins；B.length distribution of all the identified peptides in the proteome；C.scatter plot and density distribution based on log2(intensity)of quantified proteins，and Pearson correlation coefficients were calculated and displayed in the diagram；D.hierarchical clustering of proteins in livers of young and old mice(4712 quantifiable proteins were used，clustering distance=Euclidean distance)；E.principle component analysis of proteins in livers of young and old mice圖1 年輕與年老小鼠肝臟蛋白質(zhì)組學(xué)整體概況Fig 1 Proteome profiling of livers in young and old mice

年輕與年老小鼠的差異表達(dá)蛋白質(zhì)功能分析采用Perseus軟件的Significance A(雙邊，Benjamini-Hochberg FDR<0.05)算法計(jì)算差異表達(dá)蛋白質(zhì)，結(jié)果顯示，衰老過(guò)程中小鼠肝臟有114個(gè)蛋白質(zhì)表達(dá)量上調(diào)(上調(diào)>1.30倍)，81個(gè)蛋白質(zhì)下調(diào)(下調(diào)<0.80倍)。采用IPA數(shù)據(jù)庫(kù)做亞細(xì)胞定位分析，發(fā)現(xiàn)與整體相比，上調(diào)及下調(diào)的差異蛋白均出現(xiàn)了細(xì)胞核定位比例減少、細(xì)胞外基質(zhì)定位比例增加的現(xiàn)象(圖2A)。功能富集分析顯示，衰老肝臟中上調(diào)的蛋白質(zhì)主要與脂肪酸代謝、環(huán)氧合酶P450途徑、藥物分解代謝、有機(jī)羥基化合物代謝、花生四烯酸代謝等生物學(xué)過(guò)程相關(guān)(圖2B)；衰老肝臟中下調(diào)的蛋白質(zhì)主要與基因沉默、核小體組裝、蛋白質(zhì)異源四聚、干擾素反應(yīng)等生物學(xué)過(guò)程相關(guān)(圖2C)。

GO_BP：基因本體_生物過(guò)程GO_BP：gene ontology_biological processA.蛋白質(zhì)定位情況，總計(jì)4712個(gè)可定量蛋白，114個(gè)上調(diào)蛋白，81個(gè)下調(diào)蛋白；B.衰老時(shí)上調(diào)的蛋白質(zhì)中富集程度最高的15個(gè)GO過(guò)程；C.衰老時(shí)下調(diào)的蛋白質(zhì)中富集程度最高的15個(gè)GO過(guò)程A.location of the total，upregulated，and downregulated proteins；total：4712 quantifiable proteins，up：114 upregulated proteins in aged livers，down：81 downregulated proteins in aged livers；B.top 15 enriched GO processes by upregulated proteins during aging；C.top 15 enriched GO processes by downregulated proteins during aging圖2 衰老過(guò)程中小鼠肝臟的差異蛋白質(zhì)功能分析Fig 2 Functions of differentially expressed proteins in livers of mice during normal aging

年輕與年老小鼠乙酰化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)的整體特征乙?；揎椀鞍踪|(zhì)組共生成146 519張二級(jí)譜圖，其中，18 601張二級(jí)譜圖成功匹配到13 808條肽段(對(duì)應(yīng)1690個(gè)蛋白質(zhì))，譜圖鑒定率為12.7%。存在乙?；揎椀碾亩喂灿?3 606條(6626條非重復(fù)肽段)，對(duì)應(yīng)1669個(gè)蛋白質(zhì)和5640個(gè)乙酰化修飾位點(diǎn)(圖3A)。經(jīng)過(guò)數(shù)據(jù)過(guò)濾篩選，4818個(gè)乙?；稽c(diǎn)(對(duì)應(yīng)1367個(gè)蛋白質(zhì))可被量化并進(jìn)行后續(xù)差異分析。肽段長(zhǎng)度分布集中在7～38個(gè)氨基酸之間(圖3B)，樣品間Pearson相關(guān)性系數(shù)的最小值為0.98(圖3C)，提示乙?；揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)數(shù)據(jù)的質(zhì)量合格。采用層次聚類分析與PCA評(píng)估各樣品中可定量的乙?；揎椢稽c(diǎn)的整體狀況，結(jié)果顯示，年輕與年老小鼠肝臟的乙?；稽c(diǎn)表達(dá)有整體區(qū)別，且年老小鼠的肝臟乙?；揎椬儺惓潭嚷源笥谀贻p小鼠(圖3D、E)。

A.乙酰化修飾蛋白質(zhì)組的譜圖、肽段、蛋白質(zhì)鑒定概況；B.乙?；揎椀鞍踪|(zhì)組全部肽段的長(zhǎng)度分布柱狀圖；C.對(duì)乙?；揎椢稽c(diǎn)的定量值做log2轉(zhuǎn)換，繪制各樣品定量值的散點(diǎn)圖和密度分布圖，在圖上標(biāo)注樣本間的Pearson相關(guān)性系數(shù)計(jì)算結(jié)果；D.年輕與年老小鼠肝臟蛋白質(zhì)乙?；稽c(diǎn)的層次聚類分析(4818可定量的乙?；稽c(diǎn)，聚類距離=歐氏距離)；E.年輕與年老小鼠肝臟蛋白質(zhì)乙酰化位點(diǎn)的主成分分析A.identified spectra and peptides for acetylated proteins；B.length distribution of all the identified acetylated peptides；C.scatter plot and density distribution based on log2(intensity)of quantified acetylated sites，Pearson correlation coefficients were calculated and displayed in the diagram；D.hierarchical clustering of acetylated sites in livers of young and old mice(4818 quantifiable acetylated sites were used；clustering distance=Euclidean distance)；E.principle component analysis of acetylated sites in livers of young and old mice圖3 年輕與年老小鼠肝臟乙?；揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)概況Fig 3 Acetylome profiling of livers in young and old mice

采用Motif-x算法分析肝臟乙?；揎椢稽c(diǎn)的基序特征，發(fā)現(xiàn)在肝臟發(fā)生了乙?；揎椀牡鞍踪|(zhì)中，酸性氨基酸，即天冬氨酸與谷氨酸出現(xiàn)在乙?；揎椯嚢彼徉徑恢玫念l率最高(圖4)。

圖4 小鼠肝臟乙?；揎椢稽c(diǎn)的基序分析Fig 4 Motifs of acetylated sites in mouse liver

年輕與年老小鼠中差異乙?；揎椀鞍椎墓δ芊治霾捎肧ignificance A(雙邊，Benjamini-Hochberg FDR<0.05)算法計(jì)算差異表達(dá)的乙?；稽c(diǎn)，結(jié)果顯示，衰老過(guò)程中小鼠肝臟有60個(gè)乙?；稽c(diǎn)(位于39個(gè)蛋白質(zhì)中)上調(diào)(上調(diào)>1.69倍)，53個(gè)乙酰化位點(diǎn)(位于38個(gè)蛋白質(zhì)中)下調(diào)(下調(diào)<0.63倍)。IPA定位分析顯示，與定量蛋白質(zhì)組學(xué)相比，乙酰化修飾蛋白質(zhì)定位于細(xì)胞質(zhì)的比例明顯增加(圖5A)。與全部乙?；揎椀鞍踪|(zhì)相比，表達(dá)差異乙?；稽c(diǎn)的蛋白質(zhì)定位于細(xì)胞核的比例有所下降，定位于細(xì)胞外基質(zhì)的比例有所增加(圖5A)。功能富集分析顯示，具有上調(diào)乙?；稽c(diǎn)的39個(gè)蛋白質(zhì)，與輔因子代謝、小分子分解代謝、磷酸核糖代謝、核糖核苷酸代謝、嘌呤代謝等生物學(xué)過(guò)程相關(guān)(圖5B)；含下調(diào)乙?；稽c(diǎn)的38個(gè)蛋白質(zhì)，主要與含硫化合物代謝、未折疊蛋白反應(yīng)、氨基酸代謝等生物學(xué)過(guò)程相關(guān)(圖5C)。

蛋白質(zhì)組學(xué)與乙?；揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)的功能范圍比較蛋白質(zhì)組學(xué)與乙?；揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)共同鑒定到1262個(gè)蛋白質(zhì)，只被蛋白質(zhì)組學(xué)鑒定到而不被乙?；揎椀牡鞍子?450個(gè)；只能在乙?；患蟊昏b定到的蛋白質(zhì)有105個(gè)(圖6A)。功能富集分析顯示，能被總蛋白質(zhì)組鑒定而不發(fā)生乙?；牡鞍踪|(zhì)主要與高爾基體囊泡轉(zhuǎn)運(yùn)、mRNA加工、內(nèi)膜系統(tǒng)組裝、蛋白質(zhì)在細(xì)胞器的定位和RNA剪接相關(guān)(圖6B)；能被總蛋白質(zhì)組鑒定且發(fā)生乙?；牡鞍踪|(zhì)，主要與輔因子代謝、小分子分解代謝、氨基酸代謝、組織酸分解代謝和羧酸分解代謝過(guò)程相關(guān)(圖6C)；只能在乙?；患蟊昏b定到的105種蛋白質(zhì)，主要與蛋白質(zhì)乙?；磅；?、蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物組裝、組蛋白修飾和共價(jià)染色質(zhì)修飾相關(guān)(圖6D)。

A.韋恩圖展示蛋白質(zhì)組鑒定到的全部可定量蛋白質(zhì)與乙?；揎椀鞍踪|(zhì)組鑒定到的全部蛋白質(zhì)的匹配情況；B.僅被蛋白質(zhì)組鑒定到的3450個(gè)蛋白質(zhì)中富集程度最高的5個(gè)GO過(guò)程；C.同時(shí)被蛋白質(zhì)組和乙?；揎椀鞍踪|(zhì)組鑒定到的1262個(gè)蛋白質(zhì)中富集程度最高的5個(gè)GO過(guò)程；D.僅被乙?；揎椀鞍踪|(zhì)組鑒定到的105個(gè)蛋白質(zhì)中富集程度最高的5個(gè)GO過(guò)程A.Venn diagram of all quantifiable proteins in the proteome and all acetylated proteins in the acetylome；B.top 5 enriched GO processes by the 3450 proteins only identified in the proteome；C.top 5 enriched GO processes by the 1 262 proteins identified in both the proteome and acetylome；D.top 5 enriched GO processes by the 105 proteins only identified in the acetylome圖6 蛋白質(zhì)組學(xué)與乙酰化修飾蛋白質(zhì)組學(xué)所鑒定蛋白的功能異同F(xiàn)ig 6 Comparison of biological functions between proteome and acetylome in livers

討 論

本研究采用TMT標(biāo)記定量與液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)聯(lián)合檢測(cè)生理狀態(tài)下年輕與年老雄性C57BL/6J小鼠肝臟的蛋白質(zhì)組學(xué)與乙?；揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)，為衰老研究提供了可資參考的有效數(shù)據(jù)集。年輕與年老小鼠的蛋白質(zhì)組與乙酰化修飾蛋白質(zhì)組的整體表達(dá)模式有區(qū)別，但差異較小。本研究與既往自然衰老相關(guān)的小鼠多器官蛋白質(zhì)組學(xué)[14]和肝臟轉(zhuǎn)錄組學(xué)[7]研究結(jié)果共同表明，衰老過(guò)程中生物大分子的整體表達(dá)雖然有所變化，但這種變化并不劇烈。

乙?；且环N可以將生理過(guò)程與基因調(diào)控耦聯(lián)起來(lái)的蛋白質(zhì)翻譯后修飾[15]，對(duì)細(xì)胞內(nèi)代謝改變敏感，代謝過(guò)程產(chǎn)生的乙酰輔酶A是乙?；揎椀奶荚碵16]。乙?；稽c(diǎn)的表達(dá)水平一定程度上受該位點(diǎn)所在蛋白質(zhì)表達(dá)水平的影響。但不同批次的質(zhì)譜檢測(cè)結(jié)果之間獨(dú)立性較強(qiáng)，所以蛋白質(zhì)組學(xué)與乙?；揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)的定量研究分開(kāi)進(jìn)行。在小鼠肝臟衰老過(guò)程中，蛋白質(zhì)組鑒定到的上調(diào)蛋白質(zhì)主要與脂肪酸代謝、環(huán)氧合酶P450途徑、藥物分解代謝、有機(jī)羥基化合物代謝、花生四烯酸代謝等代謝過(guò)程相關(guān)；衰老肝臟下調(diào)的蛋白質(zhì)包含組蛋白，主要與基因沉默、核小體組裝、蛋白質(zhì)異源四聚、干擾素反應(yīng)、蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物組裝等生物學(xué)過(guò)程相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，乙酰化偏向于修飾代謝過(guò)程相關(guān)的蛋白質(zhì)且廣泛存在于組蛋白中，可能調(diào)節(jié)代謝功能和染色質(zhì)組裝[1，4]。

在做液相色譜-質(zhì)譜檢測(cè)前，本研究對(duì)提取的蛋白質(zhì)做了等量混合處理。樣本混合可以有效減少因個(gè)體差異較大導(dǎo)致的數(shù)據(jù)離散，但也對(duì)應(yīng)用經(jīng)典的雙樣本t檢驗(yàn)做差異篩選帶來(lái)限制。Significance A算法可用于分析每組有2個(gè)生物學(xué)重復(fù)的比較組，因此被應(yīng)用于本研究[17]。本研究選擇TMT標(biāo)記作為定量方法，與非標(biāo)記定量相比，在蛋白質(zhì)酶解后即引進(jìn)TMT標(biāo)記可減少后續(xù)檢測(cè)步驟引起的系統(tǒng)誤差，各樣本定量更準(zhǔn)確。但TMT標(biāo)記同時(shí)會(huì)導(dǎo)致差異幅度被壓縮和修飾解析復(fù)雜性增強(qiáng)的問(wèn)題[18]。TMT定量方法不能測(cè)定特異性存在于年輕小鼠或特異性存在于年老小鼠的肽段、蛋白質(zhì)或修飾位點(diǎn)，因?yàn)橹挥型瑫r(shí)存在于每個(gè)樣本的肽段才能被檢測(cè)到。TMT的技術(shù)特點(diǎn)導(dǎo)致獲取的差異蛋白質(zhì)和乙?；揎椢稽c(diǎn)數(shù)目較少，但也相應(yīng)排除了大量干擾測(cè)定的因素，使鑒定結(jié)果更注重整體趨勢(shì)變化。技術(shù)方法與統(tǒng)計(jì)分析方法進(jìn)步將進(jìn)一步提升衰老相關(guān)研究的數(shù)據(jù)容量與質(zhì)量。整合不同年齡、性別、器官的多維度數(shù)據(jù)也將幫助人們規(guī)避測(cè)量偏差[19]，全面認(rèn)識(shí)衰老過(guò)程。

綜上，本研究為衰老相關(guān)機(jī)制研究和干預(yù)方法探索提供了蛋白質(zhì)組學(xué)與乙?；揎椀鞍踪|(zhì)組學(xué)的較為完善的數(shù)據(jù)集。