羅福廣，王志強(qiáng)，文衍紅，黃杰

(柳州市漁業(yè)技術(shù)推廣站，廣西 柳州545006)

長期以來，水產(chǎn)養(yǎng)殖病害防治一直處于診斷技術(shù)不規(guī)范、檢測設(shè)備落后的局面，加上病害種類繁多和綜合因素(環(huán)境、宿主、病原)復(fù)雜，“是什么病、用什么藥、怎么用藥”經(jīng)常困惑著水產(chǎn)養(yǎng)殖從業(yè)者。近年來，國家在基礎(chǔ)水生動(dòng)物疫病防控體系建設(shè)上加大了力度，大多數(shù)水產(chǎn)技術(shù)推廣部門建立了水生動(dòng)物病害防治實(shí)驗(yàn)室，依托實(shí)驗(yàn)室專業(yè)的檢測設(shè)備和規(guī)范的檢測方法，可有效解決是什么病、由什么病原引起、對(duì)什么藥物敏感、多少劑量適宜等問題，為制定病防措施和精準(zhǔn)使用藥物提供科學(xué)參考。然而，在實(shí)驗(yàn)室檢測方法正確和操作者技術(shù)嫻熟的前提下，還是不可避免出現(xiàn)誤診、漏診現(xiàn)象。目前一些水產(chǎn)養(yǎng)殖發(fā)達(dá)地區(qū)或大型水產(chǎn)企業(yè)在其養(yǎng)殖基地配備了一些簡易實(shí)驗(yàn)室，操作嫻熟的技術(shù)員能夠在病害發(fā)生現(xiàn)場采集到準(zhǔn)確的病害樣品和信息，極大地提高了病害診斷效率和用藥準(zhǔn)確率，但是對(duì)于水產(chǎn)養(yǎng)殖相對(duì)落后、養(yǎng)殖場小而分散、養(yǎng)殖場技術(shù)員專業(yè)素質(zhì)較低的地區(qū)難以實(shí)現(xiàn)對(duì)病害有效數(shù)據(jù)的采集，造成實(shí)驗(yàn)室專業(yè)設(shè)備與檢測工作實(shí)效性脫節(jié)。

在上述工作背景下，筆者結(jié)合廣西柳州市及周邊地區(qū)水產(chǎn)養(yǎng)殖特點(diǎn)與實(shí)際情況，總結(jié)了作為試點(diǎn)單位自2018年以來開展水產(chǎn)養(yǎng)殖“用藥減量行動(dòng)”實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，提出了適合基層水產(chǎn)技術(shù)推廣部門的“兩精四現(xiàn)場”工作法，及時(shí)準(zhǔn)確地采集了病害數(shù)據(jù)，為實(shí)驗(yàn)室精準(zhǔn)檢測和下一步科學(xué)指導(dǎo)本地區(qū)水產(chǎn)養(yǎng)殖企業(yè)病害防控提供工作保障。

所謂“兩精四現(xiàn)場”，指的是通過現(xiàn)場“詢問、測水、鏡檢、采樣”的工作方法，初步采集獲得準(zhǔn)確有效的綜合信息、數(shù)據(jù)、致病病原等，結(jié)合實(shí)驗(yàn)室專業(yè)檢測，從而達(dá)到“精確診斷、精準(zhǔn)用藥”的目的。其中，“兩精”為指導(dǎo)思想，“四現(xiàn)場”為具體操作方法。“兩精四現(xiàn)場”工作法適用于各級(jí)水產(chǎn)養(yǎng)殖推廣機(jī)構(gòu)開展日常水生動(dòng)物疾病診斷，并提出科學(xué)合理的診治策略，減少了錯(cuò)用、亂用、濫用，以及反復(fù)過量使用藥物，最終形成水產(chǎn)養(yǎng)殖用藥減量或不用藥的新格局，實(shí)現(xiàn)漁業(yè)可持續(xù)健康發(fā)展。

一、準(zhǔn)備工作

生物顯微鏡(可充電)、便攜式水質(zhì)快速檢測儀或水質(zhì)快速分析試劑盒、采水器、解剖盤及相關(guān)器械、細(xì)菌培養(yǎng)平板、接種針(環(huán))、酒精燈、采樣桶、采樣瓶、載玻片、蓋玻片、封口膜、革蘭氏染色試劑盒、吉姆薩染液、記號(hào)筆、一次性吸管、75%酒精棉球、打火機(jī)等現(xiàn)場數(shù)據(jù)采集相關(guān)設(shè)備和耗材。設(shè)備耗材的數(shù)量根據(jù)采樣量的多少適當(dāng)準(zhǔn)備。

二、工作步驟

1.現(xiàn)場詢問仔細(xì)詢問記錄養(yǎng)殖品種、密度、苗種來源、餌料來源、病情現(xiàn)狀、病樣特征、曾用藥或周邊用藥、周邊養(yǎng)殖環(huán)境等，了解病情基本情況，結(jié)合下一步檢測結(jié)果再綜合診斷?，F(xiàn)場詢問對(duì)病情的初步預(yù)判具有極為重要的指導(dǎo)作用，有經(jīng)驗(yàn)的技術(shù)員可以通過比較以往該養(yǎng)殖場的病害發(fā)生規(guī)律與發(fā)生特點(diǎn)的相似性來做出初步診斷。例如某養(yǎng)殖場同一個(gè)養(yǎng)殖時(shí)期暴發(fā)某種病征相同的疾病時(shí)，即可初步確定病害發(fā)生的種類，以便在下一步檢測工作開展過程中及時(shí)做出前期處理，降低病害造成的損失。此外，現(xiàn)場詢問對(duì)一些突發(fā)事件也具有重要的指導(dǎo)意義，例如可能是某種藥物中毒死亡或水質(zhì)污染死亡的，可以根據(jù)詢問得知曾用藥或周邊用藥、周邊水質(zhì)污染情況以及死亡特點(diǎn)等來輔助判斷。

2.現(xiàn)場測水(圖1)有條件的單位，可使用便攜式水質(zhì)快速檢測儀獲得病害發(fā)生現(xiàn)場的即時(shí)數(shù)據(jù)，其他單位可采用商品化的水質(zhì)快速分析試劑盒進(jìn)行現(xiàn)場采水測定，記錄當(dāng)時(shí)常規(guī)漁業(yè)水質(zhì)數(shù)據(jù)基本情況。即時(shí)測水能夠快速判斷當(dāng)時(shí)水體的情況，如果是因?yàn)樗|(zhì)異常而造成的病害死亡，可當(dāng)即采取措施緩解。例如因水體缺氧造成的魚死亡，可以立即采取化學(xué)或物理增氧來改善；因亞硝酸鹽氮或氨氮超標(biāo)造成的魚死亡，可以通過改底、逐步換水、潑灑微生物制劑等辦法來改善。發(fā)生病害的水體同時(shí)水質(zhì)異常的，先要改善水質(zhì)，下一步再進(jìn)行針對(duì)性的防治措施。由于養(yǎng)殖水體指標(biāo)一天之內(nèi)數(shù)值有較大變化，加上水樣經(jīng)過長期運(yùn)輸也會(huì)發(fā)生變化，送樣到實(shí)驗(yàn)室檢測水質(zhì)結(jié)果往往不大準(zhǔn)確，易引起誤判。現(xiàn)場快速檢測的方法雖然沒有實(shí)驗(yàn)室檢測那么精確，但是能夠了解當(dāng)時(shí)水體指標(biāo)大致的區(qū)間范圍，以滿足初步判斷水質(zhì)因素是否為引起病害發(fā)生或加劇病情發(fā)展的主要因素。此外現(xiàn)場測水還具有很高的靈活性，可以在多點(diǎn)位測量，如上風(fēng)口、下風(fēng)口、水源、食場等，在制定病害防治策略時(shí)可更全面的考慮。

圖1 現(xiàn)場測水

3.現(xiàn)場鏡檢(圖2)采集5～10尾具典型病征瀕死魚，取病灶組織或體液鏡檢，根據(jù)鏡檢結(jié)果做出初步診斷。由于絕大多數(shù)寄生蟲可以通過肉眼或普通生物顯微鏡檢測出來，因此對(duì)寄生蟲病的確診較為迅速。瀕死的魚在鏡檢時(shí)更容易檢出寄生蟲，應(yīng)及時(shí)鏡檢。而在送樣到實(shí)驗(yàn)室檢測的過程中，由于病魚驚嚇刺激后易死亡或送樣時(shí)間過長后水質(zhì)發(fā)生變化、未使用原塘水暫養(yǎng)等因素，許多寄生蟲因魚體和水體劇烈變化而脫離寄主或者死亡(例如車輪蟲和斜管蟲等)，從而影響檢測結(jié)果引起誤判。

圖2 現(xiàn)場鏡檢

此外，現(xiàn)場鏡檢還可以輔助判斷一些較大型、不易分離的致病菌株如諾卡氏菌、分枝桿菌和各種真菌類致病菌，以及采集瀕死魚的血液制作血涂片觀察血相等，因此現(xiàn)場鏡檢能夠最大限度地反映病情程度，及時(shí)確診病害發(fā)生的種類，從而提高診斷準(zhǔn)確率。

4.現(xiàn)場采樣在現(xiàn)場采集典型病征瀕死魚樣后立即現(xiàn)場解剖，在盡可能干凈無風(fēng)的區(qū)域完成病灶處細(xì)菌接種至培養(yǎng)平板的操作(圖3)。在新鮮病灶采集到的病原菌更容易在接種劃線處生長形成優(yōu)勢菌落，可以通過12～24小時(shí)培養(yǎng)再純化獲得。而長時(shí)間低溫運(yùn)送鮮活病樣或冷凍樣品過程中，病灶易受水體或體內(nèi)其他非致病易生長菌類污染，從而增加下一步檢測、驗(yàn)證工作量以及引起誤判。現(xiàn)場接菌采樣法是我們經(jīng)過反復(fù)實(shí)踐和驗(yàn)證并行之有效的病原菌采集法，能夠有效提高致病菌的檢出效率，為下一步細(xì)菌藥敏檢測、細(xì)菌鑒定、細(xì)菌體外藥效檢測提供保障。

圖3 現(xiàn)場采樣及接種

三、小結(jié)

《農(nóng)業(yè)農(nóng)村部水產(chǎn)養(yǎng)殖用藥減量行動(dòng)方案》指出，水產(chǎn)技術(shù)推廣部門是“推廣機(jī)構(gòu)＋科研院所＋推廣點(diǎn)＋養(yǎng)殖戶”技術(shù)服務(wù)體系中的主導(dǎo)單位，必須要強(qiáng)化履行關(guān)鍵農(nóng)業(yè)技術(shù)試驗(yàn)示范等公益性職責(zé)的能力，提升服務(wù)效能。因此，如何充分利用好現(xiàn)有實(shí)驗(yàn)室專業(yè)檢測設(shè)備和技術(shù)條件，實(shí)現(xiàn)“精準(zhǔn)診斷、精確用藥”，提升水生動(dòng)物病害防控指導(dǎo)服務(wù)能力，是各級(jí)水產(chǎn)技術(shù)推廣部門落實(shí)行動(dòng)部署的主要手段之一。“兩精四現(xiàn)場”工作法契合了水產(chǎn)技術(shù)推廣部門的工作實(shí)際，將實(shí)驗(yàn)室檢測功能延伸到病害發(fā)生現(xiàn)場，通過優(yōu)化工作方法極大提高了水生動(dòng)物疾病診斷的準(zhǔn)確率和臨床用藥效果，避免了亂用、濫用和反復(fù)用藥，同時(shí)結(jié)合發(fā)展生態(tài)養(yǎng)殖、使用優(yōu)質(zhì)苗種、強(qiáng)化疫病監(jiān)測、規(guī)范生產(chǎn)管理和科學(xué)指導(dǎo)用藥等技術(shù)措施，進(jìn)一步達(dá)到用藥減量或不用藥的目的。