王 媛

（連云港市贛榆區(qū)綜合檢驗(yàn)檢測(cè)中心，江蘇連云港 222100）

當(dāng)前，人們高度重視食品安全問(wèn)題，在探索和研究各類食品安全檢測(cè)方法方面已取得了矚目成果。黃曲霉毒素B1的毒性和致癌性極強(qiáng)，通過(guò)污染糧食作物及其制品從而對(duì)人畜健康構(gòu)成威脅，需高度重視其檢測(cè)工作的開(kāi)展。基于此，本文介紹了幾種用于檢測(cè)食品中黃曲霉毒素B1的方法。

1 食品中黃曲霉毒素B1檢測(cè)重要性

黃曲霉毒素B1的性質(zhì)穩(wěn)定，處于282 ℃的高溫下才會(huì)裂解，且持續(xù)2 h的高壓滅菌僅能降低其25%～33%的毒力，圖1是其結(jié)構(gòu)式。黃曲霉毒素B1的毒性會(huì)損害人及動(dòng)物肝臟組織，甚至有可能引起肝癌，嚴(yán)重的情況下會(huì)導(dǎo)致死亡[1]。鑒于其致癌性極強(qiáng)的緣故，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 2761—2017中明確規(guī)定了黃曲霉素B1的限量值，但食品具備復(fù)雜的基質(zhì)，在檢測(cè)食品中黃曲霉毒素B1時(shí)，必須使用靈敏度較高同時(shí)具備高度選擇性的方法，提高檢測(cè)結(jié)果精確性，以便保障人們的身體健康。

圖1 黃曲霉毒素B1結(jié)構(gòu)式

2 食品中黃曲霉毒素B1檢測(cè)方法

在檢測(cè)食品中黃曲霉毒素B1時(shí)，可供使用的方法有很多，本文主要介紹了電子鼻法、高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、時(shí)間分辨熒光免疫分析法、酶聯(lián)免疫法及熒光分光光度法5種方法，并在表1中歸納了各種方法的優(yōu)劣勢(shì)。

表1 黃曲霉毒素B1常用檢測(cè)方法優(yōu)劣勢(shì)

2.1 電子鼻法

作為近年來(lái)新興檢測(cè)技術(shù)之一的電子鼻屬于電子感官儀，主要包含了傳感和自動(dòng)化識(shí)別兩大系統(tǒng)。由于綜合應(yīng)用了數(shù)學(xué)、物理、材料、神經(jīng)及生理等諸多理論，能迅速完成復(fù)雜氣味和氣體的識(shí)別，通過(guò)氣味數(shù)學(xué)模型的構(gòu)建及應(yīng)用，完成霉變食物特殊氣味的檢測(cè)。該方法用于黃曲霉毒素檢測(cè)中，可通過(guò)對(duì)黃曲霉毒素污染后的糙米在酮、芳香烴、醛類揮發(fā)性物質(zhì)變化進(jìn)行檢測(cè)，以特征性氣味感知、不同氣味在傳感器響應(yīng)值方面的區(qū)別為根據(jù)，結(jié)合相應(yīng)的數(shù)學(xué)方法即可完成檢測(cè)[2]。根據(jù)該方法的檢測(cè)結(jié)果得知，電子鼻技術(shù)有極高的檢測(cè)準(zhǔn)確度。

2.2 高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法

利用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法檢測(cè)時(shí)，需結(jié)合色譜保留時(shí)間、質(zhì)譜碎片及其離子豐度比定性進(jìn)行測(cè)定。實(shí)際檢測(cè)中，存在干擾待測(cè)物質(zhì)離子化的相關(guān)因素，且自身待測(cè)物質(zhì)也可能會(huì)產(chǎn)生影響，降低或增加待測(cè)信號(hào)，形成基質(zhì)效應(yīng)。原因主要是生物樣品中內(nèi)源性成分的存在或融入樣品前處理中的外源性成分的影響。所以在樣品本身、基質(zhì)及前處理中，檢測(cè)結(jié)果會(huì)受到色譜條件及離子化模式的干擾，導(dǎo)致食品中黃曲霉毒素B1的檢測(cè)受到影響[3]。有研究采用該方法檢測(cè)黃曲霉毒素B1，結(jié)果表明，以甲醇和水60︰40的比例提煉樣品，采取黃曲霉毒素免疫親和柱凈化，流動(dòng)相選擇0.1%的甲酸乙腈溶液和1%的甲酸水溶液，選擇平常模式下的電子噴霧離子源測(cè)定花生中黃曲霉毒素B1時(shí)，測(cè)得其含量范圍為0.1～56 ng/mL，具備較高的相關(guān)系數(shù) （0.999 45），檢測(cè)最低限和定量限分別為0.02 μg/kg、 0.10 μg/kg。該結(jié)果證明了該方法在檢測(cè)復(fù)雜樣品中黃曲霉毒素時(shí)較為適用，且應(yīng)用價(jià)值較好。

2.3 時(shí)間分辨熒光免疫法

時(shí)間分辨熒光免疫法中的示蹤劑為具備獨(dú)特?zé)晒馓匦缘?價(jià)稀土離子及其螯合物，在完成抗體、抗原的標(biāo)記并在發(fā)生反應(yīng)體系后，通過(guò)TRFIA檢測(cè)儀對(duì)反應(yīng)物中熒光強(qiáng)度展開(kāi)測(cè)定。該方法支持全自動(dòng)操作，具備廣泛的應(yīng)用范圍，且操作流程短、有效期長(zhǎng)、標(biāo)準(zhǔn)曲線量程寬[4]。采取該方法檢測(cè)食品中黃曲霉毒素B1時(shí)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得知該方法具備0.01～30.00 μg/L的檢測(cè)范圍，靈敏度一般為0.02 μg/L，回收率91%～104%，適用于食品中黃曲霉毒素B1的檢測(cè)。

2.4 酶聯(lián)免疫吸附法

酶聯(lián)免疫吸附法建立在抗原抗體反應(yīng)理論的基礎(chǔ)上，通過(guò)單克隆或多克隆抗體技術(shù)的應(yīng)用檢測(cè)，原理是酶標(biāo)記的抗原抗體、吸附于載體上的免疫吸附劑和標(biāo)本中待測(cè)物之間形成特異免疫學(xué)反應(yīng)后，添加酶底物會(huì)有顯色反應(yīng)產(chǎn)生，根據(jù)反應(yīng)中顏色的深淺完成樣品中待測(cè)物含量的判斷[5]。該方法目前包含競(jìng)爭(zhēng)法、間接法和抗體夾心法3種常用的測(cè)定方法。

在應(yīng)用該方法檢測(cè)時(shí)，由于酶活性極易受條件影響，因此測(cè)定結(jié)果一般不具備可觀的穩(wěn)定性，出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果的可能極高，分析結(jié)果準(zhǔn)確性和精確度不高。同時(shí)，酶聯(lián)免疫試劑盒有著諸多種類，且不存在統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，具體使用前需要驗(yàn)證試劑盒質(zhì)量、回收率和定量限，確保適用于本次檢測(cè)中。

2.5 熒光分光光度法

采用該方法檢測(cè)黃曲霉毒素B1時(shí)，由于黃曲霉毒素B1本身熒光活性偏低，選擇含有黃曲霉毒素的提取液通過(guò)免疫親和柱的凈化后，結(jié)合碘液或溴水展開(kāi)衍生化反應(yīng)。反應(yīng)后，黃曲霉毒素B1會(huì)與G1衍生為熒光活性較高的穩(wěn)定形式，確定360 nm激發(fā)光、450 nm發(fā)射光的條件后，結(jié)合熒光分光光度計(jì)對(duì)黃曲霉毒素總量展開(kāi)檢測(cè)。

近年來(lái)，有關(guān)黃曲霉毒素B1與G1的衍生方面研發(fā)了新方法，結(jié)合β-環(huán)糊精（β-CD）促成衍生反應(yīng)，在黃曲霉毒素B1衍生中應(yīng)用不同取代基的β-環(huán)糊精[6]。采取該方法檢測(cè)黃曲霉毒素B1時(shí)，通過(guò)羥乙基-β-環(huán)糊精（HE-β-CD）促成衍生化反應(yīng)后，在2～40 μg/kg，黃曲霉毒素B1與體系熒光間有良好的線性關(guān)系，檢出限0.079 μg/kg，相關(guān)系數(shù)0.999 8。 利用該方法分析花生樣品中黃曲霉毒素B1時(shí)，能獲取良好的精密度和準(zhǔn)確度。

3 結(jié)語(yǔ)

在檢測(cè)食品中黃曲霉毒素B1時(shí)，可供使用的方法諸多，且每種檢測(cè)方法都有獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)存在，但也存在一定的缺點(diǎn)。因此在具體檢測(cè)中，要求檢測(cè)機(jī)構(gòu)在遵循相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)及規(guī)定的基礎(chǔ)上，以自身?xiàng)l件為依據(jù)合理進(jìn)行檢測(cè)方法的選擇，并突出方法的高效率與高準(zhǔn)確度，保證檢測(cè)結(jié)果的精確性，保障人們的飲食安全。