黃 英，蔣 龍

（深圳信測(cè)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)服務(wù)有限公司，廣東深圳 518000）

尼卡巴嗪是一種廣譜的抗球蟲(chóng)劑，常用于防治雞等禽類球蟲(chóng)病。4,4’-二硝基均二苯脲（下文均用DNC表示）是尼卡巴嗪成分之一，是起抗蟲(chóng)效果的主要活性成分，通常將其作為尼卡巴嗪的殘留標(biāo)志物。本文通過(guò)對(duì)測(cè)量DNC殘留量的過(guò)程進(jìn)行分析，識(shí)別不確定度來(lái)源，列出影響測(cè)定結(jié)果的不確定度因素，計(jì)算相對(duì)擴(kuò)展不確定度[1-2]。

1 測(cè)量方法和數(shù)學(xué)模型

1.1 測(cè)量方法

①材料。DNC標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、乙腈、甲醇。②步驟。取均質(zhì)后雞肉樣品m（2 g），加乙腈提取，取上層液濃縮，定容至V（1.0 mL），濾膜過(guò)濾。③設(shè)備。液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（AB）、萬(wàn)分之一天平。④色譜條件。色譜柱C18，流速 0.3 mL/min。

1.2 數(shù)學(xué)模型

樣品與標(biāo)準(zhǔn)溶液同時(shí)測(cè)定，以峰面積比值為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上求得樣品溶液的濃度，按公式計(jì)算待測(cè)樣中DNC的含量，計(jì)算公式：

式中：X-待測(cè)樣中DNC的含量，μg/kg；C-由標(biāo)準(zhǔn)曲線所得的DNC濃度，ng/mL；V-樣品最終定容體積，mL；m-取樣量，g。

X是由C、V、m計(jì)算得到的，因此X的不確定度分別由C、V、m的不確定度合成，采用相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度分析。

2 測(cè)量總相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度的來(lái)源

由標(biāo)準(zhǔn)曲線所得DNC濃度的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（C），樣品稱量產(chǎn)生的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（m）， 樣品定容產(chǎn)生的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（V），重復(fù)性測(cè)量產(chǎn)生的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（重復(fù)），因此urel(總)=。各相對(duì)不確定度分量及其影響因素[4]見(jiàn)圖1。

圖1 不確定度來(lái)源分析

3 測(cè)量不確定度的計(jì)算

3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線所得的DNC濃度的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(C)

3.1.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液產(chǎn)生的相對(duì)不確定度urel（標(biāo)準(zhǔn)）

（1）配制標(biāo)準(zhǔn)工作液產(chǎn)生的相對(duì)不確定度。DNC標(biāo)準(zhǔn)溶液：100 μg/mL，不確定度為5%，k=2。配制標(biāo)準(zhǔn)工作液： 1.00 μg/mL、0.10 μg/mL、0.01 μg/mL。①使用10 mL容量瓶（A級(jí)），允差為0.02 mL，使用3次。②使用20～200 μL 移液器，允差為0.002 mL，使用2次。③使用100～1 000 μL 移液器，允差為0.01 mL，使用1次。④DNC標(biāo)準(zhǔn)溶液產(chǎn)生的不確定度為。按矩形分布，以上4項(xiàng)合成配制標(biāo)準(zhǔn)工作液的相對(duì)不確定度為：

（2）配制曲線使用容量瓶產(chǎn)生的相對(duì)不確定度。使用 5 mL容量瓶（A級(jí)），允差為0.02 mL，使用6次，按矩形分布計(jì)算相對(duì)不確定度為：

（3）配制曲線使用移液器時(shí)產(chǎn)生的相對(duì)不確定度。使用100～1 000 μL移液器，允差為0.005 mL、0.010 mL。0.250 mL、 0.500 mL和1.000 mL各移取2次，按矩形分布計(jì)算相對(duì)不確定度為：

合并（2）（3）（4）得標(biāo)準(zhǔn)溶液的相對(duì)不確定度為：

3.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線所得DNC濃度的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel（C）

標(biāo)準(zhǔn)曲線為6個(gè)濃度點(diǎn)，每個(gè)濃度測(cè)定3次，共n=18個(gè)。由實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行線性擬合得線性方程y=0.414 32x-0.116 07，相關(guān)系數(shù)0.998 5。對(duì)樣品測(cè)量7次，由峰面積比值通過(guò)直線方程求得其濃度，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 樣品參數(shù)

依據(jù)式[3]：

式中：u(c樣液)代表標(biāo)準(zhǔn)曲線求得C樣液產(chǎn)生的不確定度；SA/C代表標(biāo)準(zhǔn)曲線求得的A標(biāo)和相應(yīng)的Ai的回歸剩余標(biāo)準(zhǔn)差；m代表樣品溶液的測(cè)定次數(shù)，m=7；n代表標(biāo)準(zhǔn)溶液測(cè)定的次數(shù)，n=18；b代表回歸系數(shù)；C樣液代表樣品處理液中DNC的濃度，ng/mL；C代表樣品處理液中DNC濃度的回歸值，ng/mL；C代表標(biāo)準(zhǔn)溶液中DNC濃度平均值，ng/mL；Ci代表各標(biāo)準(zhǔn)溶液中DNC濃度，ng/mL；Ai代表標(biāo)準(zhǔn)溶液各點(diǎn)峰面積的測(cè)定值；A標(biāo)代表標(biāo)準(zhǔn)溶液各點(diǎn)峰面積的回歸值。

計(jì)算：SA/C為0.335，u(c樣液)為0.360 ng/mL，得urel（回歸）=，綜上得：。

3.2 重復(fù)性測(cè)量產(chǎn)生的相對(duì)不確定度urel（重復(fù)）

3.3 樣品稱量產(chǎn)生的相對(duì)不確定度urel(m)

使用萬(wàn)分之一天平，允差為0.5 mg，按矩形分布計(jì)算相對(duì)不確定度為

3.4 樣品定容產(chǎn)生的相對(duì)不確定度urel（V）

使用100～1 000 μL移液器，允差為0.01 mL，按矩形分布計(jì)算相對(duì)不確定度為

3.5 合成總相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度

當(dāng) 包 含 因 子k=2，則 擴(kuò) 展 不 確 定 度 為0.260×2≈ 0.52 μg/kg。

4 結(jié)論

當(dāng)DNC含量為4.57 mg/kg時(shí)，其相對(duì)擴(kuò)展不確定度為0.52 μg/kg（k=2)）。LC-MS/MS測(cè)定雞肉中尼卡巴嗪殘留標(biāo)志物時(shí)，不確定度主要由標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、移液器、容量瓶的誤差、線性回歸引入；樣品稱量、樣品提取過(guò)程所引入的不確定度很小，可以忽略?？赏ㄟ^(guò)選擇較高純度的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、增加標(biāo)準(zhǔn)曲線重復(fù)測(cè)定和多次測(cè)量平行樣降低結(jié)果的不確定度[5]。