周益舟

江南大學(xué)無錫醫(yī)學(xué)院 江蘇 無錫 214026

全球每年新發(fā)腦梗死患者共計(jì)1370萬人,其中中國新發(fā)腦梗死就有551萬人,占全球總?cè)藬?shù)的40%[1]。腦梗死的診斷方法包括臨床癥狀、實(shí)驗(yàn)室檢查以及影像學(xué)檢查等。其中實(shí)驗(yàn)室檢查中最主要方法的是血液學(xué)檢查,檢查指標(biāo)包括血糖、血脂、血尿常規(guī)、肝腎功能、凝血功能四項(xiàng)等,其中最重要的是凝血功能、血脂的檢查。腦梗死患者首先要保證凝血功能正常,血脂平穩(wěn),才具有能夠恢復(fù)的意義[2]。GC-MS具有高效率、高靈敏度、高選擇性、高分辨率、樣品用量少、分析速度快等特點(diǎn),同時還能夠?qū)ν之悩?gòu)體進(jìn)行有效的分離[3]。對于血液生物基質(zhì)較多、成分復(fù)雜且存在大量干擾檢測的物質(zhì),GC-MS的多反應(yīng)監(jiān)測模式能有效降低背景干擾,具有更高的選擇性和分析靈敏度[4]。

本篇探究使用優(yōu)化后的高分辨氣質(zhì)聯(lián)用儀條件進(jìn)行檢測腦梗死患者血液指標(biāo)的臨床應(yīng)用,現(xiàn)結(jié)果如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)選擇2019年9月到2020年12月期間在我院進(jìn)行治療的腦梗死患者以及同期進(jìn)行體檢的健康人群的血樣,納入標(biāo)準(zhǔn)為有患者均經(jīng)CT、臨床綜合檢查確診為腦梗死;美國國立衛(wèi)生研究院卒中量表（NIHSS）評分不低于4分;NIHSS數(shù)4-21分表示中型（n=55）、大于21分表示重型腦梗死（n=48）和對照組（健康人群n=50）。中型腦梗死患者男、女分別為28、27人,年齡43-81歲;重型腦梗死患者男、女分別為27、21人,年齡46-88歲;健康人群男、女分別為22、28人,年齡20-89歲。排除標(biāo)準(zhǔn):（1）伴有嚴(yán)重多種臟器功能不全患者;（2）嚴(yán)重水腫、有出血傾向患者;（3）懷孕或月經(jīng)期患者;（4）3個月內(nèi)的急性心肌梗死患者。三組患者的其他資料具有可比性。

1.2 材料

儀器:GC-7980F-LTQ Orbitrap XL高分辨氣質(zhì)聯(lián)用儀,結(jié)合島津Smart MRM數(shù)據(jù)庫,在無需標(biāo)準(zhǔn)品的情況下,建立GCMS法篩查臨床血液樣本。

試劑:甲醇（色譜級甲醇,北京旭陽化工技術(shù)研究院有限公司）,其余化學(xué)試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.3 方法

樣品處理:血清在4℃下解凍,加入內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品（異丙基蘋果酸）。加入450ml甲醇沉淀蛋白,樣品漩渦混合15 s后在15800 r/min下離心15分鐘后,將上清液轉(zhuǎn)移至衍生化反應(yīng)玻璃管,在氮?dú)庀赂稍铩⒏蓺堅(jiān)芙庠?5毫升甲氧胺溶液中（20 mg/m L吡啶）,旋渦混合15 s后置于70℃水浴中1h進(jìn)行肟化反應(yīng)進(jìn)行羰基保護(hù)。隨后,向樣品中加入150ml BSTFA和1%TMCS的混合物,在70℃水浴中孵育1小時進(jìn)行硅烷化反應(yīng),增加代謝產(chǎn)物的揮發(fā)性。15800 r/min離心15min,轉(zhuǎn)移上清液到1.5毫升氣相玻璃瓶中。

色譜條件:GC-7980F型氣相色譜儀,采用FID氫火焰檢測器、ZM-8A全自動頂空進(jìn)樣器;使用5-MS氣相色譜柱（30 m×0.25 mm×0.25 mm,Waters）,氮、氦氣體純度99.999%?？販胤秶?初始溫度保持在40℃,5分鐘,程序升溫到110℃,升溫速率為20℃/min,并以10℃/min的速率升溫到270℃,然后保持到34 min,溶劑延遲時間為4.5min。

質(zhì)譜條件:采用LTQ Orbitrap XL分析系統(tǒng),電壓為7V、離子源電壓為4.8 kV;采集質(zhì)荷比（m/z）50-1000的范圍,分辨率為100000。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

使用SPSS 22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,用數(shù)量（n）、百分率（%）和比值（n）對收集到的計(jì)數(shù)和計(jì)量資料進(jìn)行表示,兩組間的比較采用T檢驗(yàn)和X2檢驗(yàn)。兩組間比較的P值小于0.05表示兩組間結(jié)果具有顯著差異。

2 結(jié)果

2.1 在部分腦梗死患者樣本中升高和下降的血液學(xué)項(xiàng)目情況

本次研究僅統(tǒng)計(jì)使用GC-MS進(jìn)行檢測患者的血樣中升高和下降的血液學(xué)指標(biāo),升高與下降共存的檢驗(yàn)指標(biāo)結(jié)果不進(jìn)行統(tǒng)計(jì),結(jié)果見表1。

表1 在部分腦梗死患者樣本中升高和下降的血液學(xué)指標(biāo)（n,%）

2.2 健康人群與兩種不同程度腦梗死患者五項(xiàng)血液學(xué)指標(biāo)檢測結(jié)果

結(jié)果顯示,使用GC-MS進(jìn)行檢測健康人群與兩種不同程度腦梗死患者五項(xiàng)血液學(xué)指標(biāo)能夠明顯看出結(jié)果間差異,具有較高的準(zhǔn)確性,組間結(jié)果具有顯著差異（P＜0.05）,結(jié)果見表2。

表2 健康人群與兩種不同程度腦梗死患者五項(xiàng)血液學(xué)指標(biāo)檢測結(jié)果

3 討論

生物檢材成分復(fù)雜且存在大量干擾物,GC-MS的多反應(yīng)監(jiān)測模式能有效降低背景干擾,具有更高的選擇性和分析靈敏度。此外,GC-MS具有高靈敏度、高選擇性、高能效等特點(diǎn),可以實(shí)現(xiàn)對血液多種成分的高分辨檢測,并且能夠快速提供且可重現(xiàn)的結(jié)果,被廣泛用于血液樣本的分析。本篇研究探究使用優(yōu)化后的高分辨氣質(zhì)聯(lián)用儀條件進(jìn)行檢測腦梗死患者血液指標(biāo)的臨床應(yīng)用,結(jié)果顯示,使用高分辨氣質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行腦梗死患者血樣檢測結(jié)果,健康人群與兩種不同程度腦梗死患者五項(xiàng)指標(biāo)能夠明顯看出結(jié)果間差異,均具有較高的準(zhǔn)確性。因此,應(yīng)用此方法進(jìn)行檢測腦梗死患者血液指標(biāo)具有臨床意義。