黃 璇 姚玥州 李 闖 張 旭 李震威 蔣桂韜 胡 艷 戴求仲*

(1.湖南省畜牧獸醫(yī)研究所，動物營養(yǎng)與飼養(yǎng)技術(shù)研究室，長沙 410131；2.湖南家禽安全生產(chǎn)工程技術(shù)研究中心，長沙 410128；3.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，長沙 410128；4.攸縣畜牧水產(chǎn)事務(wù)中心，攸縣 412300)

蛋氨酸是家禽玉米-豆粕型飼糧中的第一限制性氨基酸[1]，其參與體內(nèi)蛋白質(zhì)的合成，還可清除自由基，增強(qiáng)機(jī)體免疫力，對禽生產(chǎn)性能也有重要影響。在家禽上的研究表明，蛋氨酸缺乏會抑制生長，影響生產(chǎn)性能發(fā)揮，而過量添加蛋氨酸并不能進(jìn)一步提高生產(chǎn)性能，甚至?xí)霈F(xiàn)生產(chǎn)性能下降的趨勢[2-4]。目前使用的玉米-豆粕型飼糧中缺乏蛋氨酸，需添加合成蛋氨酸來滿足家禽生產(chǎn)需要，因此研究其適宜添加量成為家禽生產(chǎn)中重要營養(yǎng)目標(biāo)之一[5]。有關(guān)鴨不同產(chǎn)蛋期推薦的蛋氨酸需要量為0.40%～0.45%。我國《肉鴨飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》(NY/T 2122—2012)中給出肉蛋兼用型種鴨產(chǎn)蛋后期蛋氨酸需要量為0.40%[6]；另外,本課題組研究了產(chǎn)蛋高峰期臨武鴨蛋氨酸需要量為0.41%～0.43%[7]；He等[8]報(bào)道產(chǎn)蛋后期紹興鴨蛋氨酸需要量為0.45%。攸縣麻鴨作為我國著名蛋用型麻鴨品種，具有生長快、性成熟早、產(chǎn)蛋性能佳和適應(yīng)能力強(qiáng)等特點(diǎn)，然而目前關(guān)于攸縣麻鴨營養(yǎng)參數(shù)研究較少，特別是關(guān)于氨基酸需要量的數(shù)據(jù)極少。因此，本試驗(yàn)以攸縣麻鴨為試驗(yàn)動物，通過飼喂不同蛋氨酸水平的飼糧，研究飼糧蛋氨酸水平對產(chǎn)蛋后期攸縣麻鴨產(chǎn)蛋性能、蛋品質(zhì)、血清生化和抗氧化指標(biāo)的影響，并通過線性和二次曲線回歸模型確定其蛋氨酸需要量，為攸縣麻鴨飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)制訂提供理論依據(jù)和數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與試驗(yàn)飼糧

選取健康狀況良好、產(chǎn)蛋率[(78.46±1.48)%]相近的56周齡產(chǎn)蛋后期攸縣麻鴨300羽，隨機(jī)分成5組，每組6個重復(fù)，每個重復(fù)10羽，進(jìn)行為期9周的飼養(yǎng)試驗(yàn)。試驗(yàn)設(shè)5個蛋氨酸水平，分別在基礎(chǔ)飼糧中以0.06%為梯度添加DL-蛋氨酸，各組飼糧蛋氨酸水平分別為0.27%、0.33%、0.39%、0.45%和0.51%?；A(chǔ)飼糧參照小型蛋鴨營養(yǎng)需要，并結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室已確定的攸縣麻鴨其他營養(yǎng)需要量參數(shù)配制，各組飼糧均制成顆粒料，基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1.2 飼養(yǎng)管理

飼養(yǎng)試驗(yàn)在湖南省畜牧獸醫(yī)研究所試驗(yàn)鴨場進(jìn)行。鴨舍為半封閉式鴨舍，試驗(yàn)鴨采用雙層立體籠養(yǎng)，單籠飼養(yǎng)，自由飲水，白天自然光照，晚上補(bǔ)充光照，每天保持16～17 h光照。每天09:00和16:00各喂料1次，根據(jù)上次喂料時試驗(yàn)鴨采食情況，適當(dāng)增減給料量，使鴨保持自由采食狀態(tài)。

1.3 測定指標(biāo)與方法

1.3.1 產(chǎn)蛋性能

試驗(yàn)期間每天按重復(fù)記錄產(chǎn)蛋總數(shù)、總蛋重和采食量，試驗(yàn)結(jié)束時以組為單位統(tǒng)計(jì)平均蛋重、日產(chǎn)蛋量、產(chǎn)蛋率、平均日采食量，計(jì)算料蛋比：

料蛋比=平均日采食量/日產(chǎn)蛋量。

1.3.2 蛋品質(zhì)

在試驗(yàn)第4周和第8周末從每組抽取接近平均蛋重的鴨蛋18枚(每重復(fù)3枚)，4 ℃保存，在24 h之內(nèi)測定蛋黃重、蛋殼強(qiáng)度(蛋殼強(qiáng)度測定儀)、蛋殼厚度(蛋殼厚度測定儀)、蛋黃顏色和蛋白高度(蛋品分析儀)，并計(jì)算蛋黃比例和哈氏單位：

蛋黃比例=蛋黃重/蛋重；哈氏單位=100×lg(H-1.7W0.37+7.57)。

式中：H為蛋白高度(mm)；W為蛋重(g)。

1.3.3 血清生化和抗氧化指標(biāo)

在試驗(yàn)結(jié)束時，每個重復(fù)隨機(jī)選取試驗(yàn)鴨2只，空腹12 h后，翅下靜脈采血5 mL，靜置30 min后，3 000 r/min離心15 min，分離血清，-20 ℃下保存。使用全自動生化分析儀(URIT-8000，優(yōu)利特，美國)檢測血清中葡萄糖(GLU)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(UN)、尿酸(UA)、甘油三酯(TG)、膽固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)的含量以及谷草轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(AST)的活性。采用比色法使用酶標(biāo)儀(SKY，Thermo，美國)檢測血清中過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量以及總抗氧化能力(T-AOC)。以上試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)，差異顯著者再進(jìn)行Duncan氏法多重比較，結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”(mean±SD)表示，P<0.05為差異顯著。最后采用SAS 9.0軟件中的非線性模擬程序中的二次曲線模型擬合試驗(yàn)鴨各敏感指標(biāo)與飼糧蛋氨酸水平的二次曲線方程，再通過求導(dǎo)得出蛋氨酸需要量。

2 結(jié) 果

2.1 飼糧蛋氨酸水平對蛋鴨產(chǎn)蛋性能的影響

由表2可知，飼糧蛋氨酸水平對產(chǎn)蛋率、平均蛋重、平均日采食均無顯著影響(P>0.05)。0.39%和0.45%蛋氨酸水平組日產(chǎn)蛋量顯著高于0.27%蛋氨酸水平組(P<0.05)；0.39%蛋氨酸水平組料蛋比最低，且顯著低于0.27%和0.33%蛋氨酸水平組(P<0.05)。

表2 飼糧蛋氨酸水平對蛋鴨產(chǎn)蛋性能的影響

2.2 飼糧蛋氨酸水平對蛋鴨蛋品質(zhì)的影響

由表3可知，飼糧蛋氨酸水平對蛋白高度、蛋黃顏色、蛋黃比例、蛋殼厚度和蛋殼強(qiáng)度均無顯著影響(P>0.05)，蛋白高度和蛋殼強(qiáng)度隨著飼糧蛋氨酸水平提高呈遞增趨勢。0.27%蛋氨酸水平組哈氏單位顯著低于其他各組(P<0.05)，其他各組之間差異不顯著(P>0.05)。

表3 飼糧蛋氨酸水平對蛋鴨蛋品質(zhì)的影響

2.3 飼糧蛋氨酸水平對蛋鴨血清生化和抗氧化指標(biāo)的影響

由表4可知，飼糧蛋氨酸水平對血清生化指標(biāo)無顯著影響(P>0.05)。與0.27%和0.33%蛋氨酸水平組相比，0.45%和0.51%蛋氨酸水平組血清GSH-Px活性顯著提高(P<0.05)；隨著飼糧蛋氨酸水平提高，血清GSH含量呈遞增趨勢，且0.39%、0.45%和0.51%蛋氨酸水平組血清GSH含量顯著高于0.27%蛋氨酸水平組(P<0.05)；0.45%蛋氨酸水平組血清CAT活性最高，顯著高于0.27%蛋氨酸水平組(P<0.05)。

表4 飼糧蛋氨酸水平對蛋鴨血清生化和抗氧化指標(biāo)的影響

2.4 產(chǎn)蛋后期攸縣麻鴨蛋氨酸需要量

由表5可知，基于敏感指標(biāo)對產(chǎn)蛋后期攸縣麻鴨蛋氨酸需要量進(jìn)行估測，各差異顯著指標(biāo)當(dāng)中只有日產(chǎn)蛋量、料蛋比、哈氏單位和血清CAT活性與飼糧蛋氨酸水平存在二次曲線變化(P<0.05)，通過建立以上4個敏感指標(biāo)與飼糧蛋氨酸水平的二次曲線方程，估測該階段攸縣麻鴨達(dá)到最高日產(chǎn)蛋量、哈氏單位和血清CAT活性以及最低料蛋比的飼糧蛋氨酸水平分別為0.413%、0.451%、0.417%和0.418%。試驗(yàn)鴨血清GSH-Px活性和GSH含量與飼糧蛋氨酸水平只存在線性變化(P<0.05)。

3 討 論

3.1 飼糧蛋氨酸水平對蛋鴨產(chǎn)蛋性能的影響

蛋氨酸被認(rèn)為是限制家禽正常生長的主要氨基酸，它會影響其他氨基酸的利用和吸收，飼糧適量蛋氨酸水平可改變氨基酸平衡，提高其生產(chǎn)性能[9]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，以產(chǎn)蛋性能作為評價(jià)指標(biāo)，飼糧蛋氨酸水平雖對產(chǎn)蛋率、平均蛋重、平均日采食均無顯著影響，但在0.39%～0.45%時可顯著提高日產(chǎn)蛋量，降低料蛋比。當(dāng)?shù)鞍彼崴竭_(dá)到0.51%時，產(chǎn)蛋性能卻出現(xiàn)下降趨勢。以上研究結(jié)果說明了蛋氨酸在家禽飼糧中存在適宜水平，過量添加蛋氨酸生產(chǎn)性能反而會降低[4-5]。料蛋比可反映飼料利用率，料蛋比越低飼料利用率越高。在本試驗(yàn)條件下，隨著飼糧蛋氨酸水平的提高，料蛋比先降低后升高，飼糧蛋氨酸水平為0.39%時，料蛋比達(dá)到最低值，說明0.39%蛋氨酸水平組氨基酸比例趨于平衡，飼料利用率高，因此通過產(chǎn)蛋性能各指標(biāo)判斷，飼糧0.39%蛋氨酸水平可滿足產(chǎn)蛋后期攸縣麻鴨生產(chǎn)需要。這一研究結(jié)果低于吳永保等[10]對低能量水平飼糧中育肥期北京鴨的研究結(jié)果(0.42%)；高于江世珍[11]報(bào)道的肉鴨后期蛋氨酸需要量(0.367%)和宋春玲[12]對產(chǎn)蛋初期金定鴨蛋氨酸需要量(0.36%)的研究結(jié)果；但與Xie等[2]獲得的21～49日齡北京鴨蛋氨酸需要量(0.39%)和He等[8]報(bào)道的產(chǎn)蛋后期紹興鴨蛋氨酸需要量(0.40%)較接近。另外回歸分析結(jié)果顯示，以日產(chǎn)蛋量和料蛋比為評價(jià)指標(biāo)，通過二次曲線模型估測得出飼糧蛋氨酸水平為0.413%和0.418%時，試驗(yàn)鴨獲得最高日產(chǎn)蛋量和最低料蛋比，估測值高于判定值(0.39%)。

表5 產(chǎn)蛋后期攸縣麻鴨蛋氨酸的需要量

3.2 飼糧蛋氨酸水平對蛋鴨蛋品質(zhì)的影響

蛋品質(zhì)的測定對衡量鴨蛋食用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值具有重要意義，一般來說，哈氏單位是用來衡量蛋品質(zhì)量和新鮮程度重要指標(biāo)，哈氏單位越高說明蛋貨架期越長[13]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧中添加蛋氨酸有提高蛋殼強(qiáng)度和蛋白高度的趨勢；哈氏單位隨著蛋氨酸水平的提高呈升高后降低趨勢，與0.27%蛋氨酸水平組相比，飼糧蛋氨酸水平達(dá)到0.33%時即可顯著提高哈氏單位，其中0.45%蛋氨酸水平組哈氏單位最高?；貧w分析結(jié)果顯示，哈氏單位達(dá)到最大值時飼糧蛋氨酸水平為0.451%，并可促進(jìn)鴨蛋蛋白質(zhì)沉積。這與Ruan等[3]對19～43周齡的龍巖蛋鴨以及周旻瑤[14]對“京紅1號”商品蛋雞的研究結(jié)果基本一致。然而He等[8]和Fouad等[13]研究認(rèn)為，飼糧中添加蛋氨酸對龍巖鴨和紹興鴨的哈氏單位、蛋黃顏色和蛋白高度等蛋品質(zhì)指標(biāo)均無顯著影響，分析其原因可能是由于蛋鴨所處產(chǎn)蛋期和飼糧組成等差異造成的。

3.3 飼糧蛋氨酸水平對蛋鴨血清生化和抗氧化指標(biāo)的影響

血清生化指標(biāo)是反映動物體內(nèi)物質(zhì)代謝和某些組織器官機(jī)能狀態(tài)變化的重要指標(biāo)。當(dāng)動物體內(nèi)氨基酸不平衡或蛋白質(zhì)供應(yīng)不足時，導(dǎo)致機(jī)體對養(yǎng)分吸收受限制，血清TP、ALB、TG和HDL等含量會下降，而血清UA和UN含量則增加[15]。飼糧蛋氨酸水平在0.27%～0.51%時對試驗(yàn)鴨血清生化各指標(biāo)均無顯著影響，說明飼糧粗蛋白質(zhì)水平在17%、蛋氨酸水平在0.27%～0.51%時，試驗(yàn)鴨機(jī)體營養(yǎng)狀況較好，氨基酸平衡狀況較佳，因此血清中GLU、蛋白質(zhì)和脂肪均可維持在一個較高水平。這與林禎平等[16]和葉慧等[17]在獅頭鵝方面的研究結(jié)果相一致。

當(dāng)細(xì)胞中產(chǎn)生內(nèi)源性氧自由基時，就會發(fā)生氧化應(yīng)激，機(jī)體通過抗氧化劑的中和作用來抵消或清除其有害作用[18]。蛋氨酸是GSH合成前體物質(zhì)，而GSH作為GSH-Px合成底物，在清除細(xì)胞內(nèi)的過氧化氫(H2O2)及脂類過氧化物上發(fā)揮作用，另外在CAT活性很低時GSH-Px可代替CAT清除H2O2[3,19]。因此，血清GSH、MDA含量和GSH-Px、CAT活性均可作為蛋氨酸調(diào)控氧化應(yīng)激重要指標(biāo)。Fouad等[13]研究表明，飼糧蛋氨酸水平在0.25%～0.50%時對產(chǎn)蛋鴨血清GSH、氧化型谷胱甘肽(GSSG)、MDA含量以及GSH-Px活性均無顯著影響。然而Hu等[20]研究表明，飼糧中補(bǔ)充蛋氨酸組的血清GSH-Px活性高于對照組。李珍珍等[21]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧適宜蛋氨酸水平可以提高21日齡籠養(yǎng)蛋雛鴨血清GSH含量及GSH-Px和SOD活性，降低血清MDA含量。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，適宜飼糧蛋氨酸水平(0.39%～0.51%)可以顯著提高產(chǎn)蛋后期的攸縣麻鴨血清CAT、GSH-Px活性和GSH含量，并通過二次曲線分析得出飼糧蛋氨酸水平為0.417%時血清CAT活性最高。這一結(jié)果與Hu等[20]、葉慧等[17]和李珍珍等[21]研究報(bào)道一致。飼糧中添加蛋氨酸可促進(jìn)GSH的合成，提高CAT和GSH-Px活性，從而提高攸縣麻鴨抗氧化能力，對防止細(xì)胞內(nèi)過氧化作用具有一定效果。攸縣麻鴨血清CAT、GSH-Px活性和GSH含量可敏感反映蛋氨酸抗氧化能力，隨飼糧蛋氨酸水平增加血清GSH-Px活性和GSH含量呈線性上升，而CAT活性呈二次曲線變化，推測可能是由于GSH-Px部分替代了CAT抗氧化功能。然而，目前關(guān)于蛋氨酸對機(jī)體抗氧化防御系統(tǒng)的具體作用機(jī)理還缺乏研究，尤其在蛋鴨方面，還需要進(jìn)一步研究。

4 結(jié) 論

飼糧蛋氨酸水平為0.39%時可顯著提高產(chǎn)蛋后期攸縣麻鴨日產(chǎn)蛋量，顯著降低料蛋比，改善蛋品質(zhì)，滿足生產(chǎn)需要；飼糧蛋氨酸水平為0.45%時產(chǎn)蛋后期攸縣麻鴨血清抗氧化指標(biāo)較佳。結(jié)合回歸分析結(jié)果，產(chǎn)蛋后期攸縣麻鴨蛋氨酸需要量為0.41%～0.45%。