徐娜娜，莊治國(guó)，孔 月，唐廣新，吳希寶，莊占興，宋化穩(wěn)，劉 鈺

（山東省農(nóng)藥科學(xué)研究院，山東省化學(xué)農(nóng)藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，濟(jì)南250033）

牡丹是一種多年生矮灌木，以雍容華麗的花朵在歷史上廣為種植，其傳統(tǒng)價(jià)值主要體現(xiàn)在觀賞和藥用2個(gè)方面。油用牡丹是近幾年發(fā)展起來(lái)的新興產(chǎn)業(yè)，以其含油率高、食用安全、功效高等特點(diǎn)被越來(lái)越多的人所種植[1]。近年來(lái)隨著牡丹種植面積的擴(kuò)大，牡丹炭疽病的發(fā)生程逐年增長(zhǎng)趨勢(shì)，在各牡丹種植區(qū)均有發(fā)生[2]。

目前報(bào)道的造成牡丹炭疽病的病原菌為刺盤孢屬膠孢炭疽菌（Colletotrichum gleosporioides）[3]。膠孢炭疽菌分布和寄主范圍廣泛，是炭疽菌屬最常見(jiàn)的病原種類，對(duì)植物的危害較大[4]。牡丹炭疽病危害牡丹的葉、莖、花器等部位，使牡丹葉片枯斑連片，病莖扭曲，幼嫩枝條枯死[5-6]。牡丹炭疽病的發(fā)生，嚴(yán)重威脅牡丹產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。

化學(xué)防治仍是防治牡丹炭疽病的主要方法，目前我國(guó)還沒(méi)有登記用于防治牡丹炭疽病的農(nóng)藥品種[7]。筆者采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定了4類9種殺菌劑對(duì)牡丹炭疽病菌的室內(nèi)毒力，以期篩選高效低毒農(nóng)藥，為牡丹炭疽病的化學(xué)防治提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

牡丹炭疽病菌，于2020年8月27日采自山東農(nóng)業(yè)科學(xué)院濟(jì)陽(yáng)基地。該地牡丹為4年齡，近兩年牡丹炭疽病發(fā)生嚴(yán)重。采集牡丹炭疽病菌罹病組織，用PDA培養(yǎng)基進(jìn)行分離純化培養(yǎng)[8]，進(jìn)行菌落、菌絲和孢子的形態(tài)學(xué)鑒定，確認(rèn)引起牡丹炭疽病的病原菌為膠孢炭疽菌（Colletotrichum gleosporioides）[3,9]。

1.2 供試藥劑

供試藥劑，詳見(jiàn)表1。

表1 供試殺菌劑

1.3 含藥PDA培養(yǎng)基制備

根據(jù)預(yù)備試驗(yàn)結(jié)果，用無(wú)菌水將9種試驗(yàn)藥劑分別稀釋成5～6個(gè)梯度濃度，分別取1 mL稀釋液加入裝有49 mL 50℃左右的滅菌PDA培養(yǎng)基的三角瓶中，搖勻后倒入直徑為9 cm的培養(yǎng)皿內(nèi)，凝固后即制成含藥平板?？瞻讓?duì)照為無(wú)菌水。

1.4 菌絲生長(zhǎng)速率法

在無(wú)菌條件下，用直徑為5 mm打孔器在分離培養(yǎng)5 d的牡丹炭疽病菌菌落邊緣挑取菌餅，將菌餅置于含藥平板培養(yǎng)基中央，每處理重復(fù)3次，以加無(wú)菌水的PDA平板作為空白對(duì)照，置于25℃，12 h光暗交替條件下培養(yǎng)3 d，用十字交叉法測(cè)量菌落直徑，按式（1）計(jì)算各處理菌落增長(zhǎng)直徑及菌絲生長(zhǎng)抑菌率[10]。

1.5 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)采用DPS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。以設(shè)定的質(zhì)量濃度的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)（x），抑制率的機(jī)率值為縱坐標(biāo)（y），求出各藥劑對(duì)供試菌株的毒力回歸方程y=a＋bx及有效抑制中濃度（EC50值）。

為了更直觀地比較各個(gè)藥劑的EC50值，將每種方法測(cè)定的9種藥劑中最大EC50值的藥劑的相對(duì)毒力倍數(shù)設(shè)定為1.00，按式（2）計(jì)算出各個(gè)藥劑的相對(duì)毒力倍數(shù)[11]。

2 結(jié)果與分析

2.1 對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制作用

9種殺菌劑對(duì)牡丹炭疽病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。結(jié)果表明，9種殺菌劑抑制菌絲生長(zhǎng)的EC50值介于0.008 1～0.364 5 mg/L，其中吡噻菌胺、苯醚甲環(huán)唑、吡唑醚菌酯和氟吡菌酰胺4種殺菌劑的抑制活性較強(qiáng)，其EC50值分別為0.008 1、0.010 2、0.010 6和0.013 8 mg/L；戊唑醇和啶氧菌酯的抑菌活性次之，其EC50值分別為0.022 7和0.032 4 mg/L；甲基硫菌靈、肟菌酯和丙環(huán)唑3種殺菌劑對(duì)牡丹炭疽病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制活性較低，其EC50值分別為0.364 5、0.188 1和0.104 1 mg/L，均大于0.1 mg/L。

表2 9種殺菌劑對(duì)牡丹炭疽病菌菌絲生長(zhǎng)的毒力測(cè)定結(jié)果

2.2 作用特點(diǎn)比較

4類殺菌劑對(duì)牡丹炭疽病菌菌絲生長(zhǎng)抑制作用比較見(jiàn)表3。結(jié)果表明，除苯并咪唑類殺菌劑對(duì)菌絲生長(zhǎng)抑制作用較弱外，麥角甾醇抑制劑、甲氧基丙烯酸酯類、琥珀酸脫氫酶抑制劑中均存在對(duì)牡丹炭疽病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制活性較強(qiáng)的藥劑，其中琥珀酸脫氫酶抑制劑的抑制活性尤為突出。

表3 4類殺菌劑對(duì)牡丹炭疽病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用比較

3 結(jié)果與討論

筆者驗(yàn)證了引起牡丹炭疽病的病原菌為膠孢炭疽菌，并利用該菌進(jìn)行了9種藥劑的室內(nèi)毒力測(cè)定。結(jié)果表明，吡噻菌胺、苯醚甲環(huán)唑、吡唑醚菌酯和氟吡菌酰胺對(duì)牡丹炭疽病菌的毒力測(cè)定結(jié)果優(yōu)于戊唑醇和啶氧菌酯，甲基硫菌靈、肟菌酯和丙環(huán)唑?qū)δ档ぬ烤也【覂?nèi)毒力測(cè)定效果略差。目前國(guó)內(nèi)關(guān)于牡丹炭疽病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定還沒(méi)有報(bào)道，該研究結(jié)果與前人研究的膠孢炭疽菌侵染草莓、芒果、枸杞、柱花草等室內(nèi)毒力測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果相吻合[13-17]。

苯并咪唑類殺菌劑（MBCs）是微管蛋白解聚劑，其作用機(jī)制是通過(guò)與真菌微管蛋白的β亞基結(jié)合，干擾后來(lái)微管蛋白的聚集，從而影響有絲分裂過(guò)程[12]，但對(duì)牡丹炭疽病菌菌絲生長(zhǎng)抑制作用不明顯。麥角甾醇抑制劑（SBIs）可以阻斷14-位的脫甲基化，麥角甾醇合成受到抑制，生物膜合成受到抑制，其中苯醚甲環(huán)唑和戊唑醇效果較好，丙環(huán)唑略差。甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑（QoIs）通過(guò)與細(xì)胞色素b的Qo位泛醌醇氧化酶結(jié)合，阻斷細(xì)胞色素b和細(xì)胞色素c1間的電子傳遞，抑制線粒體的呼吸作用，使ATP生成受阻；琥珀酸脫氫酶抑制劑（SDHIs）是通過(guò)抑制琥珀酸脫氫酶，阻斷呼吸鏈中電子傳遞，導(dǎo)致三羧酸循環(huán)被阻斷。甲氧基丙烯酸酯類（QoIs）和琥珀酸脫氫酶抑制劑（SDHIs）均為呼吸抑制劑，除肟菌酯效果一般外，其余均對(duì)牡丹炭疽病菌菌絲生長(zhǎng)抑制作用明顯，琥珀酸脫氫酶抑制劑（SDHIs）作用尤為突出，這與彭昀[18]發(fā)現(xiàn)吡噻菌胺對(duì)橡膠樹(shù)膠孢炭疽菌防效較好相吻合。

用藥方式和用藥環(huán)境不同導(dǎo)致室內(nèi)毒力測(cè)定結(jié)果與田間試驗(yàn)結(jié)果往往存在差異。筆者只測(cè)定了9種殺菌劑對(duì)牡丹炭疽病菌的室內(nèi)毒力，其田間防效尚需進(jìn)一步試驗(yàn)驗(yàn)證。另外，筆者利用成品制劑對(duì)菌絲生長(zhǎng)活性的影響、對(duì)孢子萌發(fā)和產(chǎn)孢量的影響以及制劑加工中的填料和助劑對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響尚待進(jìn)一步研究。

（責(zé)任編輯：徐娟）

[15]胡曉穎,趙杰.四種殺菌劑對(duì)膠孢狀炭疽菌的毒力測(cè)定[J].北方園藝,2016(8):112-114.

[16]劉永剛,李佳佳,李昭煜,等.枸杞炭疽病防治藥劑篩選[J].植物保護(hù),2016,42(1):230-234.

[17]鄭金龍,李秋潔,易克賢,等.9種殺菌劑對(duì)柱花草膠孢炭疽病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定[J].熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué),2015,35(2):66-69.

[18]彭昀.新型SDHI類殺菌劑吡噻菌胺對(duì)橡膠樹(shù)膠孢炭疽菌的生物學(xué)活性研究[D].海南:海南大學(xué),2020.