葉夢茜 干金妮 張敏鴿

宮頸癌是原發(fā)于子宮頸部位的惡性腫瘤，其病因多為HPV感染、多孕多產(chǎn)、初產(chǎn)年齡小及沙眼衣原體、單純皰疹病毒Ⅱ型感染等[1]?；颊咴谠缙跁r無明顯癥狀、體征，但在疾病發(fā)生、發(fā)展過程中可伴隨陰道流血、陰道排液、下肢腫痛、輸尿管梗阻及貧血、惡病質(zhì)等全身衰竭癥狀，對患者的生命健康造成嚴重威脅[2]。尋找疾病早期診斷的有效方法對指導(dǎo)臨床治療、改善患者預(yù)后尤為重要。目前，臨床上用于診斷宮頸癌的影像學(xué)技術(shù)有子宮超聲、CT、MRI等檢查，其中MRI檢查具有良好的軟組織分辨力，可有效分辨腫瘤與正常組織，直觀顯示盆腔內(nèi)各器官的解剖結(jié)構(gòu)、各組織間的層次及腫瘤與正常組織的差異，為判斷腫瘤侵犯范圍提供了直觀的解剖基礎(chǔ)[3-4]。近年來，miRNA與腫瘤的關(guān)系成為研究的熱點，不同miRNA具有差異性，可發(fā)揮抑癌或促癌作用，其中miRNA與宮頸癌的關(guān)系十分密切，如miR-9在宮頸癌中是促癌基因，但微小RNA-135a-5p（microRNA-135a-5p,miR-135a-5p）、微小RNA-373（microRNA-373,miR-373）在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展中起何種作用尚不明確[5]。因此，本研究探討高分辨率MRI聯(lián)合miR-135a-5p、miR-373對宮頸癌的診斷價值，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 對象和方法

1.1 對象 選取2018年9月至2020年9月浙江省臺州醫(yī)院行宮頸病理檢查患者132例。根據(jù)病理檢查結(jié)果分為宮頸癌（惡性組）89例和宮頸癌前病變（良性組）43 例。惡性組年齡 42～65（50.83±10.92）歲；病理類型：鱗癌75例，腺癌14例；分化程度：低分化41例，中分化28例，高分化20例；TNM分期：Ⅰ期52例，Ⅱ期37例。良性組年齡 41～64（49.88±10.87）歲；癌前病變（CIN）分期：Ⅰ期24例，Ⅱ期10例，Ⅲ期9例。納入標準：宮頸癌組符合《宮頸癌診斷與治療指南（第四版）》[6]中宮頸癌的診斷標準；所有患者均未接受生物學(xué)、放射、化學(xué)等治療且未合并惡性腫瘤及免疫系統(tǒng)相關(guān)疾?。慌R床病歷資料與影像學(xué)資料完備、真實。排除標準：處于妊娠期、哺乳期者；近1個月內(nèi)接受宮頸治療者；合并如腸道、乳腺腫瘤等其他臟器腫瘤者；精神障礙者；重要臟器功能不全者；臨床與影像學(xué)資料缺乏者。兩組患者年齡的差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準，所有患者及其家屬均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 高分辨率MRI檢查方法 所有患者入院第1天行高分辨率MRI檢查。采用GE 3.0 T超導(dǎo)MRI系統(tǒng)[宜禾（北京）投資管理有限公司，型號：SIGNA Ploneer]，體部射頻發(fā)射線圈。患者于檢查前1 h飲水約500 ml以適度充盈膀胱，取仰臥位，對髂棘至坐骨結(jié)節(jié)進行掃描。高分辨率MRI成像序列：快速自旋回波T1WI，重復(fù)時間（TR）480 ms，回波時間 12 ms，采集矩陣 512×512，視野（FOV）160 mm×160 mm，層厚3 mm，層間距0 mm；快速自旋回波T2WI，TR 4 500 ms，回波時間130 ms，采集矩陣 512×512，F(xiàn)OV 160 mm×160 mm，層厚3 mm，層間距0 mm，分別行軸位、矢狀位和冠狀位掃描。屏氣軸位可變?nèi)莘e加速肝臟采集（liver acquisition with volume acceleration-flexible,LAVAFlex）動態(tài)增強掃描：瞬時彈性成像（TE）1.9 ms，TR 4.1 ms，矩陣 288×208，F(xiàn)OV 274 mm×379 mm，層厚3.0 mm，掃描層數(shù)30層；采用高壓注射器靜脈注射扎噴酸葡胺（上海旭東海普藥業(yè)有限公司，國藥準字：H19991127，規(guī)格 15 ml/支）0.2 ml/kg，流速 2 ml/s，隨后以流速2 ml/s注射0.9%氯化鈉注射液20 ml，注藥后15～70 s開始掃描，可得到動脈早期到靜脈晚期多期的圖像資料。

1.2.2 miR-135a-5p、miR-373表達水平的檢測 分別抽取兩組患者清晨空腹靜脈血3 ml，3 000 r/min離心10 min，分離上層血清，-80℃保存、待用。采用RT-PCR法檢測miR-135a-5p、miR-373表達水平，實驗步驟：將1 ml TRNzol加入血清樣本取總DNA并檢測其純度和濃度，提取2 μg總DNA并加入內(nèi)參GAPDH及目的小分子RNA miR-135a-5p、miR-373逆轉(zhuǎn)錄引物，逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件：42℃ 15 min，85℃ 5 s，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA；PCR反應(yīng)條件：95℃ 預(yù)變性10 min，反應(yīng)條件：95℃、60 ℃、95 ℃、60 ℃、95 ℃時間分別 12 s、40 s、15 s、30 s、15 s，40個循環(huán)，使用Primer5.0軟件對引物序列進行設(shè)計，miR-135a-5p引物序列上游：5'-TATGGCTTTTTATTCCTATGTGA-3'，下游：5'-TTGGTCTTGTTTCCCGGTCC-3'；miR-373 引物序列上游：5'-CGCTAGCCAGTCGACATCAC-3'，下游：5'-GCATCCAGACCTACATGCA-3'；內(nèi)參GAPDH引物序列上游：5'-AACAGCCTCAAGATCATCAGCAA-3'，下游：5'-GACTGTGGTCAT-GAGTCCTTCCA-3'。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 25.0統(tǒng)計軟件。計量資料以表示，兩組間比較采用兩獨立樣本t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，等級資料的比較采用秩和檢驗；計數(shù)資料以率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。采用ROC曲線分析高分辨率MRI聯(lián)合miR-135a-5p、miR-373對宮頸癌的診斷效能。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 高分辨率MRI圖像分析 常規(guī)T1WI序列顯示陰道后穹窿消失，穹窿邊緣毛糙，高分辨率MRI序列顯示陰道后穹窿與病灶間隙可見，4例典型病例的MRI圖像見圖1；常規(guī)T2WI序列顯示陰道壁低信號消失、周圍脂肪間隙模糊，高分辨率MRI序列顯示陰道壁低信號存在，4例典型病例的MRI圖像見圖2。

圖1 4例典型宮頸癌患者的常規(guī)T1WI序列圖像（a：44歲患者；b：50歲患者；c：57歲患者；d：63歲患者）

圖2 4例典型宮頸癌患者的常規(guī)T2WI序列圖像（a：44歲患者；b：50歲患者；c：57歲患者；d：63歲患者）

2.2 兩組患者miR-135a-5p、miR-373表達水平的比較 惡性組miR-135a-5p、miR-373表達水平均高于良性組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），見表1。

表1 兩組患者miR-135a-5p、miR-373表達水平的比較

2.3 miR-135a-5p、miR-373表達水平與宮頸癌患者臨床特征的關(guān)系 miR-135a-5p、miR-373表達水平在不同年齡、絕經(jīng)與否宮頸癌患者中的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）；而陽性高危型HPV、鱗癌、低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、淋巴血管間隙浸潤及深浸潤宮頸癌患者miR-135a-5p、miR-373表達水平均高于陰性高危型HPV、腺癌、高與中分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴血管間隙浸潤及無浸潤與淺浸潤宮頸癌患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），見表 2。

表2 miR-135a-5p、miR-373表達水平與宮頸癌患者臨床特征的關(guān)系分析

2.4 高分辨率MRI聯(lián)合miR-135a-5p、miR-373診斷宮頸癌的效能 ROC曲線分析顯示高分辨率MRI聯(lián)合miR-135a-5p、miR-373對宮頸癌的診斷價值高于3個單項檢測，單項檢測的靈敏度、特異度、準確度均低于3項聯(lián)合檢測，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），見表3和圖3。

圖 3 高分辨率 MRI、微小 RNA-135a-5p（miR-135a-5p）、微小RNA-373（miR-373）及3項聯(lián)合檢測診斷宮頸癌的ROC曲線

表3 高分辨率MRI、miR-135a-5p、miR-373及3項聯(lián)合檢測對宮頸癌的診斷效能比較

3 討論

宮頸癌是女性生殖道惡性腫瘤之一，是女性中發(fā)病率僅次于乳腺癌的第2個常見惡性腫瘤，據(jù)數(shù)據(jù)顯示，其發(fā)病率呈升高和低齡化趨勢，嚴重威脅女性的生理及心理健康[7]。目前，臨床上對宮頸癌的診斷主要依靠碘試驗、陰道鏡、活組織檢查及宮頸刮片細胞學(xué)檢查等手段，但有疼痛、組織損傷等缺點，患者接受程度較低且無法有效判斷浸潤深度[8-9]。隨著影像學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，高分辨率MRI逐漸應(yīng)用于臨床，因其具有高時間分辨率及軟組織分辨率，可清楚顯示子宮肌壁結(jié)構(gòu)、宮頸基質(zhì)環(huán)、肌層及漿膜層，有助于術(shù)前分期、判斷腫瘤肌層浸潤情況和盆腔侵犯范圍，為宮頸癌的診斷提供了新方法[10]。韋潔勤等[11]研究發(fā)現(xiàn)，高分辨率MRI具有高信噪比、高圖像分辨率、良好的脂肪抑制、更高的時間分辨率等特點，可準確反映病變的血流動力學(xué)等，可顯著改善腫瘤形態(tài)學(xué)、血流動力學(xué)、功能學(xué)等方面的影像學(xué)顯示，其原因可能為動態(tài)增強掃描可更好地顯示宮頸癌灶與周圍組織的關(guān)系、反應(yīng)癌灶血供情況，為了解腫瘤的生物學(xué)行為提供間接依據(jù)。王志剛等[12]研究發(fā)現(xiàn)，高分辨率MRI在宮頸癌的影像學(xué)特征顯示中具有顯著優(yōu)勢，其中T2WI對顯示盆腔內(nèi)重要的解剖結(jié)構(gòu)更加清晰，其原因可能為在動態(tài)增強時壞死灶周邊殘留的癌變組織呈增強環(huán)，有助于確定癌灶邊界，更好地顯示間質(zhì)及宮旁浸潤程度，進而提高腫瘤發(fā)現(xiàn)率。本研究發(fā)現(xiàn)，高分辨率MRI利用盆腔脂肪信號的天然對比，更清晰顯示宮頸黏膜層、肌層、周圍間質(zhì)及正常脂肪高信號與病灶本身。

miRNA對腫瘤的發(fā)生、發(fā)展具有重要的基因調(diào)控功能，對腫瘤的診斷和預(yù)后判別具有一定的參考作用，已受到醫(yī)學(xué)界的關(guān)注，其中宮頸癌也具有獨特的miRNAs表達譜，探討其在宮頸癌發(fā)生機制中的作用，對篩選高危人群和早期防治有積極意義[13-14]。臨床實踐表明，miR-135a-5p是miR-135家族中主要成員之一，其在宮頸癌患者體內(nèi)呈高表達，提示其在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展中作為促癌基因，參與惡性腫瘤細胞周期、增殖與凋亡，且與腫瘤大小、FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)[15]。有研究顯示，隨著宮頸病變miR-135a-5p表達水平上調(diào)，且與宮頸癌臨床分期與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況相關(guān)，初步證實miR-135a-5p可能在宮頸癌惡性轉(zhuǎn)化和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中具有重要調(diào)節(jié)作用，提示其可能作為致癌基因參與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展[16-17]。本研究中，miR-135a-5p在宮頸癌患者血清中表達水平顯著高于宮頸癌前病變患者，說明miR-135a-5p可能參與宮頸癌的形成，其機制可能為通過調(diào)控腫瘤細胞侵襲抑制因子表達，影響宮頸癌細胞的糖酵解和上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化。

叢竹軍等[18]的研究發(fā)現(xiàn)，miR-373在癌旁組織中表達水平顯著低于乳腺癌組織，其可介導(dǎo)Bcl-6抑制乳腺癌細胞的增殖和侵襲能力，初步揭示miR-373在惡性腫瘤的增殖侵襲過程中發(fā)揮重要作用。miR-373在宮頸癌組織中高表達，其表達水平明顯高于良性組織，在功能上起到了促癌基因的作用。Lv等[19]提出miR-373作為一個新的癌基因，其在睪丸精原細胞瘤中通過阻斷p53通路來參與腫瘤的進展，也可以通過作用于靶基因PPP6C調(diào)節(jié)細胞周期來促進肝癌細胞的生長。miR-373可通過作用于Wnt/β-acting信號轉(zhuǎn)錄而促進腫瘤的發(fā)生，其在肺癌疾病中基因表達下調(diào)，原因可能為miR-373主要功能為促進腫瘤的發(fā)生[20]。有研究顯示，miR-373在宮頸癌組織中呈高表達[21]，與本研究結(jié)果一致。但2012年Yuan等[22]研究中miR-373在宮頸癌組織中呈低表達，在功能上起到抑癌基因的作用，與本研究結(jié)果相悖，其原因可能為納入樣本量與數(shù)據(jù)統(tǒng)計方面有差異。本研究中，miR-373在宮頸癌組織中呈高表達，且與宮頸癌患者高危型HPV、病理類型、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、淋巴血管間隙浸潤、浸潤程度有關(guān)。

綜上所述，高分辨率MRI對早期診斷宮頸癌具有一定價值，miR-135a-5p、miR-373與宮頸癌患者高危型HPV、病理類型、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、淋巴血管間隙浸潤、浸潤程度有關(guān)且均參與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展過程，為宮頸癌的早期診治提供一定的理論參考，但是本研究納入病例數(shù)較少，仍需要今后進一步研究。