亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        高效液相色譜儀、酶標(biāo)儀和快檢儀檢測小麥中嘔吐毒素的對比分析

        2021-10-29 03:23:41陳舟
        食品安全導(dǎo)刊 2021年10期

        陳舟

        摘 要:為高效完成小麥中嘔吐毒素的精準(zhǔn)檢測,本文通過多維度實驗對高效液相色譜儀、酶標(biāo)儀和真菌毒素快速檢測儀檢測小麥中嘔吐毒素處理過程和檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行對比分析,3種設(shè)備檢驗操作過程中各有優(yōu)劣,檢測結(jié)果能滿足不同需求??鞕z儀適合快速定性篩查,酶標(biāo)儀可用于高通量檢測,高效液相色譜儀可進(jìn)行精準(zhǔn)檢測和定量復(fù)核。綜合分析得出,在實際應(yīng)用中,3種設(shè)備可以配合使用,相互補充,靈活運用各種設(shè)備優(yōu)勢,可高效完成各種檢測需求。

        關(guān)鍵詞:高效液相色譜儀;酶標(biāo)儀;快檢儀;嘔吐毒素;小麥

        嘔吐毒素,又名為脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON),主要由禾谷鐮刀菌和黃色鐮刀菌產(chǎn)生,是一種全球性的污染谷物的霉菌毒素之一,通常在小麥、大麥、燕麥、玉米等谷物及其制品中最為常見。DON超標(biāo)攝入會導(dǎo)致人畜厭食、嘔吐、腹瀉、發(fā)燒、站立不穩(wěn)和反應(yīng)遲鈍等急性中毒癥狀,嚴(yán)重時會導(dǎo)致組織壞死和內(nèi)臟出血,甚至死亡[1]。正因為DON對人類的生命健康有很大的威脅,我國對小麥中的DON含量制定了嚴(yán)格的限量標(biāo)準(zhǔn)。

        當(dāng)前,我國檢測機構(gòu)針對小麥中的DON檢測設(shè)備有很多種,但涉及檢測原理主要有串聯(lián)質(zhì)譜法、高效液相色譜法、薄層色譜測定法、酶聯(lián)免疫吸附篩查法、膠體金紙層析免疫法等。在DON檢測中根據(jù)不同的需求,選擇不同的設(shè)備和方法來檢測,對于檢測效率至關(guān)重要,因此,本文通過實驗對高效液相色譜儀、酶標(biāo)儀、真菌毒素快速檢測儀3種設(shè)備檢測小麥中DON的優(yōu)劣進(jìn)行對比分析。

        1 材料與方法

        1.1 儀器與試劑

        LC-20A高效液相色譜儀、SPD-20A紫外檢測器,島津;Model-680酶標(biāo)儀,美國伯樂;ROSA-M快檢儀,美國CHARM;TLE204E/02電子天平,梅特勒-托利多;PHC-11D氮吹儀,月旭科技(上海);HY-4振蕩器,金壇市大地自動化儀器;800D離心機,常州普天儀器;DON免疫親和柱,安譜(CNW);Deoxynivalenol標(biāo)準(zhǔn)品,安譜(ANPEL);DON檢測試劑盒,芬德生物(SZ FINDE);ROSA DON快檢試劑條,美國CHARM。

        DON質(zhì)控樣-1、DON質(zhì)控樣-2,國家糧食和物資儲備局科學(xué)研究院;甲醇(色譜純);聚乙二醇(生化試劑);氯化鈉(分析純);磷酸氫二鈉(分析純);磷酸二氫鉀(分析純);氯化鉀(分析純);鹽酸(優(yōu)級純);去離子水。

        1.2 樣品前處理

        1.2.1 高效液相色譜儀

        稱取25 g樣品于100 mL具塞三角瓶,加5 g聚乙二醇,加水100 mL,混勻,振蕩20 min。以玻璃纖維濾紙過濾至澄清,移取濾液2.0 mL,以1滴/s流速過免疫親和柱,再分別用5 mL PBS緩沖鹽溶液和水先后淋洗,棄去流出液,抽干小柱。加2 mL甲醇洗脫親和柱,下滴速度1滴/s,收集洗脫液,50 ℃下氮氣緩緩吹至近干,最后加入1.0 mL初始流動相,渦旋30 s溶解,0.45 μm濾膜過濾,取濾液入進(jìn)樣小瓶待上機檢測。

        1.2.2 酶標(biāo)儀

        稱取5.0 g粉碎樣品于50 mL離心管,加入20 mL去離子水,振蕩5 min,室溫4 000 r/min離心10 min;靜置分層,取0.1 mL上清液,加入0.9 mL復(fù)溶液,混勻,待測。

        1.2.3 DON快速檢測儀

        準(zhǔn)確稱量5.0 g粉碎樣品于50 mL的離心管,加入25 mL

        的去離子水,渦旋振蕩1 min,靜置1 min,取1 000 μL上清液于1號離心管中,放入離心機5 000 r/ min,離心1 min后,從中取100 μL樣品提取液和1 000 μL嘔吐毒素稀釋緩沖液(DONQ)放入2號離心管,渦旋振蕩10 s,待測。

        1.3 上機檢測

        1.3.1 高效液相色譜儀

        高效液相色譜儀設(shè)置紫外檢測器,色譜柱:XB-C18(4.6? mm×150 mm,5 μm),其余色譜條件參考GB 5009.111—2016[2]。

        1.3.2 酶標(biāo)儀

        加標(biāo)準(zhǔn)品和樣品50 μL/孔到對應(yīng)微孔中,然后加抗體工作液50 μL/孔,輕輕震蕩5 s混勻,37 ℃避光反應(yīng)30 min。

        洗板:甩干孔中液體,用工作洗滌液350 μL/孔充分洗滌5次,每次間隔30 s,最后用吸水紙拍干。加酶標(biāo)記物

        100 μL/孔,37 ℃避光反應(yīng)30 min。再次洗板(同上)。顯色:加底物A 50 μL/孔,再加底物B 50 μL/孔,輕輕振蕩5 min混勻,37 ℃避光顯色15 min。終止:加入終止液50 μL/孔,

        輕輕振蕩混勻,終止反應(yīng)。酶標(biāo)儀于450 nm(建議雙波長450/630 nm)處上機測定每孔OD值。

        1.3.3 DON快速檢測儀

        讀數(shù)儀調(diào)至DON-00檔。取嘔吐毒素快檢試劑條(綠色),將其反面放入孵育器中,膠紙撕開至黑線處,取300 μL待測稀釋液,緩慢加入試劑條凹槽中后蓋上膠紙,45 ℃下孵育5 min后,插入讀數(shù)儀測定讀數(shù)。

        1.4 儀器檢測原理對比

        (1)高效液相色譜儀(紫外檢測器)。利用物質(zhì)在色譜柱流動相與固定相之間有不同的分配量,進(jìn)行DON分離,不同濃度的DON在紫外檢測器引起不同響應(yīng)值進(jìn)而輸出不同峰形,最后用外標(biāo)法定量。

        (2)酶標(biāo)儀篩查原理?;诳乖贵w間接競爭反應(yīng)技術(shù),DON和酶標(biāo)板上的預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗嘔吐毒素抗體,標(biāo)記后用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含DON量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較后得出具體值。

        (3)DON快檢測試儀檢測原理?;谀z體金免疫層析技術(shù),以膠體金作為示蹤標(biāo)志物,根據(jù)膠體金本身的顯色特點來診斷特異性的待測物。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 回收率與精密度、質(zhì)控樣精準(zhǔn)度試驗

        在空白小麥樣品中分別加入3組不同濃度的DON標(biāo)準(zhǔn)溶液,按照正常試驗步驟進(jìn)行前處理和檢測,每個加標(biāo)樣品重復(fù)測定6次,測定其回收率和精密度,結(jié)果見表1。由表1可知,3種設(shè)備檢測方法的回收率和精密度均達(dá)標(biāo)[3]。在低濃度檢測時高效液相色譜儀回收率略顯偏低,可能由于其方法前處理相對復(fù)雜,造成一定的DON損失。精密度方面,高效液相色譜儀精密度最高,穩(wěn)定性最好。

        將兩個不同濃度DON質(zhì)控樣,按照正常試驗步驟進(jìn)行前處理和檢測,每個濃度做4個平行樣,測定其準(zhǔn)確度,結(jié)果見表2。從表2中可知高效液相色譜儀準(zhǔn)確度最高,其次是酶標(biāo)儀,快檢儀準(zhǔn)確度略顯不足,尤其是高濃度檢測時更明顯。由于快檢儀檢測原理和膠體金紙試劑條制備工藝等原因,快檢儀不適合做定量檢測。另外經(jīng)過多次試驗得出,酶標(biāo)儀在高通量樣品檢測時,由于抗體的交叉反應(yīng)、稀釋倍數(shù)及操作污染等因素影響,有出假陽性風(fēng)險,故陽性試樣需進(jìn)一步驗證[4]。

        2.2 3種設(shè)備的操作使用對比

        對3種設(shè)備在單位樣品檢驗時間、費用、操作等方面進(jìn)行綜合比較,結(jié)果見表3。從表3中可知,3種檢測設(shè)備各有優(yōu)劣,檢測機構(gòu)、企業(yè)或者檢驗人員可根據(jù)自身不同需求和環(huán)境、樣品量等因素綜合考量來選擇最合適的設(shè)備進(jìn)行檢驗。尤其是快檢儀操作簡便、靈敏度高,適合于樣品的快速篩查,可滿足我國糧食及飼料企業(yè)、政府職能監(jiān)管部門等開展日?,F(xiàn)場檢驗和監(jiān)管抽查工作[5]。

        3 結(jié)論

        本文主要對高效液相色譜儀、酶標(biāo)儀、真菌毒素快速檢測儀檢測小麥中嘔吐毒素的操作過程和檢測結(jié)果進(jìn)行對比分析。

        從操作過程看,高效液相色譜儀前處理最為復(fù)雜和關(guān)鍵,直接影響結(jié)果準(zhǔn)確度,另外消耗試劑較多,易造成污染,主要操作為電腦軟件,能自動連續(xù)處理樣品,可用于科研和高質(zhì)量檢驗,對人員能力有一定要求;酶標(biāo)儀操作過程相對簡單,所需耗材成本也較低,但因其配置試劑較多,操作暴露風(fēng)險較大,有一定安全隱患,但能同時上機檢測96個樣品,單批次平均成本低,也可用于現(xiàn)場實驗,人員操作易上手;快檢儀操作最為簡單,所用耗材也較少,檢測過程比較安全,檢測速度較快,人員水平要求較低。

        從檢測結(jié)果來看,3種設(shè)備回收率和精密度均符合要求,其中高效液相色譜儀精密度和準(zhǔn)確度最高;酶標(biāo)儀檢測可能會出現(xiàn)假陽性,因此在其檢測出陽性樣品時,可用高效液相色譜儀進(jìn)行復(fù)檢確認(rèn);快速檢測儀檢測速度較快,但其定量檢測準(zhǔn)確度不高,比較適用于快速定性檢測。

        在實際應(yīng)用中,3種設(shè)備可以相互配合使用,靈活運用各種設(shè)備優(yōu)勢來高效率完成工作。糧食企業(yè)單位在新糧收購、轉(zhuǎn)運時可運用快速檢測儀進(jìn)行糧食DON指標(biāo)快速篩查,檢測機構(gòu)在集中進(jìn)行糧食品質(zhì)分析時,可運用酶標(biāo)儀進(jìn)行高通量檢測[6],對以上兩個設(shè)備篩檢出的陽性批次可用高效液相色譜儀進(jìn)行精準(zhǔn)復(fù)核,提升檢測效率。日常檢驗工作中,快檢儀和酶標(biāo)儀可為高效液相色譜儀提供輔助性檢測,相互補充,取長補短,為精準(zhǔn)高效檢驗嘔吐毒素共同提供數(shù)據(jù)參考。

        參考文獻(xiàn)

        [1]張春娥,劉新保,廖若宇,等.高效液相色譜法測定全麥粉中的嘔吐毒素含量[J].糧油食品科技,2018,26(5):53-57.

        [2]國家衛(wèi)生和計劃生育委員會,國家食品藥品監(jiān)督管理總局.食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇及其乙?;苌锏臏y定:GB 5009.111—2016[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2016.

        [3]國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局,中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會.實驗室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測:GB/T 27404—2008[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2008.

        [4]賈衛(wèi)昌,朱寅.高效液相色譜法與酶聯(lián)免疫法檢測小麥中嘔吐毒素的比較研究[J].糧食與食品工業(yè),2015,22(3):97-100.

        [5]李萌,馮才偉,賈芳芳,等.一種快速檢測嘔吐毒素的膠體金試紙條[J].中國釀造,2013,32(11):91-93.

        [6]莊蕓蕾.膠體金免疫快速檢測卡與酶聯(lián)免疫法檢測小麥中嘔吐毒素的技術(shù)比較[J].糧食儲藏,2017,46(3):38-41.

        久久精品免费无码区| 噜噜综合亚洲av中文无码| 性xxxx18免费观看视频| 国产精品后入内射日本在线观看| 一区在线播放| 五月婷婷开心五月播五月| 国产免费久久精品99久久| 摸进她的内裤里疯狂揉她动视频| 国产在线视频国产永久视频 | 亚洲国产丝袜美女在线| 一个少妇的淫片免费看| 国产精品成人观看视频| 国产精品九九热| 中文字幕人妻久久一区二区三区| 欧美牲交a欧美牲交| 精品人妻va出轨中文字幕| 久久久久国产亚洲AV麻豆| 网址视频在线成人亚洲| 99精品国产成人一区二区| 猫咪免费人成网站在线观看| 欧美亚洲尤物久久综合精品| 国产一区二区视频免费| 国产二区交换配乱婬| 狠狠躁夜夜躁人人爽超碰97香蕉| 亚洲成人av一区二区麻豆蜜桃| 中文字幕久久久人妻人区| 久久无码av一区二区三区| 激情丁香婷婷| 一区二区三区视频偷拍| 五月色丁香婷婷网蜜臀av| 国产精品美女久久久久久久久| 久久精品国产乱子伦多人| 久久国产亚洲精品一区二区三区| 久热国产vs视频在线观看| 国产一国产一级新婚之夜| 久久久99精品国产片| 中文字幕 亚洲精品 第1页| 国产欧美日韩精品a在线观看| 国产av天堂亚洲国产av麻豆| 久久国产亚洲精品一区二区三区| 边喂奶边中出的人妻|