楊子敬，饒桂維, ，王 磊

（1.浙江樹人大學(xué)生物與環(huán)境工程學(xué)院，浙江杭州 310015；2.杭州師范大學(xué)錢江學(xué)院理工分院，浙江杭州 310015）

枇杷（EriobotryaLindl.）為薔薇科蘋果亞科常綠小喬木[1]，是一種具有藥用價(jià)值的小型果樹，2014 年批準(zhǔn)成為新食品原料，藥食兼用[2]。近年來，枇杷花的價(jià)值越來越受到人們重視，對(duì)其研究不斷深入，枇杷花中主要成分為三萜類、黃酮類和揮發(fā)油等[3]，這些成分具有止咳、化痰、抗炎、降血糖、抗氧化、抗腫瘤[4?10]等藥理作用，但是在商業(yè)種植中，果農(nóng)們通過疏花來提高枇杷果的品質(zhì)與價(jià)值[10?11]，導(dǎo)致大量枇杷花被浪費(fèi)[12]。本文將對(duì)枇杷花中的黃酮類物質(zhì)的提取工藝進(jìn)行研究并優(yōu)化，目的是更好地開發(fā)利用枇杷花資源，為枇杷花后期的研究提供一定的理論基礎(chǔ)。

目前，枇杷花總黃酮的提取方法主要有水提法[13]、超聲波輔助法[14]、酶解結(jié)合超聲波法[15?16]，但提取液雜質(zhì)過多、耗能較大無法實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。大孔樹脂吸附[17]也有用于提取枇杷花總黃酮，但是此方法有機(jī)殘留物高、預(yù)處理難度大。雙水相是一種新興技術(shù)，它結(jié)合了從天然資源中分離、濃縮和部分純化目標(biāo)化合物的功能[18]，被廣泛應(yīng)用于黃酮的提取與分離[19]。張敏娜等[20]通過比較得出采用雙水相提取法提取月季花總黃酮的提取率更高，方法更加簡(jiǎn)便。

本實(shí)驗(yàn)以枇杷花為原料，對(duì)雙水相體系進(jìn)行篩選，使用PEG400/硫酸銨雙水相體系分離枇杷花中的黃酮，在單因素的實(shí)驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，通過Box-Behnken 響應(yīng)面法確定最佳提取工藝，為工業(yè)上快速高效提取枇杷花總黃酮提供了參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

枇杷花 來自電商購(gòu)買；蘆丁 上海綠源生物科技有限公司；實(shí)驗(yàn)所用試劑 均為國(guó)產(chǎn)分析純；水超純水。

DGG-9140A 型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；FW80 高速萬能粉碎機(jī) 天津泰斯特儀器有限公司；ME204E 電子分析天平 梅特勒托利多儀器有限公司；GL-20G-Ⅱ臺(tái)式高速冷凍離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器廠；L6S 紫外可見光分光光度計(jì) 上海精密科學(xué)儀器有限公司；KQ5200DE型數(shù)控超聲波清洗器 昆山市超聲儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 原料預(yù)處理 將枇杷花去除枝干，烘干，粉碎過200 目篩后放入保鮮袋，于干燥皿中保存。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備與標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 總黃酮的測(cè)定以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，采用亞硝酸鈉-硝酸鋁比色法[21]，以蘆丁濃度為橫坐標(biāo)、吸光度值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到蘆丁濃度ρ 和吸光度值A(chǔ)的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性回歸方程為A=0.0088ρ?0.0091，決定系數(shù)R2=0.9996，說明在2.065～103.250 mg/L 范圍內(nèi)，溶液濃度與吸光度值呈良好的線性關(guān)系。

1.2.3 構(gòu)建雙水相體系 參考文獻(xiàn)[22?27]的雙水相體系組成，分別配制24%乙醇/18%硫酸銨，41.8%乙醇/22%磷酸氫二鉀，40%乙腈/25%磷酸氫二鉀，31%丙酮/23%硫酸銨，70%丙酮/24%磷酸氫二鉀，26% PEG400/20%硫酸銨的雙水相體系。

1.2.4 枇杷花總黃酮提取 固定體系質(zhì)量為10 g，在15 mL 離心管中構(gòu)建不同的雙水相體系，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%的枇杷花粉末，加入超純水直至體系質(zhì)量為10 g，將離心管置于超聲清洗器中超聲，固定時(shí)間為40 min，功率200 W，然后用離心機(jī)將其離心，7000 r/min 離心10 min 后取出，靜置直至上下相體積不再變化，記錄上相體積并移取0.2 mL，按照

1.2.2 的方法將其處理并測(cè)量其吸光度，再根據(jù)線性方程計(jì)算總黃酮濃度。

1.2.5 單因素實(shí)驗(yàn) 分別考察超聲時(shí)間、枇杷花、PEG400 和硫酸銨的質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)總黃酮得率的影響。

1.2.5.1 超聲時(shí)間對(duì)總黃酮得率的影響 固定體系質(zhì)量為10 g，在離心管中加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%的枇杷花粉，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為26%的PEG400，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20%的硫酸銨，剩余質(zhì)量由蒸餾水補(bǔ)充，再對(duì)其進(jìn)行超聲，時(shí)間分別為20、30、40、50、60 min?？疾觳煌某晻r(shí)間對(duì)總黃酮得率的影響。

1.2.5.2 枇杷花質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)總黃酮得率的影響 固定超聲時(shí)間為上述實(shí)驗(yàn)的最優(yōu)值，其他條件不變，分別加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05%、0.1%、0.2%、0.3%、0.4%的枇杷花粉，考察不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的枇杷花對(duì)總黃酮得率的影響。

1.2.5.3 PEG400 質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)總黃酮得率的影響 固定超聲時(shí)間、枇杷花質(zhì)量分?jǐn)?shù)為上述實(shí)驗(yàn)的最優(yōu)值，其他條件不變，分別加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為24%、26%、28%、30%、32%的PEG400，考察不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的PEG400 對(duì)總黃酮得率的影響。

1.2.5.4 硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)總黃酮得率的影響 固定超聲時(shí)間、枇杷花質(zhì)量分?jǐn)?shù)、PEG400 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為上述實(shí)驗(yàn)最優(yōu)值，分別加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為14%、16%、18%、20%、22%的硫酸銨，考察不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的硫酸銨對(duì)總黃酮得率的影響。

1.2.6 響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化試驗(yàn)設(shè)計(jì) 根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選取影響總黃酮得率較大的超聲時(shí)間，枇杷花、PEG400 和硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)作為自變量，以總黃酮得率為響應(yīng)值，利用軟件Design-Expert 11 中Box-Behnken 試驗(yàn)原理，設(shè)計(jì)4 因素3 水平的優(yōu)化試驗(yàn)。響應(yīng)面試驗(yàn)因素水平表如表1 所示。

表1 響應(yīng)面試驗(yàn)因素水平表Table 1 Factors and levels table of response surface experiment

1.2.7 枇杷花總黃酮提取及得率計(jì)算 按照1.2.4的方法提取黃酮，取少量離心后的總黃酮提取液，按

1.2.2 的方法處理并測(cè)量粗提液的黃酮濃度，再按照下式計(jì)算枇杷花總黃酮得率。

式中：c：表示根據(jù)吸光度計(jì)算出的溶液質(zhì)量濃度，mg/L；D：表示稀釋倍數(shù)；V：表示上相溶液體積，mL；m：表示枇杷花粉加入的質(zhì)量，mg；10?3表示單位轉(zhuǎn)換。

1.2.8 枇杷花總黃酮抗氧化性研究

1.2.8.1 抗過氧化氫損傷的測(cè)定 在總黃酮提取液中分別加入0.1%、0.5%、1.0%、1.5%和2.0%的過氧化氫，待體系穩(wěn)定后，測(cè)定其吸光度[28]。

1.2.8.2 羥基自由基清除率的測(cè)定 結(jié)合文獻(xiàn)[29]的方法，測(cè)定枇杷花總黃酮提取液對(duì)羥自由基的清除率。配制枇杷花總黃酮濃度分別為0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mg/mL，取1.5 mL 樣品溶液,分別加入1.0 mL 2.5 mmol/L的水楊酸溶液、1.0 mL 5 mmol/L的FeSO4溶液和2.0 mL 蒸餾水，充分混勻，加入1.0 mL 5 mmol/L的H2O2，置于37 ℃恒溫水浴鍋中反應(yīng)30 min，再置于510 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度,以蒸餾水作空白參比，同時(shí)以VC作陽性對(duì)照。再按照下式計(jì)算羥自由基清除率。

式中：A0為空白對(duì)照吸光度；A2為樣品溶液吸光度(加H2O2)；A1為樣品溶液吸光度(不加H2O2)。

1.2.8.3 還原力的測(cè)定 還原力的測(cè)定采用普魯士蘭法并參照Oyaizu 等[30]的方法，配制枇杷花總黃酮濃度分別為0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mg/mL，取1.0 mL溶液加入試管，加入0.2 mol/mL、pH 為6.6的磷酸鹽緩沖溶液1.0 mL 和0.3%鐵氰化鉀溶液2.0 mL，置于50 ℃水浴條件下反應(yīng)20 min，再加入10%三氯乙酸溶液1.0 mL，于7000 r/min 條件下離心10 min，取上清液3.0 mL，加入0.3%三氯化鐵溶液0.5 mL，搖勻靜置10 min，定容至10 mL。以蒸餾水代替三氯化鐵，在相同條件下配制空白溶液，于700 nm 處測(cè)定吸光度,每個(gè)濃度平行做3 次，以蒸餾水作為參比。根據(jù)下式計(jì)算枇杷花總黃酮還原力。

還原力=A0?A1

式中：A0：樣品吸光度；A1：空白溶液吸光度。

1.3 數(shù)據(jù)處理

利用Design-Expert 11 進(jìn)行響應(yīng)面分析，利用SPSS 24 統(tǒng)計(jì)軟件、Microsoft Excel 2016 進(jìn)行數(shù)據(jù)方差顯著性處理和分析，所有實(shí)驗(yàn)均重復(fù)三次，取平均值。

2 結(jié)果與分析

2.1 雙水相體系的選擇

不同雙水相體系對(duì)枇杷花總黃酮的得率結(jié)果如圖1 所示。

由圖1 可知，PEG400/硫酸銨體系的得率高于其他體系提取枇杷花中總黃酮的得率，得出采用PEG400/硫酸銨體系提取枇杷花總黃酮的效果最佳，故本實(shí)驗(yàn)采用PEG400/硫酸銨體系。

圖1 雙水相體系的選擇Fig.1 Choice of two-phase system

2.2 單因素實(shí)驗(yàn)

2.2.1 超聲時(shí)間對(duì)總黃酮得率的影響 由圖2 可知，隨著超聲時(shí)間的增加，枇杷花總黃酮得率呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，在超聲時(shí)間為40 min 時(shí)，得率達(dá)到最大值，為22.62%。超聲時(shí)間越長(zhǎng)，細(xì)胞破碎的越完全，但繼續(xù)延長(zhǎng)超聲時(shí)間時(shí)，超聲波使某些黃酮類成分發(fā)生氧化、降解或縮合等反應(yīng)而被破壞,使含量有所下降[31]，因此選擇超聲時(shí)間為40 min 為宜。

圖2 超聲時(shí)間對(duì)得率的影響Fig.2 Effect of ultrasound time on extraction rate

2.2.2 枇杷花質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)總黃酮得率的影響 由圖3可知，隨著枇杷花質(zhì)量分?jǐn)?shù)的增大，枇杷花總黃酮得率呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，在枇杷花質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2%時(shí)，得率達(dá)到最大值，為25.39%。這主要是因?yàn)楫?dāng)上相尚未飽和時(shí)，增加枇杷花的量，得率增加，當(dāng)繼續(xù)加入枇杷花時(shí)，大量枇杷花導(dǎo)致枇杷花總黃酮提取不完全，得率下降。綜合考慮成本和提取率這兩方面因素，故選擇枇杷花質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2%。

圖3 枇杷花質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)得率的影響Fig.3 Effect of loquat flower mass fraction on extraction rate

2.2.3 PEG400 質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)總黃酮得率的影響 由圖4 可知，隨著PEG400 質(zhì)量分?jǐn)?shù)增大，枇杷花總黃酮得率呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，在PEG400 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為28%時(shí)，得率達(dá)到最大值，為25.70%。主要是由于上相中PEG400 質(zhì)量分?jǐn)?shù)增加，上相水合能力增強(qiáng)，使得上相體積增大，疏水性增加，利于疏水性的枇杷花總黃酮在上相中富集，當(dāng)繼續(xù)增加PEG400 質(zhì)量分?jǐn)?shù)時(shí)，雙水相體系粘度增大，上相溶液的空間位阻增加，不利于黃酮的富集[27,32]，使得率減少。因此，PEG400 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為28%適宜。

圖4 PEG400 質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)得率的影響Fig.4 Effect of PEG400 mass fraction on extraction rate

2.2.4 硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)總黃酮得率的影響 由圖5可知，隨著硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)增大，枇杷花總黃酮得率呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，在硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)為18%時(shí)，得率達(dá)到最大值，為26.45%。這主要是因?yàn)殡S著硫酸銨的增加，雙水相的析出作用增強(qiáng)，使總黃酮更多的富集在有機(jī)相[33]，所以總黃酮得率增加，當(dāng)繼續(xù)增大硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)時(shí)，雙水相體系極性增加，使得枇杷花總黃酮主要存在于下相，造成枇杷花總黃酮得率下降，不利于黃酮的提取，因此，選擇硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)18%為適宜的條件。

圖5 硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)得率的影響Fig.5 Effect of (NH4)2SO4 mass fraction on extraction rate

2.3 響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果

2.3.1 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案及結(jié)果分析 采用Box-Behnken 響應(yīng)面法對(duì)雙水相萃取枇杷花中的總黃酮的超聲時(shí)間，枇杷花質(zhì)量分?jǐn)?shù)，PEG400 質(zhì)量分?jǐn)?shù)和硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)優(yōu)化的結(jié)果如表2 所示。

表2 響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果Table 2 Results of response surface experiment

采用 Design-Expert 11 對(duì)枇杷花總黃酮得率進(jìn)行數(shù)據(jù)分析得到各因素的回歸擬合方程如下：Y=26.03+2.68A+0.1892B+0.0242C+0.5742D?0.5AB+0.195AC?0.4675AD+0.5325BC?0.205BD+0.075CD?3.15A2?2.85B2?1.27C2?0.9388D2

經(jīng)Design-Expert11 軟件ANOVA 法分析響應(yīng)面二次多項(xiàng)式模型的顯著性，實(shí)驗(yàn)方差結(jié)果分析如表3 所示，由表3 可知，模型中的A、D、AB、BC、A2、B2、C2、D2對(duì)枇杷花總黃酮得率的影響差異顯著（P<0.05），B、C、AD、AC、BD、CD 對(duì)枇杷花總黃酮得率的影響差異不顯著（P>0.05）。回歸模型屬于顯著水平（P<0.05），失擬項(xiàng)差異不顯著（P=0.2458>0.05），試驗(yàn)決定系數(shù)R2=0.9863 和校正測(cè)定系數(shù)R2adj=0.9726,低變異系數(shù)CV=1.93%。以上結(jié)果均表明模型擬合程度高，可靠性強(qiáng)，觀察值和實(shí)測(cè)值之間的相關(guān)性良好，可以對(duì)雙水相提取枇杷花中總黃酮的結(jié)果進(jìn)行分析和預(yù)測(cè)。根據(jù)回歸方程和方差分析可知，各因素對(duì)枇杷花總黃酮得率的影響程度由大到小依次為A>D>B>C，即超聲時(shí)間>硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)>枇杷花質(zhì)量分?jǐn)?shù)>PEG400 質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

表3 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)結(jié)果及方差分析Table 3 Analysis of variance of response surface experiment results

響應(yīng)面法是通過分析自變量之間的相互作用以及自變量對(duì)響應(yīng)值影響優(yōu)化工藝的方法，是一種用于食品加工中高產(chǎn)和產(chǎn)品質(zhì)量驗(yàn)收的技術(shù)[34]。超聲時(shí)間、枇杷花質(zhì)量分?jǐn)?shù)、PEG400 質(zhì)量分?jǐn)?shù)、硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)之間相互作用的響應(yīng)面曲線圖如圖6 所示。通過響應(yīng)面圖可直觀的看出各因素之間相互影響的顯著性，曲面越陡峭，說明影響越顯著[35]。由圖6 可以看出AC、AD、BD 和CD 之間的相互作用對(duì)得率的影響不大，響應(yīng)面圖較為緩和；AB 和BC的相互作用對(duì)得率的影響大，響應(yīng)面圖有不同程度的陡峭。

圖6 各因素對(duì)響應(yīng)值影響的曲面圖Fig.6 Surface plot of the influence of various factors on the response value

2.3.2 最佳工藝條件的預(yù)測(cè)及驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 根據(jù)響應(yīng)面模型預(yù)測(cè)雙水相提取枇杷花中總黃酮的實(shí)驗(yàn)條件為：超聲時(shí)間為44.125 min，枇杷花質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.199%，PEG400 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為28.092%，硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)為18.412%，理論總黃酮得率為26.641%，為了驗(yàn)證預(yù)測(cè)值的準(zhǔn)確性，同時(shí)兼顧操作的方便性，將最佳工藝條件調(diào)整為：超聲時(shí)間為45 min，枇杷花質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2%，PEG400 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為28%，硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)為18%，在此工藝條件下進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，重復(fù)實(shí)驗(yàn)3 次，得到枇杷花總黃酮平均得率為26.96%，預(yù)測(cè)值與實(shí)驗(yàn)值無顯著性差異，表明該模型適用于枇杷花總黃酮的提取。

2.4 枇杷花總黃酮的抗氧化性

2.4.1 抗過氧化氫損傷 如圖7 所示，隨著過氧化氫濃度的提高，總黃酮提取液的吸光度變化不大，說明枇杷花總黃酮對(duì)不同濃度過氧化氫的損傷具有良好的耐受力，體現(xiàn)了該黃酮有較強(qiáng)的抗氧化性。

圖7 不同濃度過氧化氫對(duì)黃酮提取液的影響Fig.7 The effect of different concentrations of hydrogen peroxide on flavonoid extract

2.4.2 羥自由基清除率 枇杷花提取液對(duì)羥自由基的清除能力如圖8 所示，隨著提取液濃度增大羥自由基的清除率增大。在濃度0.1～0.3 mg/mL 時(shí)，總黃酮提取液對(duì)羥自由基的清除率大于Vc，在濃度達(dá)到0.5 mg/mL 時(shí)，總黃酮提取液對(duì)羥自由基的清除率達(dá)到71.89%，Vc 在相同濃度下的清除率為76.34%?？傸S酮濃度在0.4 mg/mL 和0.5 mg/mL 之間不存在顯著差異（P>0.05）,說明提高總黃酮濃度，清除率無明顯差異?？傸S酮提取液清除·OH的IC50為0.297 mg/mL，Vc 清除·OH的IC50為0.315 mg/mL。通過比較兩者的IC50值，可知枇杷花總黃酮清除·OH的能力優(yōu)于Vc。

圖8 枇杷花總黃酮和Vc的羥自由基清除率Fig.8 Scavenging rate of hydroxyl free radicals of loquat flower flavonoids and Vc

2.4.3 還原力 測(cè)定其吸光度的大小反映樣品還原能力的大小，吸光度越大則還原力越強(qiáng)。枇杷花總黃酮和Vc的還原力測(cè)定結(jié)果如圖9 所示，隨著濃度的增高，枇杷花總黃酮和Vc的還原力也在增大，Vc 增加的速度高于枇杷花總黃酮，濃度越大，Vc的還原力越優(yōu)于枇杷花總黃酮的還原力。

圖9 枇杷花總黃酮和Vc的還原力Fig.9 The reducing power of loquat flower flavonoids and Vc

3 討論與結(jié)論

本文研究了不同雙水相體系對(duì)枇杷花總黃酮得率的影響，確定采用PEG400/硫酸銨體系來提取枇杷花總黃酮，對(duì)其提取工藝流程進(jìn)行優(yōu)化，最佳的工藝條件為：超聲時(shí)間為45 min，枇杷花質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2%，PEG400 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為28%，硫酸銨質(zhì)量分?jǐn)?shù)為18%，在此條件下提取得到枇杷花總黃酮的含量為269.6 mg/g。與黃瓊[14]、謝田偉[21]、鄭美瑜[36]采用的提取工藝所得到的含量相比，采用雙水相提取得到枇杷花總黃酮的含量更高。對(duì)采用此工藝得到的枇杷花總黃酮進(jìn)行抗氧化性實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明：此工藝得到的枇杷花總黃酮具有良好的抗氧化性。黃酮類化合物既可以作為食品添加劑延緩食物的氧化，也可以預(yù)防自由基引發(fā)的多種疾病，因此枇杷花在食品和醫(yī)藥的研制方面都有良好的應(yīng)用前景。

利用雙水相提取黃酮，該方法具有操作簡(jiǎn)便、條件溫和、設(shè)備簡(jiǎn)單、成本低、效率高等優(yōu)點(diǎn)，但本實(shí)驗(yàn)中提取的黃酮存在于有機(jī)相中，下一步可對(duì)總黃酮提取液進(jìn)行分離純化并對(duì)成分進(jìn)行分析，更加深入研究枇杷花總黃酮的抗氧化功效。本實(shí)驗(yàn)為枇杷花的深度利用提供了新的參考方法，但是如何將此工藝應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)，提高枇杷花產(chǎn)業(yè)鏈的綜合效益是一個(gè)新的研究方向。