李榕娣，莊遠(yuǎn)杯，魏愛紅，鐘婉如，張 超，張 勇，張聲源,

（1.嘉應(yīng)學(xué)院廣東省山區(qū)特色農(nóng)業(yè)資源保護(hù)與精準(zhǔn)利用重點實驗室，廣東梅州 514015；2.嘉應(yīng)學(xué)院醫(yī)學(xué)院客家藥用生物資源研究所，廣東梅州 514031）

蕨菜為烏毛蕨科烏毛蕨屬烏毛蕨（Blechnum orientaleL.）的嫩芽，又名拳頭菜、龍頭菜，分布于中國各地[1]。蕨菜全草入藥，用于清熱利濕、消腫、利水、安神等功效[2]?，F(xiàn)代藥學(xué)研究表明，蕨菜含有許多黃酮類、藏素類、苯甲酸類等成分[3]。其中，黃酮為其主要有效成分，具有降血脂、抗過敏、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抗腫瘤等藥理活性[4]。然而，關(guān)于抗氧化活性的研究多局限于采用單一加工處理方式的蕨菜粗提物，對不同加工處理方式蕨菜的抗氧化和降血糖活性與組分相關(guān)性研究未見報道，目標(biāo)成分不明確。民間即食蕨菜不同加工處理方式主要有兩種：一是加1%的食鹽沸水熱燙殺青，脆化冷卻，鹽水浸泡出售（濕品）；二是經(jīng)1%的食鹽沸水熱燙，脆化冷卻，自然曬干（干品）[5]。研究顯示，不同加工處理過程對蕨菜成分含量影響較大，其中經(jīng)過加工處理的蕨菜中原蕨苷、維生素C 含量明顯低于新鮮蕨菜[6?7]，但針對不同加工處理方式蕨菜的總酚、總黃酮成分含量及抗氧化、降血糖活性比較研究未見報道。

糖尿?。―iabetes Mellitus，DM）已嚴(yán)重威脅人體健康，2019 年全球約4.63 億20～79 歲成人患糖尿病，預(yù)計到2030 年，糖尿病患者會達(dá)到5.784 億，呈高度流行態(tài)勢[8?9]。α-葡萄糖苷酶位于小腸刷狀緣，是降低餐后血糖的有效分子靶標(biāo)，抑制其活性可顯著延緩體內(nèi)葡萄糖的吸收，降低血糖水平[10]。研究表明，持續(xù)高血糖水平引起的氧化應(yīng)激反應(yīng)可促進(jìn)動脈粥樣硬化等糖尿病并發(fā)癥的形成[11]，減少自由基的產(chǎn)生或直接淬滅體內(nèi)產(chǎn)生的自由基是預(yù)防和治療糖尿病及其并發(fā)癥的有效手段[12]。目前臨床廣泛運用的抗氧化劑及α-葡萄糖苷酶抑制劑存在毒副作用，如阿卡波糖引起脹氣、腹部不適、排氣等胃腸道不良反應(yīng)[13?14]。天然產(chǎn)物降糖作用具有多途徑、多靶點的藥理特點，作用溫和持久、毒副作用小，可有效減輕糖尿病的癥狀并延緩并發(fā)癥的發(fā)生和發(fā)展[15]。從可食用的天然產(chǎn)物中尋找安全、有效、且同時具有α-葡萄糖苷酶抑制活性和抗氧化活性的藥物已成為研究熱點。

為明確蕨菜的食用及藥用價值，實驗測定三種不同蕨菜95%乙醇提取物的總酚、總黃酮的含量差異，測定抗氧化活性、體外α-葡萄糖苷酶抑制活性、體外α-淀粉酶抑制活性，并對總酚、總黃酮含量與生物活性進(jìn)行了相關(guān)性分析，為蕨菜的進(jìn)一步研究和開發(fā)利用提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

蕨菜 2019 年2～3 月采于廣東省梅州市大埔縣，經(jīng)嘉應(yīng)學(xué)院醫(yī)學(xué)院張聲源副教授鑒定為烏毛蕨科（Blechnaceae）的烏毛蕨（Blechnum orientale L.）的嫩芽；α-葡萄糖苷酶（G5003-100U）、α-淀粉酶（A3176-500KU） sigma 公司；對-硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷（pNPG）、對硝基苯酚（pNP） 上海源葉科技有限公司；阿卡波糖 德國拜耳公司；3,5-二硝基水楊酸（DNS） 國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；葡萄糖 西隴科學(xué)股份有限公司；丙三醇 天津市富宇精細(xì)化工有限公司；可溶性淀粉 天津市大茂化學(xué)試劑廠；1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）、2,2-聯(lián)氮基-雙-（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺）二氨鹽（ABTS）、NaH2PO4·2H2O、Na2HPO4·12H2O、FeSO4·7H2O、水楊酸、K3[Fe（CN）6]、三氯化鐵、三氯乙酸、維生素C（Vc）、亞硝酸鈉 上海阿拉丁生化科技股份有限公司；硝酸鋁 天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；沒食子酸 分析純，上海金穗生物科技有限公司；蘆丁

分析純，成都昂賽思生物科技有限公司；甲醇、乙腈 色譜純，fisher scientific 公司。

Alliance 2695 型高效液相色譜儀、XBridge Peptide BEH C18色譜柱（250 mm× 4.6 mm，5 μm）沃特世科技（上海）有限公司；UV-1800 型紫外-可見分光光度計 日本島津公司；MING-CHE 24ΜV 型超純水機(jī) 法國Merck Millipore 公司；PB-21 型酸度計 北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；N-1100V 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海愛朗儀器有限公司；FA2004 型電子分析天平、BS110s 型電子分析天平德國Sartorius 公司；WJX-A1000 型高速多功能粉碎機(jī) 浙江省永康市紅太陽機(jī)電有限公司；JP-100S 型超聲波清洗器 深圳市潔盟清洗設(shè)備有限公；GL-25M 型離心機(jī) 上海趙迪生物科技有限公司；XW-80A 型旋渦混合器 上海精科實業(yè)有限公司；TGL16MC 型臺式高速冷凍離心機(jī) 長沙湘銳離心機(jī)有限公司；數(shù)顯HH-6 系列恒溫水浴鍋 金壇市國旺實驗儀器廠。

1.2 實驗方法

1.2.1 不同蕨菜醇提取物的制備 參考文獻(xiàn)[5]，a.鮮品（新鮮采摘的蕨菜）；b.濕品（加1%的食鹽沸水熱燙、殺青）；c.干品（經(jīng)1%的食鹽沸水熱燙、殺青，再自然曬干）；取上述三種供試品各2.0 kg，切碎，分別加10 L的95%乙醇浸泡12 h，超聲輔助提取30 min（溫度設(shè)為40 ℃，200 W，40 kHz）、過濾，重復(fù)上述操作2 次，合并三次濾液，濃縮得浸膏，得到鮮品浸膏210 g（得率10.5%，得率（%）=（浸膏質(zhì)量/2000）×100，下同）、濕品浸膏196 g（得率9.8%）、干品浸膏228 g（得率11.43%），放置于冰箱4 ℃冷藏，備用。樣品使用前加磷酸緩沖溶液（PBS，0.067 mol/L，pH6.8）溶解制備成不同質(zhì)量濃度的溶液，質(zhì)量濃度均以提取物計。

1.2.2 硝酸鋁法測定總黃酮含量

1.2.2.1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 參考文獻(xiàn)[16?17]，精密稱取干燥至恒重的蘆丁對照品20 mg，用95%乙醇溶解并定容至100 mL的容量瓶中，搖勻，得質(zhì)量濃度為0.2 mg/mL的蘆丁對照品標(biāo)準(zhǔn)溶液，按濃度梯度配制成最終質(zhì)量濃度為0.028、0.056、0.084、0.112、0.140 mg/mL的蘆丁對照品標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別精密移取不同質(zhì)量濃度梯度蘆丁對照品標(biāo)準(zhǔn)溶液7 mL，依次加入5%亞硝酸鈉溶液1 mL，震蕩搖勻，放置4 min，加入10 % Al（NO3）3溶液1 mL，搖勻，放置4 min，加入4%氫氧化鈉試液10 mL，再加蒸餾水至刻度，充分搖勻，放置10 min，以95%的乙醇和顯色試劑為空白，按照紫外-可見分光光度法，在波長為500 nm 處測定吸光度。吸收度（A）與其質(zhì)量濃度（C，mg/mL）用最小二乘法求得回歸方程。

1.2.2.2 總黃酮含量的測定 分別精確移取待測樣品溶液3 mL，按照 “1.2.2.1”項的實驗方法于500 nm處測定其吸光度，以PBS 代替待測樣品為空白對照。每組實驗平行測定3 次。各提取物的總黃酮含量參考蘆?。╮utin,RT）標(biāo)準(zhǔn)曲線用蘆丁當(dāng)量（每克干樣品中黃酮類化合物相當(dāng)于蘆丁的毫克數(shù)，mg/g）表示，根據(jù)公式（1）計算。每個提取物平行測定3 次。

式中：c 為待測樣品稀釋后的總黃酮濃度，由標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合得出，mg/mL；v 為各待測樣品提取液總體積，mL；k 為待測樣品提取液稀釋倍數(shù)；m 為蕨菜粉末質(zhì)量，g。

1.2.3 福林酚法測定總酚含量

1.2.3.1 沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 參考文獻(xiàn)[18?19]，精確稱取干燥至恒重的沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品20 mg，用蒸餾水溶解并定容于100 mL 棕色量瓶中，得質(zhì)量濃度為0.2 mg/mL 沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)液。分別精密移取沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL 置于6 個10 mL 棕色具塞比色管中，依次加入6 mL>蒸餾水，0.5 mL 福林試劑，充分搖勻，室溫避光靜置2 min，再加2 mL 7.5%碳酸鈉溶液，用蒸餾水定容至刻度，40 ℃水浴10 min，最后25 ℃水浴暗置60 min。得沒食子酸質(zhì)量濃度分別為0、2、4、6、8、10 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在760 nm 波長處測定其各吸光度。吸收度（A）與其濃度（C，μg/mL）用最小二乘法求得回歸方程。

1.2.3.2 不同加工方法蕨菜總酚含量的測定 分別精確移取待測樣品溶液10 mL，按照“1.2.3.1”項的實驗方法于760 nm 處測定其吸光度，以PBS 代替待測樣品為空白對照。每組實驗平行測定3 次。各提取物的總酚含量參考沒食子酸（gallic acid，GA）標(biāo)準(zhǔn)曲線用沒食子酸當(dāng)量（每克干樣品中酚類化合物相當(dāng)于沒食子酸的毫克數(shù)，mg/g）表示，根據(jù)公式（2）計算。每個提取物平行測定3 次。

式中：c 為待測樣品稀釋后的總酚濃度，由標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合得出，mg/mL；v 為各待測樣品提取液總體積，mL；k 為待測樣品提取液稀釋倍數(shù)；m 為蕨菜粉末質(zhì)量，g。

1.2.4 抗氧化活性測定

1.2.4.1 清除DPPH 自由基活性測定 參考文獻(xiàn)[20?21]，稍作改進(jìn)。分別精密移取2.0 mL 不同質(zhì)量濃度被試樣品（不同加工方式蕨菜質(zhì)量濃度均為：50.0、25.0、12.5、6.25、3.125 μg/mL；Vc 為：17.0、12.0、8.1、5.6、4.0 μg/mL）于10 mL 試管中，分別加入0.15 mmoL/L DPPH 溶液2.0 mL，室溫避光靜置20 min，于波長517 nm 處測定吸光度（Ai）；同時測定2.0 mL DPPH溶液與2.0 mL 甲醇混合后在波長517 nm 處的吸光度（A0）；測定2.0 mL 甲醇與2.0 mL 樣品溶液在波長517 nm 處的吸光度（Aj）；每組平行測定3 次，以抗壞血酸作為陽性對照。根據(jù)公式（3）計算出DPPH 自由基的清除率。

1.2.4.2 清除ABTS 自由基活性測定 參考文獻(xiàn)[22?23]，稍作改進(jìn)。將7.0 mmoL/L的ABTS 溶液與2.45 mmoL/L 過硫酸鉀溶液等體積混合，室溫避光靜置12～16 h，制備ABTS 自由基母液。10 mmoL/L（pH7.4）磷酸緩沖溶液將ABTS 自由基母液稀釋，使其在波長734 nm 處吸光度達(dá)到（0.70±0.02）。分別將0.1 mL 不同質(zhì)量濃度被試樣品（不同加工方式蕨菜質(zhì)量濃度均為：0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125 mg/mL；Vc 為：0.15、0.12、0.096、0.049、0.039 mg/mL）加入3.9 mL ABTS 自由基溶液中，振蕩30 s 后室溫靜置10 min，于波長734 nm 處測量吸光度（Ai）；同時測定3.9 mL ABTS 自由基溶液與0.1 mL 甲醇溶液混合后在波長734 nm 處的吸光度（A0）；測定3.9 mL（10 mmoL/L；pH7.4）磷酸緩沖溶液與1.0 mL 樣品溶液在波長734 nm 處的吸光度（Aj）；每組平行測定3 次，以抗壞血酸作為陽性對照。根據(jù)公式（4）計算出ABTS 自由基的清除率。

1.2.4.3 對Fe3+還原能力測定 參考文獻(xiàn)[24]，稍作改進(jìn)。取各不同質(zhì)量濃度被試樣品（不同加工方式蕨菜質(zhì)量濃度均為：90.0、80.0、70.0、60.0、50.0 μg/mL；Vc 為：36.0、24.0、16.0、12.0、8.0 μg/mL）2.5 mL，加入2.0 mol/L（pH6.8）的磷酸緩沖液2.5 mL 及1%的鐵氰化鉀溶液2.5 mL，搖勻后置于50 ℃恒溫水浴鍋中加熱反應(yīng)20 min，急速冷卻后加入10%的三氯乙酸溶液2.5 mL，充分混勻，于4000 r/min 離心10 min，取上清液2.5 mL，依次加入2.0 mL 蒸餾水與0.5 mL FeCl3溶液混合均勻，于700 nm 處測定此反應(yīng)體系的吸光值（Ai）。以 2.5 mL的蒸餾水代替不同濃度的試樣品于在700 nm 處測得空白吸光值（A0）。不同質(zhì)量濃度的Vc 標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)上述操作，以吸光度為縱坐標(biāo)（Y），Vc 溶液濃度（μmol/mL）為橫坐標(biāo)（X），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。每組平行測定3 次，鐵還原力大小用每克樣品的Vc 當(dāng)量表示（μmol Vc/g）。

1.2.5 體外降血糖活性評價

1.2.5.1 對α-葡萄糖苷酶抑制活性的測定 參考文獻(xiàn)[25]，稍作改進(jìn)。精密吸取0.067 mol/L（pH6.8）的磷酸鹽緩沖溶液250 μL 于試管中、加入被試樣品50 μL、0.1 U/mLα-葡萄糖苷酶300 μL，混勻，37 ℃恒溫水浴20 min，加入4.0 mmol/L pNPG 200 uL，混勻，37 ℃恒溫反應(yīng)60 min，加入甲醇800 μL 終止反應(yīng)，0.45 μm 微孔濾膜過濾，用HPLC 檢測pNP，每組平行三次，以阿卡波糖為陽性對照。根據(jù)公式（5）計算酵母菌源α-葡萄糖苷酶的抑制率。

式中：Ao為緩沖液+酶液+底物反應(yīng)后的pNP 峰面積；Ai:樣品+酶液+底物反應(yīng)后的pNP 峰面積；Aj:樣品+緩沖液+底物反應(yīng)后的pNP 峰面積。

色譜條件：色譜柱為XBridge Peptide BEH C18柱（5 μm，4.6 mm×250 mm）；流動相：乙腈（A 液），0.1%甲酸水溶液（B 液）。梯度洗脫條件為：0～8 min，20%～30% A 液；8～13 min，30%～80%A 液；13～15 min，80%～20% A 液；15～25 min，20%A 液；進(jìn)樣量：10 μL；流速：1.0 mL/min；柱溫：35 ℃；檢測波長：315 nm。

1.2.5.2 對α-淀粉酶抑制活性的測定 參考文獻(xiàn)[26?27]，稍作改進(jìn)。精密吸取被試樣品0.3 mL，加0.3 mLα-淀粉酶溶液，混勻，于37 ℃水浴孵育5 min，加入0.3 mL 在 37 ℃水浴中同時預(yù)溫5 min的1%可溶性淀粉溶液，混勻，反應(yīng)15 min，立即加入0.5 mL DNS，煮沸5 min，隨后于冰水中靜置20 min，0.067 mol/L（pH6.8）磷酸緩沖溶液定容至5 mL，540 nm 下測吸光值，每組平行三次，以阿卡波糖為陽性對照。根據(jù)公式（6）計算α-淀粉酶抑制率。

式中：A0為樣品溶液+酶溶液+PBS 溶液反應(yīng)體系的吸光度值；Ab為酶溶液+PBS 溶液反應(yīng)體系的吸光度值；Ai為樣品溶液+酶溶液+淀粉溶液反應(yīng)體系的吸光度值；Aj為樣品溶液+PBS+淀粉溶液反應(yīng)體系的吸光度值。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

實驗重復(fù)3 次，采用Origin 8.5 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，并得到相應(yīng)的半數(shù)抑制濃度（IC50）。利用單因素方差分析和Duncan 法檢驗多組數(shù)據(jù)間差異的顯著性（P<0.05 顯著相關(guān)；P<0.01 極顯著相關(guān)）。

2 結(jié)果與分析

2.1 總黃酮和總酚含量

蘆丁的標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1 所示，曲線的線性擬合方程Y=13.638X–0.033，R2=0.999，線性良好。

圖1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Rutin standard curve

沒食子酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖2 所示，曲線的線性擬合方程Y=0.1056X+0.0257，R2=0.997，線性良好。

圖2 沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2 Gallic acid standard curve

由表1 可知，不同蕨菜的總黃酮、總酚含量大小依次為鮮品>濕品>干品，差異顯著（P<0.05），表明經(jīng)過食鹽水熱湯加工處理后的濕品和干品蕨菜總酚和總黃酮含量低，這可能與酚類和黃酮類中的羥基受熱不穩(wěn)定性有關(guān)，研究顯示經(jīng)過熱燙后的酚類物質(zhì)含量下降達(dá)到約60%[28]。其中鮮品總黃酮含量高達(dá)（156.75±1.28）mg RT/g，鮮品總酚含量高達(dá)（593±3.45）mg GA/g，該結(jié)果與陳乃東等[29]的研究結(jié)果一致。

表1 不同蕨菜醇提物總黃酮、總酚含量（,n=3）Table 1 Total flavonoid,polyphenol contents of different processing products from Blechnum orientale L.(,n=3)

表1 不同蕨菜醇提物總黃酮、總酚含量（,n=3）Table 1 Total flavonoid,polyphenol contents of different processing products from Blechnum orientale L.(,n=3)

注：同行肩標(biāo)字母不同表示差異顯著（P<0.05），表2～表5同。

2.2 抗氧化評價

2.2.1 DPPH 自由基清除作用 對DPPH 自由基清除作用由圖3、表2 可知，不同蕨菜醇提取物對DPPH 自由基均具有一定程度的清除作用，清除率隨質(zhì)量濃度的增大而增大，呈一定的量效關(guān)系。IC50值大小依次為蕨菜干品>濕品>鮮品>Vc，差異顯著（P<0.05）。IC50值越小，對自由基的清除能力越強(qiáng)。表明蕨菜鮮品對DPPH 自由基的清除能力最強(qiáng)，其IC50=（17.01±0.022）μg/mL，在質(zhì)量濃度為50.0 μg/mL時清除率可達(dá)97.28%。

圖3 不同蕨菜醇提取物對DPPH 自由基的清除作用Fig.3 Effect of different processing products from Blechnum orientale L. on scavenging rate for DPPH radical

表2 不同蕨菜醇提取物對DPPH 自由基清除作用的IC50 值（,n=3）Table 2 IC50 values of different processing products from Blechnum orientale L.on scavenging rate for DPPH radical (,n=3)

表2 不同蕨菜醇提取物對DPPH 自由基清除作用的IC50 值（,n=3）Table 2 IC50 values of different processing products from Blechnum orientale L.on scavenging rate for DPPH radical (,n=3)

2.2.2 ABTS 自由基清除作用 對ABTS 自由基清除作用由圖4、表3 可知，不同蕨菜醇提取物對ABTS 自由基均具有一定程度的清除作用，清除率隨質(zhì)量濃度的增大而增大，呈一定的量效關(guān)系。IC50值大小依次為蕨菜干品>濕品>鮮品>Vc，差異顯著（P<0.05）。表明蕨菜鮮品對ABTS 自由基的清除能力最強(qiáng)，其IC50=（0.20±0.001）mg/mL，在質(zhì)量濃度為0.5 mg/mL 時最高清除率可達(dá)99.59%。

圖4 不同蕨菜醇提取物對ABTS 自由基的清除作用Fig.4 Effect of different processing products from Blechnum orientale L. on scavenging rate for ABTS radical

表3 不同蕨菜醇提取物對ABTS 自由基清除作用的IC50 值（,n=3）Table 3 IC50 values of different processing products from Blechnum orientale L.on scavenging rate for ABTS radical (,n=3)

表3 不同蕨菜醇提取物對ABTS 自由基清除作用的IC50 值（,n=3）Table 3 IC50 values of different processing products from Blechnum orientale L.on scavenging rate for ABTS radical (,n=3)

2.2.3 Fe3+還原能力 對Fe3+還原能力由圖5 可知，不同蕨菜醇提取物均具有一定的Fe3+還原能力，還原能力大小依次為鮮品>濕品>干品，其Vc 當(dāng)量分別為（1427.77±1.36）、（1218.24±0.25）、（340.68±2.45）μmol Vc/g，差異顯著（P<0.05）。

圖5 蕨菜不同加工品對Fe 3+ 還原能力的影響Fig.5 Effect of different processing products from Blechnum orientale L.on reducing ferric

綜合DPPH 自由基清除能力、ABTS 自由基清除能力和鐵離子還原能力的實驗結(jié)果，不同加工品抗氧化能力大小依次為鮮品>濕品>干品，表明經(jīng)過加工處理后的蕨菜抗氧化活性降低，該結(jié)果與總黃酮、總酚變化趨勢一致，這可能與蕨菜在經(jīng)過加工處理后總黃酮、總酚和蛋白質(zhì)、維生素C 等營養(yǎng)成分含量降低有關(guān)[7]。吳永祥等[30]也觀察到類似的趨勢，其結(jié)果顯示經(jīng)過發(fā)酵加工處理后的蕨菜醇提物總酚含量降低，清除DPPH 自由基和ABTS 自由基能力降低。

2.3 體外降血糖活性

2.3.1 對a-葡萄糖苷酶活性的抑制 圖6、表4 可知，不同蕨菜醇提取物對酵母菌來源α-葡萄糖苷酶均具有一定程度的抑制作用，且在一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，隨著質(zhì)量濃度的增加，其抑制活性顯著提高，呈一定的量效關(guān)系，α-葡萄糖苷酶活性抑制的IC50值大小依次為鮮品>干品>濕品，差異顯著（P<0.05）。表明蕨菜濕品抑制α-葡萄糖苷酶活性最強(qiáng)，其IC50=（1.65±0.054）μg/mL，在質(zhì)量濃度為15.0 μg/mL時抑制率可達(dá)89.62%。

圖6 不同蕨菜醇提取物對酵母菌來源α-葡萄糖苷酶抑制活性Fig.6 Inhibition of different processing products from Blechnum orientale L.on yeast α-glucosidase activity

表4 不同蕨菜醇提取物對酵母菌來源α-葡萄糖苷酶抑制活性的IC50 值（,n=3）Table 4 IC50 of the inhibitory activity of different processing products from Blechnum orientale L.to yeast α-glucosidase (,n=3)

表4 不同蕨菜醇提取物對酵母菌來源α-葡萄糖苷酶抑制活性的IC50 值（,n=3）Table 4 IC50 of the inhibitory activity of different processing products from Blechnum orientale L.to yeast α-glucosidase (,n=3)

2.3.2 對α淀粉酶活性的抑制 由圖7、表5 可知，不同蕨菜醇提取物對α-淀粉酶均具有一定程度的抑制作用，且在一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，隨著質(zhì)量濃度的增加，其抑制活性顯著提高，呈一定的量效關(guān)系。對α-淀粉酶活性抑制的IC50值大小依次為鮮品>干品>濕品，差異顯著（P<0.05）。其中，濕品的IC50值低于阿卡波糖，干品和鮮品的IC50值高于阿卡波糖。表明蕨菜濕品抑制α-淀粉酶活性最強(qiáng)，且活性強(qiáng)于陽性對照阿卡波糖，其IC50=（0.056±0.001）mg/mL，在質(zhì)量濃度為0.1 mg/mL 時抑制率可達(dá)77.09%。

表5 不同蕨菜醇提取物對α-淀粉酶抑制活性的IC50 值（,n=3）Table 5 IC50 of the inhibitory activity of different processing products from Blechnum orientale L.to α-amylase (,n=3)

表5 不同蕨菜醇提取物對α-淀粉酶抑制活性的IC50 值（,n=3）Table 5 IC50 of the inhibitory activity of different processing products from Blechnum orientale L.to α-amylase (,n=3)

圖7 不同蕨菜醇提取物對α-淀粉酶抑制活性Fig.7 Inhibition of different processing products from Blechnum orientale L.on α-amylase activity

綜合α-葡萄糖苷酶與α-淀粉酶活性抑制的結(jié)果顯示，不同蕨菜醇提取物體外降血糖活性大小依次為濕品>干品>鮮品，表明加工處理后的蕨菜的降血糖活性優(yōu)于新鮮蕨菜。其中，不同蕨菜醇提取物對酵母菌來源α-葡萄糖苷酶抑制作用強(qiáng)于阿卡波糖，其可能原因在于蕨菜提取物中豐富的酚類、黃酮、多糖、生物堿等成分類型和多種成分的協(xié)調(diào)作用的結(jié)果有關(guān)[2]，研究顯示酚類、多糖具有顯著的α-葡萄糖苷酶抑制活性，甚至優(yōu)于阿卡波糖[31]。

2.4 相關(guān)性分析

由表6 可知，總酚和總黃酮含量與抗氧化活性（DPPH 自由基清除能力、ABTS 自由基清除能力、還原能力）均呈極顯著正相關(guān)性（P<0.01）?？偡优cα-葡萄糖苷酶抑制活性呈極顯著正相關(guān)性（P<0.01），但總酚與α-淀粉酶抑制活性、總黃酮與α-葡萄糖苷酶抑制活性、α-淀粉酶抑制活性呈顯著正相關(guān)性（P<0.05）。

表6 不同蕨菜醇提取物總酚、總黃酮與抗氧化、α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶的抑制活性的相關(guān)性Table 6 The relationships of the contents of total polyphenols and total flavonoids with the antioxidant activity、α-glucosidase and α-amylase inhibitory activity of different processing products from Blechnum orientale L.

結(jié)果表明，總酚、總黃酮是蕨菜發(fā)揮抗氧化活性的重要物質(zhì)基礎(chǔ)，可能與其總酚、總黃酮富含酚羥基結(jié)構(gòu)有關(guān)[32]，而其降血糖活性與總酚、總黃酮未顯示極顯著正相關(guān)，表明其發(fā)揮降血糖活性物質(zhì)基礎(chǔ)除總酚、總黃酮，可能與其他活性成分，如蕨菜中的多糖、生物堿類有關(guān)[2]。

3 結(jié)論

實驗以不同蕨菜醇提取物為原料，對其總酚、總黃酮含量及其體外抗氧化和降血糖活性進(jìn)行了系統(tǒng)研究。結(jié)果顯示，不同蕨菜醇提取物均含有豐富的總酚、總黃酮和顯著的抗氧化和降血糖活性，且抗氧化活性與總酚和總黃酮含量呈極顯著相關(guān)，降血糖活性與總酚和黃酮呈顯著正相關(guān)。其中，蕨菜鮮品具有最高的總酚、總黃酮含量和抗氧化活性，蕨菜濕品具有最高的體外降血糖活性，應(yīng)重點從鮮品出發(fā)尋找發(fā)揮抗氧化活性的酚類和黃酮類成分，從濕品出發(fā)尋找降低餐后血糖的活性成分。

研究結(jié)果對蕨菜的生產(chǎn)加工提供一定的數(shù)據(jù)參考，特別是對蕨菜在食品藥品工業(yè)中的潛在應(yīng)用研究具有一定的參考價值。然而，蕨菜發(fā)揮抗氧化活性中酚類、黃酮類具體結(jié)構(gòu)及構(gòu)效關(guān)系和作用機(jī)制有待進(jìn)一步深入，除酚類、黃酮類，蕨菜發(fā)揮降血糖活性的其他物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制有待進(jìn)一步闡明。