師夢超,周冰，楊絨娟，周德剛，李朋朋

（洛陽惠中獸藥有限公司，國家獸用藥品工程技術(shù)研究中心 河南洛陽 471003）

近年國內(nèi)外遭受非洲豬瘟和新冠病毒等帶來的疫情災難，不論對畜牧養(yǎng)殖業(yè)還是人類健康事業(yè)都造成了嚴重影響，除疫苗外，消毒已成為養(yǎng)殖業(yè)和人類健康事業(yè)中預防和控制疾病流行的一種重要措施，人們也充分認識到消毒環(huán)節(jié)在安全防護方面的必要性和重要性。過硫酸氫鉀復合鹽類消毒劑是一種過氧化物類高效消毒劑，具有殺滅速度快，效率高且分解無殘留等優(yōu)點[1]，一般由過硫酸氫鉀復合鹽、氯化物、有機酸、無機酸、表面活性劑和軟水劑組成，其中過硫酸氫鉀復合鹽是主要活性成分[2]。市面上過硫酸氫鉀復合鹽泡騰片多含磷，在消毒應用過程中容易導致環(huán)境富營養(yǎng)化，因此本研究采用無磷輔料制備過硫酸氫鉀復合鹽泡騰片，并對其水溶液的消毒效果進行評價。

1 試驗材料

1.1 試劑

營養(yǎng)瓊脂，購自青島高科園海博生物技術(shù)有限公司；無水硫代硫酸鈉，分析純，購自天津科密歐化學試劑有限公司；無水磷酸氫二鈉、磷酸二氫、碳酸氫鈉、十二烷基苯磺酸鈉、鈉氯化鈉、氨基磺酸、無水檸檬酸、EDTA-2Na，分析純，購自國藥集團化學試劑有限公司；過硫酸氫鉀復合鹽，購自翱圖（開封）環(huán)?？萍加邢薰荆痪劬S酮K30，藥用級，購自博愛新開源醫(yī)療科技集團股份有限公司；莧菜紅85，食品級，購自柔亞食品添加劑貿(mào)易有限公司；檸檬香精，食品級，廣州荷花香精香料有限公司。

1.2 主要儀器設(shè)備

電子天平（型號PL2002），購自梅特勒托利多公司；方錐混合機（型號HSD-5L），購自常州佳發(fā)制粒干燥設(shè)備有限公司；旋轉(zhuǎn)壓片機（型號ZP-5b），購自廣州晨雕機械設(shè)備有限公司；電子天平（型號JA 2003），購自上海上平儀器有限公司；生物安全柜（型號NU-425-400S），購自美國Nua ire；電熱恒溫培養(yǎng)箱，購自上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司；全自動立式電熱壓力整齊滅菌器，購自上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠；微量移液器，購自德國Epend o rf公司；渦旋混合器，購自德國IKA公司。

1.3 菌株

大腸桿菌8099、金黃色葡萄球菌ATCC 6538，購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

2 試驗方法

2.1 無磷環(huán)保型過硫酸氫鉀復合鹽泡騰片的制作方法

稱取550g過硫酸氫鉀復合鹽、15g氯化鈉、50g氨基磺酸、150g無水檸檬酸和35g乙二胺四乙酸二鈉在方錐混合機中預混，混合均勻后，再加入120g碳酸氫鈉、50g PVPK30、20g十二烷基苯磺酸鈉（LAS-80）、6g PEG 4000、3g檸檬香精和1g莧菜紅總混混合30min，得到混合均勻的粉末中間體。將以上所得粉末中間體轉(zhuǎn)移至旋轉(zhuǎn)壓片機，按照1.0g/片的片重規(guī)格進行壓片，篩粉，鋁箔袋包裝，即得本次試制的無磷環(huán)保型過硫酸氫鉀復合鹽泡騰片。

2.2 穩(wěn)定性試驗

本試驗試制樣品的穩(wěn)定性試驗根據(jù)2002年版《消毒技術(shù)規(guī)范》進行。將包裝后的過硫酸氫鉀復合鹽泡騰片置于54℃恒溫干燥箱中14d，并于放置前后取樣，對試制樣品的外觀性狀和有效氯含量進行觀察和測定，采取隨機取樣的方式抽取3組，檢測3次并取平均值，計算并分析有效氯的含量變化。

2.2 消毒試驗方法

將供試消毒劑分別進行200倍、400倍、800倍和1,600倍稀釋，以大腸桿菌8099和金黃色葡萄球菌ATCC 6538為指示菌，采用消毒劑定量試驗評價方法評價無磷環(huán)保型過硫酸氫鉀復合鹽泡騰片水溶液的殺菌效果[3]。

2.2.1 菌懸液的制備取出菌種進行復蘇，在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上劃線；接種后的培養(yǎng)基放在恒溫培養(yǎng)箱中，37℃培養(yǎng)20h。從復蘇的金黃色葡萄球菌ATCC 6538（第2代）及大腸桿菌8099（第3代）平皿上挑取單個典型菌落至PBS中，取部分菌懸液用核酸蛋白測定儀測定OD600值，將剩余菌懸液的OD600值調(diào)至0.135～0.145，按此比例調(diào)整剩余菌懸液，混合均勻后進行2倍稀釋，各菌液濃度約為107c fu/mL，備用。

2.2.2 中和劑的選擇[4]選擇實驗室已有0.5%的硫代硫酸鈉溶液作本試驗中和劑。

2.2.3 過硫酸氫鉀復合鹽泡騰片對微生物的定量殺滅試驗用無菌純化水將釋過硫酸氫鉀復合鹽泡騰片作200倍、400倍、800倍和1,600倍稀釋，作供試消毒劑。吸取0.5mL各菌液至4.5mL不同稀釋濃度的消毒劑中混合均勻后作用5min，計時結(jié)束后取菌藥作用液0.5mL至含4.5mL中和劑中的EP管混合均勻后作用10min，計時結(jié)束后進行菌落計數(shù)，同時設(shè)置陽性對照組和陰性對照組。當殺菌率達到99.9%以上時，可判定該稀釋倍數(shù)為消毒劑的有效殺菌濃度。按照下述公式計算殺菌率（Pt）。該試驗重復進行3次，以3次試驗殺菌率的平均值表示最終殺菌率。

殺菌率（Pt）=（N0-Nt）/N0×100%，其中N0=對照組的活菌數(shù)，Nt=實驗組的活菌數(shù)。

3 結(jié)果

3.1 樣品制備結(jié)果

采用上述制備方法，本試驗制得了一種表面光潔，具有檸檬香氣味的淺粉紅色泡騰片。

3.2 穩(wěn)定性試驗結(jié)果

過硫酸氫鉀復合鹽泡騰片在54℃恒溫條件下放置14d后，片子表面光潔平整、無碎片、無吸潮等現(xiàn)象發(fā)生，脆碎度和崩解時間均符合2020年版《中國藥典》片劑項下相關(guān)規(guī)定。3組樣品的有效氯含量檢測結(jié)果顯示，有效氯含量的下降率分別為1.5%、2.0%和1.6%，含量均未發(fā)生顯著變化，證明了鋁箔袋包裝下的無磷環(huán)保型過硫酸氫鉀復合鹽泡騰片是穩(wěn)定的。

3.3 菌懸液制備條件摸索結(jié)果

中和劑工作菌液：大腸桿菌8099調(diào)至OD600為0.14，再進行2倍稀釋時菌液濃度為107CFU/mL。

3.4 細菌定量試驗結(jié)果

過硫酸氫鉀復合鹽泡騰片對大腸桿菌8099及金黃色葡萄球菌ATCC 6538的定量試驗結(jié)果見表1。由表1可知，過硫酸氫鉀復合鹽泡騰片對大腸桿菌8099的有效殺菌濃度為800倍稀釋，對金黃色葡萄球菌ATCC 6538的有效殺菌濃度為800倍稀釋。

表1 過硫酸氫鉀復合鹽泡騰片對不同菌株的定量滅殺試驗結(jié)果

4 討論

目前市售過硫酸氫鉀復合鹽類消毒劑有兩種，粉劑和片劑，二者為同一類消毒劑，處方組成相似，均含磷酸鈉鹽。研究表明，水溶性正磷酸鹽能夠被植物和微生物等直接利用，是引起富營養(yǎng)化的主要原因之一[5]。本研究試制了一種無磷環(huán)保型過硫酸氫鉀復合鹽泡騰片，通過測定加速條件下有效氯含量來驗證過無磷環(huán)保型硫酸氫鉀復合鹽泡騰片的穩(wěn)定性。過硫酸氫鉀復合鹽泡騰片的殺菌原理主要是過硫酸氫鉀復合鹽的氧化能力，即過硫酸氫鉀可以氧化氯離子，產(chǎn)生次氯酸，氫離子和活性氧，氧化能力以有效氯含量表示。因此，在本研究中通過測定有效氯含量的穩(wěn)定性來證明過硫酸氫鉀復合鹽泡騰片的穩(wěn)定性。

本次研制的無磷環(huán)保型過硫酸氫鉀復合鹽泡騰片對常見的大腸桿菌8099和金黃色葡萄球菌ATCC 6538具有非常好的殺滅效果，在800倍稀釋濃度下5min可完全滅殺，證明這種無磷環(huán)保型過硫酸氫鉀復合鹽泡騰片具有很好的殺菌效果。

綜上所述，本研究研制的無磷環(huán)保型過硫酸氫鉀復合鹽泡騰片具有環(huán)保、穩(wěn)定、高效、廣譜的特點，可以廣泛應用于各種環(huán)境場所的環(huán)境消毒。█