李繼紅

（云南省紅河州石屏縣牛街鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)綜合服務(wù)中心 云南紅河 662209）

弓形蟲(chóng)病是一種分布較為廣泛，威脅較為嚴(yán)重的人畜共患疾病，幾乎任何品種的溫血性動(dòng)物都會(huì)受到弓形蟲(chóng)的侵染[1]。近年來(lái)，牛街鎮(zhèn)牛養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)得到了不同程度的發(fā)展，養(yǎng)殖規(guī)模不斷擴(kuò)大。很多農(nóng)民群眾不科學(xué)的養(yǎng)殖行為，使得養(yǎng)殖環(huán)境當(dāng)中存在大量的嚙齒類動(dòng)物和貓科類動(dòng)物。為了進(jìn)一步掌握牛弓形蟲(chóng)的感染情況，于2019、2020年，連續(xù)對(duì)該鄉(xiāng)鎮(zhèn)的6個(gè)養(yǎng)殖大戶和13個(gè)散養(yǎng)戶的293頭和303頭牛的血清進(jìn)行弓形蟲(chóng)抗體檢測(cè)，現(xiàn)將具體研究?jī)?nèi)容介紹如下：

1 試驗(yàn)材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料選取

本次研究過(guò)程中，牛弓形蟲(chóng)血清抗體檢測(cè)主要選擇使用牛弓形蟲(chóng)抗體IgG（Tox IgG）ELISA試劑盒（由上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)），該檢測(cè)試劑盒主要用于檢測(cè)血漿和血清當(dāng)中牛弓形蟲(chóng)的抗體含量。2019、2020年，連續(xù)兩年對(duì)該鄉(xiāng)鎮(zhèn)的6個(gè)養(yǎng)殖大戶和13個(gè)散養(yǎng)戶的293頭和303頭牛血清進(jìn)行弓形體抗體檢查。在血清采集過(guò)程中，由當(dāng)?shù)氐墨F醫(yī)人員采集牛新鮮血液3～5mL，按照常規(guī)方法血液凝固析出血清，放置在2,500r/min的離心機(jī)當(dāng)中，離心處理5min，取上層血清，-20℃保存等待檢測(cè)。

1.2 試驗(yàn)方法

在正式試驗(yàn)之前，選擇使用樣品稀釋液將待檢血清按照100倍液進(jìn)行全面的稀釋處理，并分別設(shè)置陰性對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組，陰性對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組的血清不做稀釋處理，濃縮洗滌液在使用之前應(yīng)該恢復(fù)到室溫條件，并使沉淀能夠全面溶解，然后使用蒸餾水或者去離子水進(jìn)行全面稀釋處理，稀釋倍數(shù)控制在20倍。正式試驗(yàn)之前將檢測(cè)試劑盒放置在室溫環(huán)境下，作用30min恢復(fù)到室溫條件，然后按照檢測(cè)試劑盒的要求進(jìn)行操作，作用一段時(shí)間之后用酶標(biāo)儀判定結(jié)果。在正常的試驗(yàn)條件之下，陰性對(duì)照≤0.20，陽(yáng)性對(duì)照≥0.50，臨界值=2.1×陰性對(duì)照均值。如果血清樣品當(dāng)中的抗體值大于臨界值表示為陽(yáng)性，小于等于臨界值為陰性。在整個(gè)試驗(yàn)操作過(guò)程中，工作人員一定要佩戴手套，穿戴相應(yīng)的防護(hù)服，嚴(yán)格執(zhí)行衛(wèi)生消毒制度，各個(gè)試驗(yàn)廢棄物一定要按照傳染物進(jìn)行無(wú)害化處理。因?yàn)檎麄€(gè)反應(yīng)體系的終止液往往具有很強(qiáng)的腐蝕性，應(yīng)該避免與皮膚直接接觸，如果不慎接觸終止液，應(yīng)該使用大量清水來(lái)清洗。在試驗(yàn)操作過(guò)程中濃縮洗滌液應(yīng)該在恢復(fù)室溫之后完全溶解的狀態(tài)下等待使用，用于檢測(cè)的血清樣品應(yīng)該保持新鮮，不能夠長(zhǎng)時(shí)間在空氣當(dāng)中暴露。在試驗(yàn)結(jié)果判定過(guò)程中，必須根據(jù)酶標(biāo)儀的讀數(shù)為基準(zhǔn)[2]，不同批號(hào)的試劑應(yīng)該分開(kāi)使用，不能夠混合使用。

2 結(jié)果

2019、2020年連續(xù)兩年間云南省牛街鎮(zhèn)牛弓形蟲(chóng)感染情況調(diào)查結(jié)果如表1所示，根據(jù)表1數(shù)據(jù)能夠看出2019、2020年調(diào)查的293頭牛和303頭牛血清當(dāng)中弓形蟲(chóng)陽(yáng)性血清有0份和0份，陽(yáng)性率分別為0%、0%，這主要與當(dāng)?shù)胤酪卟块T(mén)的努力密切相關(guān)。但由于周邊地區(qū)的養(yǎng)殖領(lǐng)域曾經(jīng)報(bào)告過(guò)該類傳染性疾病，隨著當(dāng)?shù)嘏ｐB(yǎng)殖規(guī)模不斷擴(kuò)大，外出引進(jìn)的頻率增加，外來(lái)疫病傳入的可能增大，在今后工作中仍然需要下大力氣加強(qiáng)對(duì)弓形蟲(chóng)的針對(duì)性防控。

表1 2019、2020年牛街鎮(zhèn)牛弓形蟲(chóng)感染情況調(diào)查結(jié)果

3 討論

最近幾年，石屏縣牛街鎮(zhèn)畜牧養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的發(fā)展得益于省級(jí)政府部門(mén)和地方政府部門(mén)的財(cái)政支持和政策幫扶。目前以牛羊養(yǎng)殖為主的畜牧養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)，初步形成養(yǎng)殖規(guī)模逐漸擴(kuò)大，很多養(yǎng)殖戶依托牛養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)，走上了發(fā)家致富的道路。養(yǎng)殖規(guī)模擴(kuò)大為養(yǎng)殖場(chǎng)帶來(lái)經(jīng)濟(jì)效益的同時(shí)，也面臨著較高的疫情防范風(fēng)險(xiǎn)。很多養(yǎng)殖戶在引種過(guò)程中存在諸多不科學(xué)之處，經(jīng)常到發(fā)生疫區(qū)的養(yǎng)殖場(chǎng)引種，或者從周邊的集貿(mào)市場(chǎng)購(gòu)買(mǎi)牛直接養(yǎng)殖，隱性感染階段的牛群，引入養(yǎng)殖場(chǎng)之后很容易加快新疫情的傳播蔓延。通過(guò)本次調(diào)查能夠發(fā)現(xiàn)石屏縣牛街鎮(zhèn)牛弓形蟲(chóng)的感染率為0%，沒(méi)有出現(xiàn)發(fā)病情況，但是由于養(yǎng)殖戶的引種頻率不斷加快，外來(lái)疫病的引入可能大大增強(qiáng)，需要我們繼續(xù)采取措施進(jìn)行針對(duì)性的防控。

弓形蟲(chóng)是造成牛出現(xiàn)無(wú)名高熱癥的主要病原之一，弓形體大多會(huì)寄生在牛的血細(xì)胞當(dāng)中，引發(fā)血細(xì)胞破裂，造成牛出現(xiàn)嚴(yán)重的貧血癥狀，生長(zhǎng)發(fā)育不良，體溫升高。通過(guò)連續(xù)兩年對(duì)牛街鎮(zhèn)的293頭牛和303頭牛的血清進(jìn)行弓形蟲(chóng)抗體檢測(cè)，能夠發(fā)現(xiàn)總共有0份和0份陽(yáng)性血清，陽(yáng)性率分別為0%和0%，雖然當(dāng)?shù)匚磮?bào)告一起弓形蟲(chóng)感染的病例，但這并不意味著該類疾病不會(huì)在該地區(qū)發(fā)生流行，隨著牛養(yǎng)殖規(guī)模的擴(kuò)大，引種頻率顯著增強(qiáng)，如果沒(méi)有執(zhí)行嚴(yán)格的檢疫檢驗(yàn)制度，很容易造成外來(lái)攜帶有該種病原的牛群引入本地區(qū)，加大了疫情發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)，所以仍需要采取措施進(jìn)行針對(duì)性的防控。在其他地區(qū)的流行病學(xué)調(diào)查過(guò)程中，弓形體的傳播流程大多與流浪貓等貓科類動(dòng)物的出入有密切聯(lián)系，另外土壤當(dāng)中弓形蟲(chóng)蟲(chóng)卵污染較為嚴(yán)重也是造成該種疾病發(fā)生流行的一個(gè)主要原因。因此在進(jìn)行牛弓形體病防控過(guò)程中，應(yīng)該嚴(yán)格控制和預(yù)防牛群活動(dòng)區(qū)域當(dāng)中的貓科類動(dòng)物和嚙齒類動(dòng)物的數(shù)量，避免貓科類動(dòng)物和牛群頻繁接觸，在牛舍當(dāng)中嚴(yán)禁養(yǎng)殖貓，禁止貓進(jìn)入到圈舍當(dāng)中，嚴(yán)禁飲用水或者飼料被貓的糞便直接污染或者間接污染。另外在牛養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)發(fā)展期間，還應(yīng)該加強(qiáng)對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)引種行為的有效監(jiān)督管理，要密切掌握本地區(qū)牛養(yǎng)殖現(xiàn)狀和具體的養(yǎng)殖規(guī)模，針對(duì)養(yǎng)殖戶的引種行為一定要進(jìn)行認(rèn)真細(xì)致的檢查和調(diào)查，掌握牛群的身體健康情況和牛的具體來(lái)源。對(duì)于違規(guī)引種和不科學(xué)引種的行為，應(yīng)該嚴(yán)格按照相關(guān)法律要求進(jìn)行嚴(yán)肅懲處，規(guī)范養(yǎng)殖戶的養(yǎng)殖行為。█