薛燕楠，張國(guó)福，信洪波，薛 雯，金 巖，夏曉明*

(1.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院，山東 泰安 271018；2.山東省農(nóng)藥檢定所，山東 濟(jì)南 250100)

櫻桃(Prunusavium)屬于薔薇科落葉灌木果樹(shù)，果實(shí)色澤亮麗，富含多種維生素，含鐵量居于水果之首，素來(lái)深受廣大消費(fèi)者喜愛(ài)。在中國(guó)，櫻桃的主要產(chǎn)地有遼寧、山東、浙江、河南、甘肅等地，種植地域廣[1]。根據(jù)中國(guó)園藝學(xué)會(huì)櫻桃分會(huì)統(tǒng)計(jì)，自2006年起，甜櫻桃的栽培面積由4萬(wàn)hm2增長(zhǎng)至18萬(wàn)hm2，平均每年增加1.4萬(wàn)hm2[2]。隨著櫻桃種植面積的不斷擴(kuò)大，櫻桃病害呈現(xiàn)逐年加重的趨勢(shì)，其中櫻桃褐斑病成為了櫻桃葉片的主要病害之一。櫻桃褐斑病是一種真菌性病害，一般在5～6月份發(fā)病，7～9月份發(fā)病最為嚴(yán)重，甚至造成全樹(shù)8～9月份二次開(kāi)花，嚴(yán)重影響樹(shù)勢(shì)和安全越冬[3]。櫻桃褐斑病在侵染初期葉表著生較小的紫色斑點(diǎn)，后擴(kuò)大為褐色圓形斑，發(fā)病中后期斑點(diǎn)融合，造成葉片穿孔和早落，導(dǎo)致光合作用下降，樹(shù)勢(shì)衰弱，繼而影響翌年的櫻桃產(chǎn)量[4]。

目前，田間生產(chǎn)中對(duì)真菌性作物病害的防治主要以化學(xué)防治為主，但我國(guó)尚沒(méi)有登記用來(lái)防治櫻桃褐斑病的農(nóng)藥品種，農(nóng)民用藥存在安全隱患[5]。山東省農(nóng)藥檢定所為解決這一問(wèn)題，組織開(kāi)展了10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑和80%代森錳鋅可濕性粉劑防治櫻桃褐斑病的室內(nèi)活性測(cè)定、安全性及田間藥效試驗(yàn)，并組織企業(yè)開(kāi)展聯(lián)合登記工作，以期為篩選防治櫻桃炭疽病的安全、有效的農(nóng)藥產(chǎn)品提供相關(guān)的防治技術(shù)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料 供試菌種：櫻桃褐斑病菌(Passaloracircumscissa)，采自山東泰安市郊區(qū)，采用常規(guī)方法分離。

供試植物品種：紅燈、美早、早大果3個(gè)品種進(jìn)行安全性試驗(yàn)，均在同一園，樹(shù)齡9年，試驗(yàn)區(qū)果樹(shù)生長(zhǎng)基本一致。

試驗(yàn)地點(diǎn)：山東省蓬萊市北溝鎮(zhèn)上朱潘村、河北省昌黎縣兩山鄉(xiāng)梁各莊村、陜西省楊凌示范區(qū)五泉鎮(zhèn)桶張村。

1.2 試驗(yàn)藥劑 97%苯醚甲環(huán)唑原藥；95%代森錳鋅原藥；98%多菌靈原藥；10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑；80%代森錳鋅可濕性粉劑。

將97%苯醚甲環(huán)唑原藥用丙酮配制成1×104mg/L苯醚甲環(huán)唑母液，備用，使用時(shí)用含有0.1%的吐溫80水溶液稀釋至合適濃度。將95%代森錳鋅原藥，以白炭黑作填料，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)用小型氣流粉碎機(jī)將代森錳鋅制成10%可濕性粉劑，其濕潤(rùn)劑含量5%，細(xì)度300目以上，備用。將98%多菌靈原藥用少量5N鹽酸溶解后，再用NaOH溶液中和，調(diào)節(jié)pH=5左右，最后加無(wú)菌水配制成1%多菌靈的鹽酸鹽水劑，備用。加工含有5%濕潤(rùn)劑的白碳黑可濕性粉劑，并配制1N NaCl溶液，作為助劑對(duì)照，備用。代森錳鋅和多菌靈以及助劑對(duì)照在使用時(shí)用無(wú)菌水稀釋至合適濃度。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 室內(nèi)活性試驗(yàn)方法 采用菌絲生長(zhǎng)速率法，測(cè)定3種殺菌劑對(duì)櫻桃褐斑病菌的抑制作用。在無(wú)菌操作條件下，根據(jù)試驗(yàn)處理將預(yù)先融化、滅菌的72mL PSA培養(yǎng)基定量加入無(wú)菌錐形瓶中，從低濃度到高濃度依次定量吸取配好的濃度為設(shè)計(jì)濃度10倍的各處理藥液8mL，分別加入上述錐形瓶中，充分搖勻。然后等量倒入4個(gè)直徑為9cm的培養(yǎng)皿中，制成相應(yīng)系列濃度的含藥平板。試驗(yàn)設(shè)添加不含藥劑的處理作空白對(duì)照，每處理4個(gè)重復(fù)。其中，苯醚甲環(huán)唑以最高濃度中含有丙酮的0.1%吐溫80水溶液作為對(duì)照，代森錳鋅和多菌靈以最高濃度中所含有的助劑的蒸餾水溶液作為對(duì)照。

將在PSA培養(yǎng)基上轉(zhuǎn)接活化后的櫻桃褐斑病菌，在無(wú)菌條件下用內(nèi)徑為0.5cm的滅菌打孔器從菌落邊緣切取菌柄，用接種器將菌餅接種于含藥平板中央，菌絲面朝下，蓋上皿蓋，26±1℃恒溫條件下培養(yǎng)7、14、21d，然后用十字交叉法量取菌落直徑。通過(guò)菌絲生長(zhǎng)抑制概率值和藥劑濃度對(duì)數(shù)值之間的線性回歸分析， 求出各藥劑對(duì)菌株的有效抑制中濃度(EC50值)、置信區(qū)間及相關(guān)系數(shù)(r)。

1.3.2 安全性試驗(yàn)方法 試驗(yàn)設(shè)10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑1 000、500、250倍液3個(gè)劑量，80%代森錳鋅可濕性粉劑600、300、150倍液3個(gè)劑量。試驗(yàn)共計(jì)6個(gè)處理，每處理重復(fù)4次，每2株樹(shù)為一個(gè)小區(qū)，隨機(jī)區(qū)組排列。

試驗(yàn)共施藥2次。于櫻桃采摘后和雨季前分別對(duì)紅燈、美早、早大果3個(gè)品種進(jìn)行1次施藥。全樹(shù)均勻噴霧施藥，以葉片、枝干均勻著藥，稍有藥滴下淌為度。

試驗(yàn)共調(diào)查2次。分別于第1次施藥后1、3、5、7、10d和第2次施藥后1、3、5、7、10、14、21d，定性觀察對(duì)櫻桃葉片和嫩稍的影響。

1.3.3 田間藥效試驗(yàn)方法 按照(表1)中的試驗(yàn)藥液設(shè)計(jì)濃度，使用機(jī)動(dòng)噴霧器對(duì)全樹(shù)噴霧，葉片正反兩面均勻噴霧，施藥后以葉片濕潤(rùn)、稍有藥滴下滴為宜。每4株樹(shù)為一小區(qū)，隨機(jī)區(qū)組排列，重復(fù)4次。于櫻桃褐斑病發(fā)病前(6月中旬)進(jìn)行第1次施藥，然后于7月中旬和8月中旬再各施藥1次，總共施藥3次。

表1 試驗(yàn)處理設(shè)計(jì)

于第3次藥后14d調(diào)查病害發(fā)生情況。每小區(qū)調(diào)查2株果樹(shù)，每株分東、南、西、北、中各掛牌1個(gè)大小基本一致的枝條(≥10葉片)，調(diào)查全部葉片，根據(jù)葉片上病斑面積占整個(gè)葉面積的百分率分級(jí)，調(diào)查記錄各級(jí)病葉數(shù)及總?cè)~數(shù)。

葉片分級(jí)方法：

0級(jí)：無(wú)病斑；

1級(jí)：病斑面積占整片葉面積的<5%；

3級(jí)：病斑面積占整片葉片面積6%～10%；

5級(jí)：病斑面積占整片葉片面積11%～20%；

7級(jí)：病斑面積占整片葉片面積21%～40%；

9級(jí)：病斑面積占整片葉片面積>41%或葉片脫落。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析 按以下公式計(jì)算抑菌率(%)：

采用Microsoft Excel 2003統(tǒng)計(jì)校正抑菌率，然后采用DPS數(shù)據(jù)處理軟件分別求出試驗(yàn)藥劑的毒力回歸方程和EC50、EC90以及相關(guān)系數(shù)。

按下列公式計(jì)算安全系數(shù)：

按下列公式計(jì)算防治效果：

2 結(jié)果與分析

2.1 室內(nèi)活性試驗(yàn)結(jié)果 苯醚甲環(huán)唑和代森錳鋅對(duì)櫻桃褐斑病菌具有較好的室內(nèi)活性(表2)。7d調(diào)查結(jié)果表明，苯醚甲環(huán)唑和代森錳鋅對(duì)櫻桃褐斑病菌的EC50分別為0.000 12mg/L和0.79mg/L，EC90分別為0.59mg/L和5.83mg/L。14d調(diào)查結(jié)果表明，苯醚甲環(huán)唑和代森錳鋅對(duì)櫻桃褐斑病菌的EC50分別為0.054 36mg/L和1.32mg/L，EC90分別為0.33mg/L和12.71mg/L。21d調(diào)查結(jié)果表明，苯醚甲環(huán)唑和代森錳鋅對(duì)櫻桃褐斑病菌的EC50分別為0.019 65mg/L和6.41mg/L，EC90分別為0.15mg/L和44.06mg/L。但3次調(diào)查結(jié)果均表明，對(duì)照藥劑多菌靈在供試濃度范圍內(nèi)對(duì)櫻桃褐斑病菌抑制作用不明顯，且與濃度變化無(wú)相關(guān)性。

表2 苯醚甲環(huán)唑及代森錳鋅對(duì)櫻桃褐斑病菌的毒力測(cè)定結(jié)果

續(xù)表

2.2 安全性試驗(yàn)結(jié)果 10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑對(duì)櫻桃樹(shù)安全性試驗(yàn)結(jié)果表明(表3)，在對(duì)第1次施藥后1、3、5、7、10d，第2次施藥后1、3、5、7、10、14、21d的定性觀察下，10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑對(duì)紅燈、美早和早大果3個(gè)品種的葉片和嫩稍均無(wú)變色、壞死、萎蔫、畸形、生長(zhǎng)延緩、銹斑等藥害癥狀。綜合分析，10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑在稀釋1 000、500、250倍液3個(gè)高劑量試驗(yàn)濃度下噴霧對(duì)櫻桃樹(shù)安全，安全系數(shù)為400%。

80%代森錳鋅可濕性粉劑對(duì)櫻桃樹(shù)安全性試驗(yàn)結(jié)果表明(表3)，在600、300、150倍液3個(gè)試驗(yàn)濃度劑量下，在第1次施藥后1、3、5、7、10d；第2次施藥后1、3、5、7、10、14 、21d對(duì)葉片和嫩稍的定性觀察中均發(fā)現(xiàn)，80%代森錳鋅可濕性粉劑150倍液，藥后3d在3個(gè)品種葉片邊緣處均產(chǎn)生褐色銹斑現(xiàn)象，但10d后大部分葉片均能逐步恢復(fù)，僅個(gè)別葉片葉緣呈現(xiàn)焦枯。其他2個(gè)濃度處理未發(fā)現(xiàn)對(duì)紅燈、美早和早大果3個(gè)品種有變色、壞死、萎蔫、銹斑等明顯藥害癥狀表現(xiàn)。綜合分析認(rèn)為：80%代森錳鋅可濕性粉劑在稀釋600、300、150倍液3個(gè)高劑量試驗(yàn)濃度下噴霧后，600、300倍液2個(gè)濃度處理對(duì)櫻桃樹(shù)安全。盡管150倍液在藥后3d時(shí)，葉片呈現(xiàn)輕微藥害癥狀，但在10d后大部分葉片均能逐步恢復(fù)。安全系數(shù)為200%。

2.3 田間藥效試驗(yàn)結(jié)果分析 田間藥效試驗(yàn)結(jié)果表明(表3～4)，試驗(yàn)藥劑10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑和80%代森錳鋅可濕性粉劑在櫻桃褐斑病發(fā)病前進(jìn)行全樹(shù)均勻噴霧處理，對(duì)櫻桃褐斑病表現(xiàn)出較好的防治效果。且隨著用藥量和用藥次數(shù)的增加，防效呈現(xiàn)升高趨勢(shì)，表現(xiàn)出較好的保護(hù)和一定的治療效果。

表3 10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑防治櫻桃褐斑病田間藥效試驗(yàn)結(jié)果

續(xù)表

第3次藥后14d，10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑防治櫻桃褐斑病的防效在64.77%～92.47%之間；80%代森錳鋅可濕性粉劑防治櫻桃褐斑病的防效在62.62%～90.61%之間。2種試驗(yàn)藥劑的防效均高于對(duì)照藥劑或與其相當(dāng)。綜合3地田間藥效試驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑和80%代森錳鋅可濕性粉劑是防治櫻桃褐斑病的高效藥劑，能有效的防治櫻桃褐斑病。

表4 80%代森錳鋅可濕性粉劑防治櫻桃褐斑病田間藥效試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)論與討論

苯醚甲環(huán)唑是三唑類脫甲基抑制劑，具有良好的內(nèi)吸性，兼具保護(hù)和治療作用，在殺菌劑中安全性比較高，防病譜廣，廣泛應(yīng)用于果樹(shù)、蔬菜等作物，可以有效防治子囊菌門、半知菌門和擔(dān)子菌門引起的病害。

代森錳鋅屬硫代氨基甲酸酯類高效、低毒、廣譜的保護(hù)性殺菌劑。在殺菌劑中安全性比較高，防病譜廣，廣泛應(yīng)用于果樹(shù)、蔬菜和糧食等作物，可以有效防止卵菌、子囊菌門、半知菌門和擔(dān)子菌門引起的病害，且不易產(chǎn)生抗性[6]。

本研究室內(nèi)活性測(cè)定結(jié)果表明，苯醚甲環(huán)唑和代森錳鋅對(duì)櫻桃褐斑病菌具有較高的室內(nèi)活性。安全性試驗(yàn)表明，10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑對(duì)櫻桃樹(shù)安全性很高，安全系數(shù)為400%。80%代森錳鋅可濕性粉劑對(duì)櫻桃樹(shù)的安全性也較高，除最高劑量150倍液在藥后3d觀察到葉片邊緣部位產(chǎn)生褐色銹斑，到10d后逐步恢復(fù)外，其他兩個(gè)濃度處理沒(méi)有觀察到變色、壞死、萎蔫、畸形、生長(zhǎng)延緩、銹斑等藥害癥狀。安全系數(shù)為200%。10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑的安全性要>80%代森錳鋅可濕性粉劑。田間在應(yīng)用80%代森錳鋅可濕性粉劑防治櫻桃褐斑病時(shí)，不得超量使用。

田間藥效試驗(yàn)結(jié)果表明，10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑和80%代森錳鋅可濕性粉劑在試驗(yàn)劑量下防效均可達(dá)到80%左右，且持效性較好。綜合試驗(yàn)結(jié)果表明，10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑和80%代森錳鋅可濕性粉劑均可以做為田間防治櫻桃褐斑病的藥劑。于櫻桃褐斑病發(fā)病前或發(fā)病初期，采用10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑1 000～2 500倍液或80%代森錳鋅可濕性粉劑600～1 200倍液對(duì)櫻桃全樹(shù)均勻噴霧，間隔20～30d施藥1次，連續(xù)施藥3次，可有效的防治櫻桃褐斑病。同時(shí)，注意交替用藥，延緩病菌抗藥性的產(chǎn)生和發(fā)展。

櫻桃被譽(yù)為早春第一果[7]，采摘完畢后隨著氣溫升高病蟲(chóng)害隨之而來(lái)，果農(nóng)常常忽視摘后對(duì)果園的管理，使得病蟲(chóng)害逐年積累，樹(shù)勢(shì)衰弱，櫻桃產(chǎn)量不佳。因此，應(yīng)當(dāng)大力開(kāi)展防治櫻桃病蟲(chóng)害的藥劑篩選工作，強(qiáng)化對(duì)櫻桃病蟲(chóng)害防治技術(shù)的宣傳力度。