陳榮華 馮文斌 周清 李潔 張雪睿 蘭炯采

譜細(xì)胞是鑒定紅細(xì)胞不規(guī)則抗體特異性的試劑細(xì)胞。如果患者體內(nèi)存在不規(guī)則抗體，此時(shí)輸入含有該不規(guī)則抗體對(duì)應(yīng)抗原的紅細(xì)胞，可能引起溶血性輸血反應(yīng)（HTR）或新生兒胎兒溶血?。℉DFN）[1]。精準(zhǔn)鑒定不規(guī)則抗體的特異性是確保臨床輸血安全有效的方法和防治HDFN的前提之一。

國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上采用的譜細(xì)胞分為國(guó)產(chǎn)和進(jìn)口兩大類(lèi)，我們對(duì)其抗原覆蓋率、抗原陰陽(yáng)比例及具有劑量效應(yīng)抗原的純合子比例等進(jìn)行對(duì)比分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

材料與方法

1 一般材料 國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上采用的20個(gè)批次國(guó)產(chǎn)譜細(xì)胞（G1～G20）和11個(gè)批次進(jìn)口譜細(xì)胞（J1～J11）的抗原格局表。

2 研究方法

2.1 抗原鑒定方法：譜細(xì)胞中各抗原的鑒定方法參考文獻(xiàn)[2]操作。

2.2 統(tǒng)計(jì)譜細(xì)胞中各抗原的覆蓋面及覆蓋率：對(duì)20個(gè)批次國(guó)產(chǎn)譜細(xì)胞和11個(gè)批次進(jìn)口譜細(xì)胞抗原覆蓋面及覆蓋率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，分析譜細(xì)胞在不規(guī)則抗體鑒定中可能出現(xiàn)的漏檢情況。

2.3 統(tǒng)計(jì)譜細(xì)胞各抗原的陰陽(yáng)性比例：對(duì)20個(gè)批次國(guó)產(chǎn)譜細(xì)胞和11個(gè)批次進(jìn)口譜細(xì)胞抗原陰性與陽(yáng)性比例進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，利用四格表資料的Fisher確切概率法進(jìn)行概率計(jì)算分析，計(jì)算其在不規(guī)則抗體鑒定中的可靠性。

2.4 統(tǒng)計(jì)譜細(xì)胞中具有劑量效應(yīng)抗原的純合子比例：對(duì)20個(gè)批次國(guó)產(chǎn)譜細(xì)胞和11個(gè)批次進(jìn)口譜細(xì)胞抗原純合子比例進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，分析譜細(xì)胞在不規(guī)則抗體鑒定中可能的漏檢情況。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，抗原可靠性分析采用四格表資料的Fisher確切概率法進(jìn)行概率計(jì)算。國(guó)內(nèi)外抗原可靠性對(duì)比采用Pearson卡方檢驗(yàn)處理。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 譜細(xì)胞中各抗原的覆蓋率 覆蓋率指覆蓋該抗原的譜細(xì)胞批次占國(guó)產(chǎn)或進(jìn)口譜細(xì)胞總批次的百分比。覆蓋率100%即表示該抗原在國(guó)內(nèi)或進(jìn)口譜細(xì)胞的所有批次中均有覆蓋。國(guó)產(chǎn)譜細(xì)胞20個(gè)批次共覆蓋29種抗原，各抗原平均覆蓋率為76.00%±34.3%，進(jìn)口譜細(xì)胞11個(gè)批次共覆蓋28種抗原，各抗原平均覆蓋率為83.00%±21.9%。比較兩組譜細(xì)胞，進(jìn)口譜細(xì)胞缺乏抗原：Mur、Dia、Dib、Doa、Dob、Yta、Ytb，國(guó)產(chǎn)譜細(xì)胞缺乏抗原：Cw、V、f、Jsa、Jsb、Xga，見(jiàn)表1。

表1 譜細(xì)胞中各抗原的覆蓋率（%）

2 譜細(xì)胞中各抗原的陰性與陽(yáng)性比例 當(dāng)抗原在譜細(xì)胞中陰性和陽(yáng)性的比例為1∶9、9∶1、1∶15、15∶1、1∶10、10∶1時(shí)，P＞0.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，鑒定抗體特異性不可靠，判定該抗原為本批次譜細(xì)胞的不可靠抗原[2]。統(tǒng)計(jì)20個(gè)批次國(guó)產(chǎn)譜細(xì)胞和11個(gè)批次進(jìn)口譜細(xì)胞抗原的陰陽(yáng)性比例，對(duì)照表2按公式：

表2 抗體鑒定概率水平四格表

計(jì)算概率值（P）[3]， 結(jié)果見(jiàn)表3。根據(jù)P值統(tǒng)計(jì)各批次譜細(xì)胞的不可靠抗原比例：國(guó)產(chǎn)譜細(xì)胞20個(gè)批次不可靠抗原比例為49.16%±7.78%，進(jìn)口譜細(xì)胞11個(gè)批次不可靠抗原比例為27.61%±5.48%，見(jiàn)表4。

表3 譜細(xì)胞抗原陰性、陽(yáng)性不同分布的概率

表4 各批次譜細(xì)胞不可靠抗原比例

3 劑量效應(yīng)抗原中純合子的比例 統(tǒng)計(jì)20個(gè)批次國(guó)產(chǎn)譜細(xì)胞和11個(gè)批次進(jìn)口譜細(xì)胞中具有劑量效應(yīng)的抗原純合子比例。具有劑量效應(yīng)的抗原有D、C、E、c、e、M、N、S、s、Fya、Fyb、Jka、Jkb[1]。因大部分譜細(xì)胞未標(biāo)識(shí)D抗原是否純合子，故只統(tǒng)計(jì)其余12種抗原的純合子比例。國(guó)產(chǎn)譜細(xì)胞中12種純合子抗原占比70.50%±4.62%，進(jìn)口譜細(xì)胞中12種純合子占比為73.15%±4.59%。見(jiàn)表5。

討 論

1 抗原鑒定方法 紅細(xì)胞血型指紅細(xì)胞膜上的抗原，目前為止共發(fā)現(xiàn)有43個(gè)血型系統(tǒng)即抗原系統(tǒng)[4]。因供受者血型抗原不同的輸血可能會(huì)產(chǎn)生溶血性輸血反應(yīng)，所以臨床輸血一般要求供受者血型抗原相同即同型輸血，所以輸血前試驗(yàn)要求鑒定供受者的血型抗原。紅細(xì)胞血型抗原系統(tǒng)雖然多達(dá)43個(gè)，除ABO血型系統(tǒng)外只有Rh、Kidd、MNSs、Duffy、Diego、Xg、Kell、Lewis、P及Lutheran等血型抗原系統(tǒng)有臨床意義[5]，所以國(guó)內(nèi)外譜細(xì)胞都覆蓋這些抗原系統(tǒng)。鑒定血型抗原一般采用血清學(xué)技術(shù)，用己知特異性的商品抗血清與被檢者紅細(xì)胞做凝集試驗(yàn)?？寡逵蠭gM和IgG兩種，前者作鹽水介質(zhì)試驗(yàn)，后者作抗人球蛋白試驗(yàn)、聚凝胺或酶介質(zhì)試驗(yàn)。

2 文獻(xiàn)對(duì)譜細(xì)胞的質(zhì)量要求 不規(guī)則抗體是指人血液中不符合Landsteiner法則的紅細(xì)胞抗體[1]。在檢測(cè)到不規(guī)則抗體后，應(yīng)鑒定其特異性，并評(píng)估其臨床意義。具有臨床意義的抗體是指能引起胎兒和新生兒溶血?。℉DFN）、溶血性輸血反應(yīng)（HTR）和顯著降低輸入紅細(xì)胞壽命的抗體[1]。選擇不帶不規(guī)則抗體對(duì)應(yīng)抗原的紅細(xì)胞輸血才安全有效。

譜細(xì)胞是鑒定不規(guī)則抗體特異性的試劑細(xì)胞，由已知不同血型系統(tǒng)抗原表型的O型紅細(xì)胞組合而成，通常8～16個(gè)供者的O型紅細(xì)胞為一套[5]。本次收集的國(guó)產(chǎn)譜細(xì)胞均為每套10個(gè)供者紅細(xì)胞，進(jìn)口譜細(xì)胞則有每套16和11個(gè)供者紅細(xì)胞兩種。譜細(xì)胞必須能夠檢出具有臨床意義的抗體和當(dāng)?shù)鼐哂械哪承┖币?jiàn)抗體，并且要保證在一組譜細(xì)胞中的抗原結(jié)構(gòu)合理[1，2]。全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程規(guī)定譜細(xì)胞應(yīng)包括Rh、Kidd、MNSs、Duffy、Diego、Xg、Kell、Lewis、P及Lutheran等血型系統(tǒng)的主要抗原并注明Rh血型的基因型[5]。英國(guó)國(guó)家衛(wèi)生服務(wù)血液和移植中心（NHSBT）要求譜細(xì)胞能排除所有具有臨床意義的抗體、應(yīng)使用純合子紅細(xì)胞排除有劑量效應(yīng)的抗體和只有當(dāng)被檢樣本與一套譜細(xì)胞中至少兩個(gè)表達(dá)某抗原的紅細(xì)胞反應(yīng)及兩個(gè)缺乏該抗原的紅細(xì)胞無(wú)反應(yīng)時(shí)才能指定特異性[6]。

3 譜細(xì)胞的抗原覆蓋面分析 人類(lèi)紅細(xì)胞抗原具民族多態(tài)性和地區(qū)多態(tài)性，抗體鑒定時(shí)必須選擇符合本地區(qū)血型抗原及不規(guī)則抗體分布特點(diǎn)的譜細(xì)胞[7]。白種人和中國(guó)人MNS血型系統(tǒng)和Kidd血型系統(tǒng)頻率有差異，中國(guó)人大多數(shù)不表達(dá)S抗原而表達(dá)s抗原，其S+s-基因型頻率只有0.000 9左右，而S-s-型頻率甚至接近零[7]。Jka和Jkb頻率比較接近，漢族人群中Jkb＞Jka[8-9]。一般認(rèn)為中國(guó)漢族人群Kell血型系統(tǒng)K抗原頻率幾乎為零，有文獻(xiàn)顯示K抗原頻率為約0.000 4，而k抗原頻率約為0.999 6，故很少會(huì)產(chǎn)生抗-K抗體[10-11]。中國(guó)漢族人群中曾有幾例鑒定出抗-K抗體，均疑似細(xì)菌性感染后免疫所致[7]。也有文獻(xiàn)報(bào)道成都地區(qū)332位漢族獻(xiàn)血者Kell血型均為K-k+，而白種人K-k+基因頻率為0.910 0左右、K+k+基因頻率為0.088 0左右[12]。Lewis血型系統(tǒng)，白種人Le（a+b-）表型為0.220 0，中國(guó)人群Le（a+b-）表型罕見(jiàn)[7]。Duffy血型系統(tǒng)，F(xiàn)ya在白種人中的頻率為0.660 0，中國(guó)人中是0.990 0[7]。本次收集的國(guó)產(chǎn)譜細(xì)胞中有10%覆蓋了Lua和Lub抗原，5%覆蓋了Kpa和Kpb抗原。一般Lu抗體不具有臨床意義，抗-Lua與紅細(xì)胞凝集的最適溫度一般在37℃以下，抗-Lub的最佳反應(yīng)溫度為20℃[7]。有報(bào)道稱(chēng)Lu抗體通常僅與輕度的遲發(fā)性輸血反應(yīng)（HTR）有關(guān)，也不會(huì)引起嚴(yán)重的HDFN[1]。而Kpa和Kpb抗原雖可引起HTR，但Kpa抗原在亞洲人中極其罕見(jiàn)，Kpb則在所有人群中高頻率表達(dá)[13]，這兩類(lèi)抗原可考慮在譜細(xì)胞中剔除。本次收集的國(guó)產(chǎn)譜細(xì)胞中Fya抗原覆蓋率為95%，中國(guó)人群中Fya陽(yáng)性者占99.7%，陰性者僅為0.3%，但時(shí)有抗Fya引起嚴(yán)重輸血反應(yīng)的報(bào)道[14]，可在譜細(xì)胞中保留。譜細(xì)胞的以上血型系統(tǒng)抗原可根據(jù)本地區(qū)的抗原分布特點(diǎn)給予調(diào)整。本地區(qū)頻率大于3%的抗原皆應(yīng)包含在譜細(xì)胞內(nèi)[7]。進(jìn)口譜細(xì)胞未覆蓋Dia抗原和Mur抗原，這兩種抗原在中國(guó)人群中的頻率分別為5%和7%，中國(guó)香港和臺(tái)灣地區(qū)曾報(bào)道，抗-Mur是除抗-A和抗-B之外最常見(jiàn)的血型抗體[2]?？笵ia抗體可引起嚴(yán)重的H D F N[1]，而抗-M u r也可以導(dǎo)致嚴(yán)重的H T R和HDFN[15-16]。在本次收集的國(guó)產(chǎn)譜細(xì)胞中覆蓋率只有85%和80%，特別是在中國(guó)香港和臺(tái)灣地區(qū)使用的譜細(xì)胞應(yīng)全覆蓋。

4 譜細(xì)胞的抗原格局分析 每套譜細(xì)胞每一種血型抗原應(yīng)保持一定的陰性和陽(yáng)性比例，以便從統(tǒng)計(jì)學(xué)上保證抗體特異性[2]。全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程規(guī)定，抗體鑒定概率達(dá)到95%（即P值＜0.05）時(shí)可報(bào)告抗體特異性[5]。使用譜細(xì)胞鑒定抗體時(shí)應(yīng)該使用“陰性結(jié)果排除陽(yáng)性抗原對(duì)應(yīng)抗體”的方法，“陰性排陽(yáng)性”本質(zhì)上是不完全歸納推理，所得結(jié)論是否可靠還需要通過(guò)假設(shè)檢驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證，以判斷所得結(jié)論是隨機(jī)事件還是必然事件。假設(shè)檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)推理的基本思路是用小概率原理來(lái)對(duì)假設(shè)進(jìn)行判斷，推斷的基礎(chǔ)是得出這一結(jié)論的概率值（P）。根據(jù)這一原理，如P＞0.05可認(rèn)為試驗(yàn)結(jié)果為偶然事件引起[3]。表3中，當(dāng)陰性和陽(yáng)性抗原的比例為1∶9、9∶1；1∶15、15∶1；1∶10、10∶1時(shí)的P值分別為0.101、0.101、0.062、0.062、0.091、0.091，判定為該比例的抗原不能準(zhǔn)確鑒定不規(guī)則抗體的特異性。本文采用四格表Fisher確切概率法來(lái)計(jì)算概率值，血型抗原陰陽(yáng)性比例與概率值的關(guān)系見(jiàn)表3。由此表計(jì)算得出本次收集的國(guó)產(chǎn)譜細(xì)胞不可靠抗原比例為49.16%±7.78%，而進(jìn)口譜細(xì)胞的不可靠抗原比例僅為27.61%±5.48%，兩組數(shù)據(jù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。因進(jìn)口譜細(xì)胞中45.5%為16個(gè)供者細(xì)胞，54.5%為11個(gè)供者細(xì)胞，而國(guó)產(chǎn)譜細(xì)胞均為10個(gè)供者細(xì)胞，故進(jìn)口譜細(xì)胞的不可靠抗原比例明顯低于國(guó)產(chǎn)譜細(xì)胞。國(guó)產(chǎn)譜細(xì)胞應(yīng)通過(guò)增加供者數(shù)或調(diào)整抗原格局，降低不可靠抗原比例，提高不規(guī)則抗體鑒定的準(zhǔn)確度。

5 譜細(xì)胞具有劑量效應(yīng)抗原的純合子細(xì)胞分析 劑量效應(yīng)是指抗體反應(yīng)強(qiáng)度的差異取決于目標(biāo)紅細(xì)胞上存在的目標(biāo)抗原的數(shù)量。而純合子細(xì)胞的抗原數(shù)量多于雜合子細(xì)胞的抗原數(shù)量，故純合子細(xì)胞的反應(yīng)強(qiáng)度要強(qiáng)于雜合子細(xì)胞。如果譜細(xì)胞中具有劑量效應(yīng)的抗原為雜合子，則容易漏檢相對(duì)應(yīng)的低效價(jià)抗體[17]。AABB手冊(cè)中要求有劑量效應(yīng)的抗體使用純合子紅細(xì)胞檢測(cè)，以避免雜合子漏檢低效價(jià)不規(guī)則抗體。劑量效應(yīng)現(xiàn)象并不是在所有血型系統(tǒng)中都會(huì)出現(xiàn)，劑量效應(yīng)往往表現(xiàn)于共顯性基因的抗原[18]。具有劑量效應(yīng)的血型抗原主要有：D、C、E、c、e、M、N、 S、s、Fya、Fyb、Jka和Jkb抗原[1]。本次收集的國(guó)產(chǎn)譜細(xì)胞中以上抗原純合子比例為70.50%±4.62%，進(jìn)口譜細(xì)胞為73.15%±4.59%，兩者相差不大。除了劑量效應(yīng)Rh單倍型也會(huì)影響D抗原的表達(dá)水平，即“Ceppellini效應(yīng)”，應(yīng)引起注意。

6 對(duì)提高國(guó)內(nèi)譜細(xì)胞質(zhì)量的建議 綜上所述，使用國(guó)產(chǎn)譜細(xì)胞鑒定不規(guī)則抗體時(shí)，應(yīng)充分考慮是否適合本民族和本地區(qū)、譜細(xì)胞抗原格局的科學(xué)性、劑量效應(yīng)抗原漏檢低效價(jià)抗體情況等。要精準(zhǔn)鑒定不規(guī)則抗體，除了譜細(xì)胞的質(zhì)量，與實(shí)驗(yàn)技術(shù)也有很大的關(guān)系，不規(guī)則抗體鑒定時(shí)要進(jìn)行規(guī)范化操作，并盡量對(duì)有劑量效應(yīng)的抗原使用純合子細(xì)胞。每套譜細(xì)胞都不可能完美無(wú)缺，建議有條件的實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)備兩套不同格局的譜細(xì)胞。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突