張潔 祝頌松 姜楠

口腔疾病研究國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室國家口腔疾病臨床醫(yī)學(xué)研究中心四川大學(xué)華西口腔醫(yī)院正頜及關(guān)節(jié)外科，成都610041

鈦及鈦合金因?yàn)槠鋬?yōu)良的性能和生物相容性而被普遍應(yīng)用于牙科領(lǐng)域[1]。然而，其表面特性常導(dǎo)致早期骨結(jié)合效果較差，并導(dǎo)致植入失敗[2]。因此研究人員探索了各種改變鈦表面結(jié)構(gòu)/化學(xué)的方法，以期改善其早期骨結(jié)合效果。目前植入體的表面改性策略主要集中在2個(gè)方面：化學(xué)改性和微幾何結(jié)構(gòu)的改性。其中最為常見的改性方法有：植入體表面涂層、酸蝕或者噴砂粗化處理、陽極氧化或微弧氧化處理以及生物蛋白修飾等。在各種表面改性方法中，磷酸酸蝕因能將對(duì)骨再生十分有利的磷元素引入植入體表面受到了學(xué)者們的廣泛關(guān)注。研究[3-4]證實(shí)，磷酸酸蝕對(duì)加速植入體的骨結(jié)合有著十分確切的生物學(xué)作用。微幾何結(jié)構(gòu)的改性也對(duì)植入體的生物活性有著十分重要的影響。從仿生學(xué)的角度出發(fā)，因?yàn)樘烊还潜闶俏⒓{米共存的結(jié)構(gòu)，因此這種結(jié)構(gòu)應(yīng)該對(duì)植入體表面的骨再生更為有利。因此，近年來越來越多的研究[5-6]致力于構(gòu)建植入體表面的仿生形貌，并且大都取得了令人滿意的效果。但遺憾的是，利用磷酸酸蝕的方法在植入體表面構(gòu)建梯度仿生形貌至今少有文獻(xiàn)報(bào)道，其相關(guān)的生物學(xué)作用、生物學(xué)機(jī)制更是值得探究。

本研究利用特殊壓強(qiáng)下堿熱磷酸反應(yīng)法在純鈦植入體表面制備微納米共存的具備晶體相“磷”的仿生結(jié)構(gòu)，成功地將對(duì)成骨有利的磷元素引入植入體表面，提高了植入體的表面能，最為重要的是該表面改性具有微納米共存的仿生結(jié)構(gòu)，初步探究了該表面改性涂層對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）增殖、黏附以及骨向分化潛能的影響，進(jìn)而探究其對(duì)植入體骨結(jié)合的作用。

1 材料和方法

1.1 鈦植入體表面處理及分析

1.1.1 表面涂層制備 將一塊鈦板（純度99.99%，中國寶雞鈦工業(yè)有限公司）加工成直徑5 mm、厚1 mm的圓片狀（用于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)）和直徑1.5 mm、長(zhǎng)10 mm的柱狀（用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)）。所有鈦樣品分別使用800、1 200和2 000粒度的SiC砂紙拋光成鏡面，隨后分別在丙酮、乙醇和蒸餾水中超聲蕩洗30 min，在真空冷凍干燥機(jī)中干燥。

將材料分成2組。第1組材料表面不做任何處理（未處理鈦，cp-Ti），直接備用。第2組材料進(jìn)行仿生磷酸化表面改性處理，利用特殊壓強(qiáng)下堿熱磷酸反應(yīng)法在純鈦表面制備出微納米共存的磷酸化涂層，即鈦磷鈦（TiP-Ti）。方法為：將樣品置于2%HPO4和14%H2O2配制的磷酸水溶液中（共200 mL），然后放入襯有特氟龍膜（teflon）的高壓釜，在0.15 MPa、120℃下進(jìn)行水熱反應(yīng)24 h，獲得磷酸化改性形貌。室溫下，2組鈦片經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化清洗、鈍化，等離子滅菌備用。

1.1.2 鈦片的檢測(cè) 1）表面形貌觀察：使用掃描電子顯微鏡（scanning electron microscope，SEM）觀察所有樣品的微觀結(jié)構(gòu)。2）表面元素分析：X射線衍射（X-ray diffraction，XRD）分析涂層晶相結(jié)構(gòu)。3）涂層厚度及粗糙度：使用原子力顯微鏡（atomic force microscope，AFM）觀察涂層表面厚度及結(jié)構(gòu)。4）表面能檢測(cè)：通過靜態(tài)水接觸角實(shí)驗(yàn)檢測(cè)植入材料表面的表面能，使用接觸角測(cè)角儀（TL101，Biolin Scientific AB）分析涂層表面自由能和濕潤性。5）涂層與鈦基底的結(jié)合強(qiáng)度：通過自動(dòng)劃痕儀檢測(cè)不同植入材料表面涂層的結(jié)合強(qiáng)度。

1.2 體外實(shí)驗(yàn)

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) 按照四川大學(xué)口腔疾病國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物研究委員會(huì)建立的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行細(xì)胞分離和培養(yǎng)。取1周齡雄性Sprague-Dawley大鼠的股骨收集BMSCs，將2～4代的細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 細(xì)胞形態(tài)與黏附 細(xì)胞孵育2 h后，PBS洗3次，隨后用2.5%戊二醛固定。部分樣本用乙醇溶液梯度脫水（20%，40%，60%，80%，90%和100%），噴金，SEM觀察細(xì)胞早期黏附形態(tài)。其余樣本的細(xì)胞用0.2%Triton X-100透膜15 min后，利用羅丹明-鬼筆環(huán)肽標(biāo)記F-肌動(dòng)蛋白（F-actin）以顯示細(xì)胞骨架形態(tài)，室溫孵育30 min，含4',6-二脒基-2-苯基吲哚（4',6-diamidino-2-phenylindole，DAPI）抗熒光萃滅劑封片。采用SEM和共聚焦掃描電子顯微鏡（confocal laser scanning microscope，CLSM）觀察細(xì)胞結(jié)構(gòu)和形態(tài)。

1.2.3 細(xì)胞增殖能力 在24孔培養(yǎng)板中培養(yǎng)滅菌的鈦片，培養(yǎng)1、3、5、7、9 d后，使用甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）檢測(cè)細(xì)胞活力。

1.2.4 細(xì)胞分化 堿性磷酸酶（alkaline phospha‐tase，ALP）活性測(cè)定用于檢測(cè)不同樣品上的細(xì)胞分化情況。每孔接種5×104個(gè)細(xì)胞，隨后在Ti樣品上孵育1、3、7 d。4%多聚甲醛固定，ALP試劑盒（上海碧云天生物技術(shù)有限公司）染色并測(cè)量其在405 nm處的吸光度值，以確定ALP活性。

1.2.5 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)分析（quantita‐tive real-time polymerase chain reaction analysis，qRT-PCR）分別收集與Ti片孵育24、48 h的細(xì)胞用于qRT-PCR以評(píng)估BMSCs細(xì)胞黏附及成骨相關(guān)基因表達(dá)。檢測(cè)整合素β1（integrinβ1）、黏著斑蛋白（Vinculin）、Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子-2（Runt-re‐lated transcription factor-2，Runx-2）、Ⅰ型 膠 原（collagen typeⅠ，Col-1）、骨橋蛋白（osteopntin，OPN）和骨鈣素（osteocalcin，OCN）相關(guān)mRNA的表達(dá)。GAPDH作為對(duì)照。

1.3 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)

1.3.1 植入手術(shù) 將12只雌性SD大鼠（3個(gè)月大，體重210～230 g）隨機(jī)分為A、B組。在其雙側(cè)脛骨的近干骺端分別植入cp-Ti與TiP-Ti，縫合，術(shù)后3 d給予動(dòng)物肌肉注射抗生素和鎮(zhèn)痛藥。

1.3.2 micro-CT檢測(cè) 術(shù)后12周，處死A組大鼠（n=6），取雙側(cè)股骨、脛骨。將樣本置于micro-CT系統(tǒng)檢測(cè)管內(nèi)，通過高分辨率μ-CT掃描儀系統(tǒng)（μ-CT 50，Scanco Medical公司，瑞士）進(jìn)行分析。VOI被定義為植入物周圍的骨部分，選取種植體周圍250μm范圍的環(huán)形區(qū)域?yàn)楦信d趣區(qū)域。檢驗(yàn)參數(shù)包括：1）骨體積分?jǐn)?shù)（BV/TV）；2）骨與植入物的接觸百分比（骨結(jié)合百分比，%OI）；3）骨小梁數(shù)量（Tb.N）；4）平均骨小梁間隙（Tb.Sp）。

1.3.3 組織學(xué)分析 術(shù)后12周，處死B組大鼠（n=6），取雙側(cè)股骨、脛骨進(jìn)行未脫鈣處理。使用Lei‐ca DM-RBE顯微鏡（Leica公司，德國）在生長(zhǎng)板下方約1 mm的切片上進(jìn)行組織學(xué)評(píng)價(jià)。分析內(nèi)容如下。1）骨面積比：整個(gè)組織區(qū)域（從植入物表面延伸250μm的環(huán)形區(qū)域）內(nèi)成熟骨的百分比。2）骨骼與植入物之間的接觸：與植入物界面直接接觸的礦化骨骼的線性百分比。

1.3.4 生物力學(xué)測(cè)試 對(duì)μ-CT掃描的樣品（n=6）進(jìn)行生物力學(xué)測(cè)試，以確定極限剪切強(qiáng)度和最大推出力。使用生物力學(xué)測(cè)試設(shè)備（BSC30，銀博科學(xué)設(shè)備有限公司）以1 mm·min-1的速度檢測(cè)極限剪切強(qiáng)度（N·mm-2）和最大推出力（N）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 16.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。所有數(shù)值以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差的形式表示，數(shù)據(jù)分析采用單因素方差分析及Bonferroni檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 材料表征

2.1.1 表面形貌 SEM（圖1）顯示：cp-Ti組表面相對(duì)光滑，呈淺凹坑狀；TiP-Ti組表面呈草樣結(jié)構(gòu)，其中短纖維束隨機(jī)排列形成多孔結(jié)構(gòu)。

圖1 2組表面形貌 SEMFig 1 The surface morphology of 2 groups SEM

2.1.2 表面厚度及表面粗糙度 掃描區(qū)域?yàn)?.0μm×5.0μm時(shí)，各組鈦片的AFM結(jié)果見圖2、表1。cp-Ti組鈦片表面平坦，光滑；TiP-Ti組鈦片表面呈現(xiàn)明顯的類山峰狀，粗糙度為58.65 nm，在納米尺寸上規(guī)律排列，提示樣品表面為納米級(jí)形態(tài)。結(jié)合圖1，TiP-Ti表面呈現(xiàn)為納米級(jí)的3D空間結(jié)構(gòu)與微米級(jí)孔隙共存的仿生結(jié)構(gòu)。

表1 2組種植體表面粗糙度指標(biāo)比較Tab 1 The comparation of surface roughness of 2 groups

2.1.3 表面元素分析 采用XRD對(duì)植入材料表面的物相組成進(jìn)行測(cè)量，結(jié)果見圖3。TiP-Ti組表面探測(cè)到典型的Ti特征峰，同時(shí)具有新的衍射峰Ti(HPO4)2·0.5 H2O和Ti3O5峰2種物相，證實(shí)磷元素成功摻入TiP-Ti表面。

圖3 TiP-Ti組XRD分析Fig 3 The results of XRD of TiP-Ti group

2.1.4 表面能檢測(cè) 靜態(tài)水接觸角實(shí)驗(yàn)結(jié)果（圖4）表明，cp-Ti和TiP-Ti組表面靜態(tài)水接觸角（con‐tact angle，CA）分別為79°±5.3°和7°±2.6°（P＜0.05）。Ti P-Ti表面CA值較低，表明其具有較好的潤濕性，這可能有利于蛋白質(zhì)黏附。

圖4 2組CA實(shí)驗(yàn)Fig 4 CAexperiment of 2 groups

2.1.5 涂層與鈦基底結(jié)合強(qiáng)度檢測(cè) TiP-Ti組涂層與鈦基底結(jié)合強(qiáng)度的檢測(cè)結(jié)果見圖5。定量分析結(jié)果用涂層首次開裂（Lc1）和完全剝脫（Lc2）時(shí)的力的值表示，結(jié)果顯示TiP-Ti組與鈦基底結(jié)合強(qiáng)度良好，這有利于涂層表面改性在體內(nèi)發(fā)揮生物學(xué)作用。

圖5 TiP-Ti組劃痕實(shí)驗(yàn)后材料表面SEM及定量分析Fig 5 SEM and quantitative analysis of the surface of the material after scratch experiment of Ti P-Ti group

2.2 體外實(shí)驗(yàn)

2.2.1 細(xì)胞黏附能力 孵育2 h后，BMSCs在種植體表面上的黏附結(jié)果見圖6。cp-Ti組可見少量分散的呈球狀細(xì)胞，且有絲足結(jié)構(gòu)。TiP-Ti組可見BMSCs分布更廣，細(xì)胞呈現(xiàn)橢圓形，細(xì)胞伸展較好，并伴有更清晰的細(xì)胞骨架（圖6A），且有明顯連接的偽足結(jié)構(gòu)。黏附相關(guān)mRNA表達(dá)結(jié)果（圖6B）顯示，在TiP-Ti組材料表面，細(xì)胞黏附相關(guān)的蛋白表達(dá)量相對(duì)較多。這表明，BMSCs在TiPTi表面具有更好的黏附。

圖6 2組材料表面BMSCs的黏附情況Fig 6 Adhesion of BMSCs on the surface of 2 groups

2.2.2 細(xì)胞增殖 MTT結(jié)果（圖7）表明，與cp-Ti組相比，TiP-Ti組細(xì)胞活力增加（除第1天外，P＜0.05）。這表明，BMSCs在TiP-Ti表面具有更好的增殖能力。

圖7 2組MTT結(jié)果Fig 7 MTT assay of 2 groups

2.2.3 細(xì)胞分化 ALP活性測(cè)定結(jié)果（圖8）顯示，TiP-Ti組細(xì)胞ALP活性高于cp-Ti組（P＜0.05）。qRT-PCR檢測(cè)（圖9）顯示，TiP-Ti組Runx-2、Col-1、OPN、OCN mRNA表達(dá)水平均高于cp-Ti組（P＜0.05）。這表明，BMSCs在TiP-Ti表面表現(xiàn)出更好的成骨向分化。

圖8 2組ALP檢測(cè)結(jié)果Fig 8 The ALP results of 2 groups

圖9 2組BMSCs成骨向分化相關(guān)基因的相對(duì)表達(dá)情況Fig 9 mRNA expression levels of Col-1,Runx-2,OPN,and OCN,detected by qRT-PCR of 2 groups

2.3 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)

術(shù)后12周，大鼠創(chuàng)面均已實(shí)現(xiàn)愈合，Ti植入物均在骨內(nèi)保持良好位置。

2.3.1 Micro-CT及組織學(xué)分析 Micro-CT檢測(cè)結(jié)果（圖10）表明，與cp-Ti組相比，TiP-Ti組BV/TV、%OI、Tb.N增加（P＜0.05），Tb.sp降低（P＜0.05）。形態(tài)計(jì)量學(xué)（圖11）表明，TiP-Ti組骨面積比、骨骼與植入物之間的接觸均高于cp-Ti組，表現(xiàn)出骨愈合效果。這表明，TiP-Ti誘導(dǎo)了與宿主組織的更牢固的界面結(jié)合。

圖10 2組micro-CT檢測(cè)結(jié)果Fig 10 The results of micro-CT of 2 groups

圖11 2組組織學(xué)分析Fig 11 Histological analysis of 2 groups

2.3.2 生物力學(xué)檢測(cè) 生物力學(xué)測(cè)試結(jié)果（表2）表明，TiP-Ti組種植體顯示出更強(qiáng)的機(jī)械穩(wěn)定性（P＜0.05）。TiP-Ti組剪切強(qiáng)度超過20 N·mm-2，是cp-Ti的2倍多；最大推出力為182.7 N，是cp-Ti的5倍多。

表2 2組生物力學(xué)測(cè)試結(jié)果比較Tab 2 Comparison of biomechanical test results of 2 groups

3 討論

3.1 微納米共存的仿生結(jié)構(gòu)形成機(jī)制及特征

本研究利用特殊壓強(qiáng)下堿熱磷酸反應(yīng)法（0.15 MPa，120℃）成功地在純鈦植入體表面制備了微納米共存的具備晶體相“磷”的表面仿生結(jié)構(gòu)（TiP-Ti）。有部分學(xué)者探究了種植體表面3D結(jié)構(gòu)改性的方法，試圖改善種植體骨結(jié)合能力。Sul[7]通過電化學(xué)微弧氧化，成功地將P陰離子摻入到了TiO2涂層（孔徑1.3～1.5μm）中，并且報(bào)道了該結(jié)構(gòu)具有更強(qiáng)的骨結(jié)合效果，但是未提到體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的細(xì)節(jié)。Park等[8-9]采用堿熱反應(yīng)處理鈦氧化物表面，獲得了具有微米級(jí)的粗糙形貌，該形貌具有較強(qiáng)的MC3T4-E1細(xì)胞附著力、活力和成骨細(xì)胞基因表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)0.15 MPa、120℃特殊溫度壓強(qiáng)下處理獲得了具有晶體相“磷”的微/納米級(jí)共存的仿生混合涂層。XRD結(jié)果顯示，TiP-Ti表面化學(xué)元素主要以Ti(HPO4)2·0.5H2O/Ti3O5晶體相存在。制備該涂層過程中，采用了較低濃度的H3PO4及較高濃度的H2O2，因此溶解的Ti4+與更豐富的H2O2反應(yīng)形成穩(wěn)定的Ti2O3，與TiO2進(jìn)一步反應(yīng)形成Ti3O5[10]，Ti3O5與磷酸根或磷酸氫根離子之間的進(jìn)一步相互作用形成Ti(HPO4)2·0.5H2O/Ti3O5化合物[11]。這也意味著摻入的P元素呈現(xiàn)高度結(jié)晶態(tài)。

SEM觀察表明，TiP-Ti涂層表面形態(tài)呈規(guī)律排列的微米結(jié)構(gòu)，其中短纖維束隨機(jī)排列形成多孔結(jié)構(gòu)。AFM觀察到的規(guī)律排列納米級(jí)結(jié)構(gòu)，可以證實(shí)該涂層為納米級(jí)的3D空間結(jié)構(gòu)與微米級(jí)孔隙共存的仿生結(jié)構(gòu)。生物材料的表面潤濕性在蛋白質(zhì)吸附中起著重要作用，進(jìn)而對(duì)細(xì)胞的黏附和增殖產(chǎn)生顯著影響[12]。通過靜態(tài)水接觸角實(shí)驗(yàn)來檢測(cè)植入材料表面的表面能，結(jié)果表明，TiP-Ti表面CA值較低，表明其具有較好的潤濕性，這可能有利于蛋白的黏附。表面劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，涂層首次開裂和完全剝脫時(shí)的力分別為18.5 N和25.8 N，這與文獻(xiàn)[13]報(bào)道的涂層改性的表面結(jié)合強(qiáng)度結(jié)果相符，證實(shí)本研究涂層改性與鈦基底結(jié)合強(qiáng)度較好，這也為該植入體表面改性技術(shù)將來的應(yīng)用打下了基礎(chǔ)。

3.2 微納米共存的仿生結(jié)構(gòu)對(duì)BMSCs生物學(xué)行為的影響

本研究結(jié)果表明，TiP-Ti表面BMSCs的黏附、增殖與分化高于cp-Ti。在TiP-Ti表面的細(xì)胞表現(xiàn)出更明顯連接的偽足，這與其較高的F-actin表達(dá)一致。F-actin免疫熒光顯示，黏附在TiP-Ti上的細(xì)胞具有更強(qiáng)的熒光強(qiáng)度，顯示出更清晰的細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)（圖6A）。細(xì)胞黏附情況與潤濕性檢測(cè)結(jié)果一致（圖4），即TiP-Ti＞cp-Ti，證明了材料表面形態(tài)和潤濕性會(huì)直接影響到細(xì)胞黏附情況[14-16]。另外，qRT-PCR檢測(cè)黏附相關(guān)的mRNA結(jié)果證實(shí)，TiP-Ti表面的細(xì)胞整合素β1和Vinculin表達(dá)較強(qiáng)。

細(xì)胞在鈦片表面培養(yǎng)1、3、5、7、9 d，TiPTi組細(xì)胞的增殖率明顯高于cp-Ti組（P＜0.05），這與細(xì)胞在TiP-Ti表面具有良好的黏附形態(tài)一致。

間充質(zhì)干細(xì)胞沿成骨細(xì)胞譜系的分化是植入物骨結(jié)合的關(guān)鍵[17]，且該過程受植入物材料表征的影響[9]。磷改性的Ti植入體可以促進(jìn)BMSCs的分化[9,18]。研究[19-20]顯示，與無定形狀態(tài)的磷酸鹽相比，結(jié)晶態(tài)磷酸鹽更有利于BMSCs的分化和骨沉積。然而到目前為止，尚未有研究比較過BM‐SCs在由Ti、Ti氧化物和Ti磷酸鹽組成的材料表面上的分化情況。由于植入物表面黏附的細(xì)胞通過激活的相關(guān)局部信號(hào)從而調(diào)控植入體周圍的破骨細(xì)胞的活動(dòng)和骨沉積，因此植入體的表面形貌對(duì)BMSCs的成骨向分化也有一定影響[21]。ALP活性測(cè)定結(jié)果顯示，TiP-Ti組ALP活性顯著高于cp-Ti組（P＜0.05）。mRNA表達(dá)水平結(jié)果顯示，與cp-Ti組相比，TiP-Ti組中Col-1和Runx-2的表達(dá)水平顯著上調(diào)，證實(shí)TiP-Ti對(duì)成骨早期階段有較強(qiáng)的促進(jìn)作用，這與早期的ALP分析、CLSM觀察結(jié)果相符。另一方面，OPN和OCN的mRNA表達(dá)水平也顯示，TiP-Ti組表現(xiàn)出較好的促進(jìn)細(xì)胞成骨向分化能力。

3.3 微納米共存的仿生結(jié)構(gòu)對(duì)骨結(jié)合的影響

體外和體內(nèi)研究均顯示，TiP-Ti在細(xì)胞增殖、黏附、分化以及促進(jìn)植入物骨結(jié)合方面具有較佳的性能。這可能是由植入物表面化學(xué)作用（摻有結(jié)晶TiP的Ti氧化物）、微/納米級(jí)共存的仿生表面形態(tài)以及表面良好親水性的綜合作用所致。另外，在松質(zhì)骨中存在微米級(jí)的孔隙不僅提供了血液循環(huán)和營養(yǎng)供給的途徑，且與新生骨之間形成機(jī)械鎖嵌結(jié)構(gòu)，有助于增強(qiáng)生物力學(xué)穩(wěn)定性[22]。多孔排列結(jié)構(gòu)可以在一定程度上促進(jìn)細(xì)胞黏附[23]。研究還證實(shí)，微米/納米級(jí)共存結(jié)構(gòu)可以迅速激活局部免疫反應(yīng)，刺激細(xì)胞跨膜蛋白的黏附和細(xì)胞的早期黏附[8,24]，并促進(jìn)羥磷灰石的沉積和成骨細(xì)胞的增殖[25]。

綜上，本研究在Ti植入物表面制備了具有晶體相“磷”的微/納米級(jí)共存的仿生混合涂層，以增強(qiáng)其骨結(jié)合性能。此外，具有微/納米級(jí)共存的TiP-Ti在體外和體內(nèi)均表現(xiàn)出優(yōu)良的促成骨性能。結(jié)果表明，本研究中生產(chǎn)的雜化涂層的表面化學(xué)組成及表面形貌均對(duì)細(xì)胞生物學(xué)行為具有明顯的影響，繼而影響植入物的骨結(jié)合及生物力學(xué)穩(wěn)定性，是一種具有應(yīng)用前景的植入體表面改性。

利益沖突聲明：作者聲明本文無利益沖突。