劉 律 李曉斌 馬 艷 楊 昊 張文杰 魯 豪 衛(wèi)鑫嵐 高俊潔 歐陽(yáng)文 楊開(kāi)倫*

(1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，新疆肉乳用草食動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，烏魯木齊 830052；2.新疆伊犁哈薩克自治州昭蘇縣種馬場(chǎng)，昭蘇 835000)

運(yùn)動(dòng)馬比賽成績(jī)優(yōu)劣依賴于馬匹多種器官機(jī)能和功能的協(xié)調(diào)配合及高效運(yùn)行，運(yùn)動(dòng)系統(tǒng)在馬匹完成高強(qiáng)度訓(xùn)練和競(jìng)賽中具有重要作用[1]。馬匹骨骼肌的能量貯備和供能效率對(duì)速度賽馬具有重要意義[2]。胍基乙酸(guanidineacetic acid，GAA)又稱為N-咪基甘氨酸(N-amidinoglycine)，在動(dòng)物體內(nèi)由甘氨酸和L-精氨酸合成，甲基化后形成肌酸(creatine，Cr)[3]。GAA可作為肌酸激酶(creatine kinase，CK)和補(bǔ)充磷酸肌酸(phosphocreatine，PCr)的底物，提高肌肉中磷酸肌酸貯備量及轉(zhuǎn)化為ATP的效率，保持肌肉高強(qiáng)度劇烈運(yùn)動(dòng)[4]；可通過(guò)節(jié)約精氨酸來(lái)促進(jìn)蛋白質(zhì)和一氧化氮(NO)的合成，進(jìn)而提高肌肉發(fā)達(dá)能力，舒張血管[5]；可通過(guò)激活一些抗氧化酶的活性和增加總抗氧化能力來(lái)提高細(xì)胞抗氧化水平[6]。Ostojic等[7]研究發(fā)現(xiàn)年輕個(gè)體中補(bǔ)充1.2～4.8 g/d GAA 6周后，可以提高志愿者手握力、肌肉耐力，進(jìn)而提高運(yùn)動(dòng)能力。有研究表明，飼糧中添加38 g/d的GAA，飼喂38 d后可提高速步馬的運(yùn)動(dòng)成績(jī),提高賽后血漿中過(guò)氧化氫酶、超氧化物歧化酶活性和總抗氧化能力[8]。Ale等[9]在研究GAA對(duì)肉雞能量代謝的影響時(shí)發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加1.2 g/kg的GAA，飼喂35 d后可以促進(jìn)肌肉的能量代謝，而且影響肌肉中肌酸總量、磷酸肌酸及ATP的含量，從而提高能量利用率。伊犁馬是我國(guó)自主育成的馬品種，主要分布于新疆伊犁地區(qū)，具有良好的運(yùn)動(dòng)性能，在2019中國(guó)“絲綢之路杯”比賽中，3 600和8 000 m速度賽冠軍均為伊犁馬，展現(xiàn)出超凡的速度和耐力。但伊犁馬目前存在激烈運(yùn)動(dòng)競(jìng)賽后易疲乏、恢復(fù)慢等問(wèn)題，嚴(yán)重制約了伊犁馬優(yōu)異運(yùn)動(dòng)性能的發(fā)揮。因此，本試驗(yàn)選用速度賽用伊犁馬為研究對(duì)象，探究飼糧中添加不同劑量的GAA對(duì)伊犁馬2 000 m速度賽成績(jī)、運(yùn)動(dòng)性能、糖代謝以及抗氧化能力的影響，為GAA在運(yùn)動(dòng)馬飼糧中的應(yīng)用提供科學(xué)參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)時(shí)間及地點(diǎn)

本試驗(yàn)于2020年5月17日至2020年7月2日在新疆維吾爾自治區(qū)伊犁哈薩克自治州昭蘇種馬場(chǎng)進(jìn)行。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及飼糧組成

表1 試驗(yàn)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of the experimental diet (DM basis) %

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)馬匹單廄飼養(yǎng)管理，自由飲水。補(bǔ)喂的GAA與精料補(bǔ)充料分為2份裝入封口袋，每日分2次飼喂，分別在08:00和20:00；青干草每日分3次添喂，分別在07:30、13:30和19:30。飼喂時(shí)先粗后精，先采食粗飼料1 kg，再補(bǔ)給精料補(bǔ)充料，待精料補(bǔ)充料采食完畢后，繼續(xù)添喂粗飼料。每天按時(shí)打掃馬廄，清除糞便和墊草，并更換為干燥柔軟的墊草。

1.4 訓(xùn)練方案及場(chǎng)地

試驗(yàn)馬匹每天進(jìn)行1次速度訓(xùn)練，馬匹訓(xùn)練時(shí)間安排在11:00—13:00或者17:30—19:30。首先進(jìn)行熱身訓(xùn)練，騎手騎乘試驗(yàn)馬先在草道上慢步10 min，隨即進(jìn)入沙道，進(jìn)行10 min快步訓(xùn)練，然后15 min慢跳訓(xùn)練，最后停止訓(xùn)練，牽遛5～10 min，直至馬匹呼吸平穩(wěn)。訓(xùn)練場(chǎng)地為新疆昭蘇種馬場(chǎng)伊犁馬測(cè)試調(diào)訓(xùn)中心，賽道由橢圓形沙道和草道組成。內(nèi)部沙道由細(xì)沙構(gòu)成，深度40 cm，底部為土基，道寬21 m，周長(zhǎng)為800 m；外部草道由天然的牧草形成，寬20 m，周長(zhǎng)為1 000 m。

1.5 樣品采集及指標(biāo)測(cè)定

1.5.1 平均速度測(cè)定

在試驗(yàn)第0天(正試期開(kāi)始前)和試驗(yàn)第47天在新疆昭蘇種馬場(chǎng)伊犁馬測(cè)試調(diào)訓(xùn)中心進(jìn)行2 000 m速度賽，用秒表記錄每匹馬的比賽用時(shí)，用以下公式計(jì)算平均速度、平均每千米耗時(shí)、平均耗時(shí)減少以及成績(jī)提高幅度。

平均速度(m/s)=2 000(m)/比賽用時(shí)(s)；
平均每千米耗時(shí)(s)=試驗(yàn)
第47天比賽用時(shí)(s)/2；
平均耗時(shí)減少(s)=試驗(yàn)第0天比賽用時(shí)(s)-
試驗(yàn)第47天比賽用時(shí)(s)；
成績(jī)提高幅度(%)=[平均耗時(shí)減少(s)/
試驗(yàn)第0天比賽用時(shí)(s)]×100。

1.5.2 心率和呼吸頻率測(cè)定

在試驗(yàn)第47天進(jìn)行2 000 m速度賽，用脈搏儀記錄每匹馬賽前2 h(備好鞍前)、賽后即刻以及賽后2 h的心率，同時(shí)測(cè)定呼吸頻率。

1.5.3 血漿生化指標(biāo)測(cè)定

于試驗(yàn)第47天進(jìn)行2 000 m速度賽的賽前2 h、賽后即刻、賽后2 h使用5 mL肝素鈉抗凝管和4 mL氟化鈉抗凝管于馬匹頸靜脈采集血液各1管，以3 500 r/min離心10 min，收集血漿，分裝，-20 ℃冷凍保存。

血漿送至北京華英生物技術(shù)研究所測(cè)定血漿生化指標(biāo)。胰島素(INS)、胰高血糖素(Gc)含量采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)法測(cè)定；葡萄糖(GLU)、乳酸(LD)、丙二醛(MDA)含量，肌酸激酶(CK)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化酶(GSH-Px)活性及總抗氧化能力(T-AOC)采用比色法測(cè)定。

1.5.4 尿液肌酸代謝物含量測(cè)定

于試驗(yàn)第47天，實(shí)時(shí)跟蹤監(jiān)測(cè)馬匹賽后狀態(tài)，使用自制移動(dòng)收尿裝置，收集試驗(yàn)馬匹賽后尿樣，將尿液充分搖勻后，收集樣品50 mL存入凍存管，-20 ℃冷凍保存。

馬匹血漿及尿液中GAA、肌酸、肌酐含量在新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料科學(xué)實(shí)驗(yàn)室利用高效液相色譜法測(cè)定[12]。取待檢測(cè)血漿樣本200 μL置于EP管中，加入400 μL乙腈，渦旋混勻，靜置10 min，12 000 r/min離心10 min，取100 μL上清用200 μL磷酸溶液(2 mmol/L)稀釋，渦旋混勻，取20 μL進(jìn)樣，進(jìn)行高效液相色譜分析。處理后的樣品經(jīng)IC YS-50弱酸性陽(yáng)離子交換柱分離，柱溫為30 ℃，流速為1.0 mL/min，用紫外檢測(cè)器于210 nm波長(zhǎng)處進(jìn)行檢測(cè)。

1.6 數(shù)據(jù)處理與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用Excel 2010進(jìn)行初步整理，SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件的ANOVA程序進(jìn)行單因素方差分析，差異顯著則用Duncan氏法進(jìn)行多重比較，采用正交多項(xiàng)式對(duì)比，檢驗(yàn)血漿和尿液中肌酸代謝物、糖代謝及抗氧化指標(biāo)變化的線性和二次效應(yīng)。結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”(mean±SD)表示，以0.05≤P<0.10作為有顯著趨勢(shì)，P<0.05為差異顯著水平，P<0.01為差異極顯著水平。

2 結(jié) 果

2.1 補(bǔ)喂GAA對(duì)伊犁馬運(yùn)動(dòng)性能的影響

2.1.1 補(bǔ)喂GAA對(duì)伊犁馬2 000 m速度賽成績(jī)的影響

結(jié)果見(jiàn)表2，與CON組相比，各試驗(yàn)組試驗(yàn)初始和試驗(yàn)第47天時(shí)2 000 m速度賽平均速度、平均每千米耗時(shí)均無(wú)顯著差異(P>0.05)；與試驗(yàn)初始相比，試驗(yàn)第47天時(shí)，CON組、試驗(yàn)組2 000 m速度賽的平均速度均有所提高，成績(jī)提高幅度呈現(xiàn)二次顯著性變化，其中25 GAA組、50 GAA組以及75 GAA組成績(jī)提高幅度分別為5.23%、6.68%、2.70%，各試驗(yàn)組均顯著高于CON組(P<0.05)。

表2 補(bǔ)喂GAA對(duì)伊犁馬2 000 m速度賽成績(jī)的影響Table 2 Effects of supplementary feeding GAA on performance of 2 000 m speed race of Yili horses (n=5)

2.1.2 補(bǔ)喂GAA對(duì)伊犁馬2 000 m速度賽賽前、賽后即刻及賽后呼吸心率的影響

結(jié)果見(jiàn)表3，各組馬匹賽前2 h生理狀態(tài)穩(wěn)定，呼吸和心率差異均不顯著(P>0.05)。與CON組相比，各試驗(yàn)組馬匹賽后即刻呼吸、心率差異均不顯著(P>0.05)；賽后2 h時(shí)，各組馬匹呼吸心率恢復(fù)到正常水平，各組間差異不顯著(P>0.05)。

表3 補(bǔ)喂GAA對(duì)伊犁馬2 000 m速度賽賽前、賽后即刻及賽后呼吸心率的影響Table 3 Effects of supplementary feeding GAA on respiratory heart rate before, immediately and after 2 000 m speed race of Yili horses (n=5)

2.2 補(bǔ)喂GAA對(duì)伊犁馬賽前、賽后即刻及賽后肌酸代謝物含量的影響

2.2.1 補(bǔ)喂GAA對(duì)伊犁馬賽前、賽后即刻及賽后血漿肌酸代謝物含量的影響

結(jié)果見(jiàn)表4，各試驗(yàn)組賽前2 h血漿GAA含量與CON組相比均無(wú)顯著差異(P>0.05)；50 GAA組賽后即刻血漿GAA含量顯著高于CON組(P<0.05)；75 GAA組賽后2 h血漿GAA含量顯著低于CON組(P<0.05)；各試驗(yàn)組賽后2 h血漿肌酸含量與CON組相比，均無(wú)顯著差異(P>0.05)；25 GAA組賽前2 h血漿肌酸含量顯著低于CON組(P<0.05)；50 GAA組賽后即刻血漿肌酸含量顯著高于CON組(P<0.05)。與CON組相比，各試驗(yàn)組賽前2 h、賽后2 h血漿肌酐含量均無(wú)顯著差異(P>0.05)；50 GAA組賽后即刻血漿肌酐含量顯著高于CON組(P<0.05)。賽前2 h和賽后即刻肌酸激酶活性在總體、線性和二次效應(yīng)上均呈現(xiàn)顯著性變化，75 GAA組賽前2 h、賽后2 h的血漿肌酸激酶活性最高，極顯著高于25 GAA組(P<0.01)；50 GAA組、75 GAA組賽后即刻各試驗(yàn)組血漿肌酸激酶活性極顯著高于CON組(P<0.01)，同時(shí)50 GAA組極顯著高于75 GAA組(P<0.01)。

表4 補(bǔ)喂GAA對(duì)伊犁馬2 000 m速度賽賽前、賽后即刻及賽后血漿肌酸代謝物含量的影響Table 4 Effects of supplementary feeding GAA on plasma creatine metabolites content before, immediately and after 2 000 m speed race of Yili horses (n=5)

2.2.2 補(bǔ)喂GAA對(duì)伊犁馬賽后尿液肌酸代謝物排出量的影響

結(jié)果見(jiàn)表5，GAA、肌酸和肌酐排出量在總體、線性和二次效應(yīng)上均呈現(xiàn)極顯著性變化，25 GAA組、75 GAA組賽后尿的GAA排出量均極顯著高于CON組(P<0.01)；25 GAA組、50 GAA組賽后尿的肌酸排出量均極顯著高于CON組(P<0.01)；各試驗(yàn)組賽后尿的肌酐排出量均極顯著高于CON組(P<0.01)。

表5 補(bǔ)喂GAA對(duì)伊犁馬2 000 m速度賽賽后尿液肌酸代謝物排出量的影響Table 5 Effects of supplementary feeding GAA on urinary creatine metabolite excretion after 2 000 m speed race of Yili horses (n=5)

2.3 補(bǔ)喂GAA對(duì)伊犁馬賽前、賽后即刻及賽后糖代謝指標(biāo)的影響

結(jié)果見(jiàn)表6，賽后即刻、賽后2 h血漿胰高血糖素含量在總體和線性效應(yīng)上呈現(xiàn)極顯著性變化，75 GAA組賽后即刻和賽后2 h的胰高血糖素含量極顯著低于CON組(P<0.01)，50 GAA組賽后即刻和賽后2 h的胰高血糖素含量極顯著低于CON組(P<0.01)；賽前2h、賽后即刻和賽后2 h血漿胰島素含量在總體和線性效應(yīng)上呈現(xiàn)極顯著性變化，與CON組相比，各試驗(yàn)組賽前2 h、賽后即刻和賽后2 h的胰島素含量均極顯著高于CON組(P<0.01)；賽后即刻、賽后2 h血漿葡萄糖含量在總體和線性效應(yīng)上呈現(xiàn)極顯著性變化，各試驗(yàn)組賽前2 h葡萄糖含量均顯著高于CON組(P<0.05)，賽后即刻和賽后2 h葡萄糖含量均極顯著高于CON組(P<0.01)；賽前2 h、賽后2 h血漿乳酸含量在總體、線性和二次效應(yīng)上均呈現(xiàn)極顯著性變化，與CON組相比，各試驗(yàn)組賽前2 h、賽后即刻和賽后2 h的乳酸含量均極顯著低于CON組(P<0.01)。

表6 補(bǔ)喂GAA對(duì)伊犁馬2 000 m速度賽賽前、賽后即刻及賽后糖代謝指標(biāo)的影響Table 6 Effects of supplementary feeding GAA on glucose metabolism indexes before, immediately and after 2 000 m speed race of Yili horses (n=5)

2.4 補(bǔ)喂GAA對(duì)伊犁馬賽前、賽后即刻及賽后抗氧化能力的影響

結(jié)果見(jiàn)表7，賽前2 h、賽后即刻、賽后2 h血漿谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性在總體和二次效應(yīng)上呈現(xiàn)極顯著性變化，各試驗(yàn)組賽前2 h和賽后2 h血漿谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性均顯著高于CON組(P<0.05)，25 GAA組、50 GAA組賽后即刻血漿谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性極顯著高于CON組(P<0.01)；賽前2 h、賽后2 h血漿超氧化物歧化酶活性在總體、線性和二次效應(yīng)上均呈現(xiàn)極顯著性變化，與CON組相比，各試驗(yàn)組賽前2 h和賽后2 h血漿超氧化物歧化酶活性均顯著高于CON組(P<0.05)，25 GAA組、50 GAA組賽后即刻血漿超氧化物歧化酶活性極顯著高于CON組(P<0.01)；各組馬匹賽前2 h、賽后即刻血漿過(guò)氧化氫酶活性均無(wú)顯著差異(P>0.05)，各試驗(yàn)組賽后2 h過(guò)氧化氫酶活性均極顯著高于CON組(P<0.01)；賽后2 h血漿總抗氧化能力在總體、線性和二次效應(yīng)上均呈現(xiàn)極顯著性變化，各試驗(yàn)組賽前2 h和賽后2 h血漿總抗氧化能力均顯著高于CON組(P<0.05)，50 GAA組賽后即刻血漿總抗氧化能力極顯著高于CON組(P<0.01)；血漿丙二醛含量變化趨勢(shì)相反，50 GAA組賽后即刻及賽后2 h血漿丙二醛含量極顯著低于CON組(P<0.01)。

表7 補(bǔ)喂GAA對(duì)伊犁馬2 000 m速度賽賽前、賽后即刻及賽后抗氧化能力的影響Table 7 Effects of supplementary feeding GAA on antioxidant capacity before, immediately and after 2 000 m speed race of Yili horses (n=5)

3 討 論

3.1 補(bǔ)喂GAA對(duì)運(yùn)動(dòng)馬運(yùn)動(dòng)性能的影響

在肌肉活動(dòng)急需能量的情況下，細(xì)胞內(nèi)的磷酸肌酸很容易將磷酸基團(tuán)傳遞給ADP生成ATP和肌酸；運(yùn)動(dòng)后的恢復(fù)期，細(xì)胞內(nèi)積累的肌酸又可以轉(zhuǎn)化成磷酸肌酸在肌肉中進(jìn)行貯存[13]。肌酸和磷酸肌酸作為骨骼肌能量的儲(chǔ)存物質(zhì)，可能是決定運(yùn)動(dòng)馬運(yùn)動(dòng)性能的關(guān)鍵物質(zhì)，GAA作為合成肌酸和磷酸肌酸的中間前體物質(zhì)，對(duì)骨骼肌中的能量供應(yīng)起著重要的調(diào)節(jié)作用。

本試驗(yàn)中，各試驗(yàn)組成績(jī)提高幅度均顯著高于CON組，50 GAA組在試驗(yàn)第47天，2 000 m速度賽比賽成績(jī)比CON組縮短了5.16%，比試驗(yàn)初始縮短了6.68%，說(shuō)明補(bǔ)喂GAA能夠改善伊犁馬的運(yùn)動(dòng)性能。這與Ostojic等[7]在人體試驗(yàn)中得出的補(bǔ)充1.2～4.8 g/d的GAA 6周后，可以提高肢體的肌肉耐力，提高運(yùn)動(dòng)能力的結(jié)果相一致。補(bǔ)喂GAA能夠提高運(yùn)動(dòng)機(jī)體的運(yùn)動(dòng)水平可能與增加肌肉中肌酸、磷酸肌酸的儲(chǔ)備量有關(guān)。研究顯示，GAA不僅能增加骨骼肌中肌酸的貯存量，并可促進(jìn)高強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致肌酸減少后細(xì)胞生物能的恢復(fù)[14]。在育肥豬試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，添加600 mg/kg GAA可以影響雜交仔豬肌肉中肌酸總量、磷酸肌酸及ATP的含量，使肌肉有足夠的能量收縮，從而提高能量利用率[14]。

3.2 補(bǔ)喂GAA對(duì)運(yùn)動(dòng)馬賽前、賽后即刻及賽后肌酸代謝物含量的影響

GAA由甘氨酸和L-精氨酸合成，通過(guò)血液循環(huán)被轉(zhuǎn)運(yùn)至肝臟，經(jīng)載體蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入肝臟細(xì)胞合成肌酸，釋放進(jìn)入血液循環(huán)，然后經(jīng)肌酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(CreaT)將肌酸轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入肌纖維和其他組織中[14]。肌酸通過(guò)肌酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白進(jìn)入骨骼肌細(xì)胞后，在肌肉組織中被磷酸化形成磷酸肌酸[15]，參與機(jī)體反應(yīng)后，代謝為肌酸酐，經(jīng)尿液排出體外。

在本試驗(yàn)中，補(bǔ)喂GAA顯著提高了50 GAA組馬匹賽后即刻血漿GAA、肌酸、肌酐含量以及賽后尿中肌酸、肌酐的排出量，極顯著提高了25 GAA組、75 GAA組賽后尿液中GAA和肌酐的排出量。Mcbreairty等[16]研究發(fā)現(xiàn)給3月齡仔豬補(bǔ)喂157 mg/kg GAA 18 d，可提高仔豬肝臟和肌肉中肌酸含量。Ardalan等[17-18]發(fā)現(xiàn)在牛瘤胃后補(bǔ)充10～30 g/d GAA 30 d，可增加血漿GAA、肌酐含量，提高尿中GAA、肌酸含量，增加牛機(jī)體的肌酸供應(yīng)，這與本試驗(yàn)研究結(jié)果一致。機(jī)體在運(yùn)動(dòng)過(guò)程中需要消耗大量的能量，肌酸儲(chǔ)備量的增加，可加強(qiáng)肌酸和磷酸肌酸之間的轉(zhuǎn)化，進(jìn)而為機(jī)體提供即時(shí)可用的能量。本試驗(yàn)中，賽后即刻50 GAA組的血漿GAA、肌酸、肌酐含量均高于其他各組。這與Tachikawa等[19]體外培養(yǎng)的非洲爪蟾細(xì)胞對(duì)GAA的吸收呈現(xiàn)飽和效應(yīng)，且GAA、肌酸均可作為細(xì)胞攝取GAA的抑制劑結(jié)果相一致。這可能是由于肌酸和GAA在細(xì)胞內(nèi)共用一個(gè)CreaT轉(zhuǎn)運(yùn)載體，肌酸的大量產(chǎn)生會(huì)對(duì)GAA的轉(zhuǎn)運(yùn)產(chǎn)生抑制，同時(shí)過(guò)量的GAA也會(huì)對(duì)轉(zhuǎn)運(yùn)產(chǎn)生自身抑制，降低機(jī)體對(duì)GAA的轉(zhuǎn)運(yùn)吸收。

肌酸激酶是將肌酸轉(zhuǎn)化為磷酸肌酸的催化酶，機(jī)體運(yùn)動(dòng)時(shí)，ATP供能的水平下降不能滿足機(jī)體需要，磷酸肌酸可脫掉1個(gè)磷酸根，迅速與ADP合成ATP，進(jìn)而參與機(jī)體的能量代謝[20-21]。本試驗(yàn)中，50 GAA組、75 GAA組賽后即刻各試驗(yàn)組血漿肌酸激酶活性極顯著高于CON組。Aziza等[22]給尼羅羅非魚(yú)補(bǔ)喂不同水平GAA(0.06%、0.12%、0.18%)，結(jié)果表明，各GAA組血清肌酸激酶活性、膽固醇含量均顯著高于對(duì)照組。李潔蕾[14]選用保育豬為試驗(yàn)對(duì)象，隨機(jī)分為2組，研究表明補(bǔ)喂600 mg/kg GAA可極顯著提高飼喂21 d后保育豬血漿肌酸激酶活性。即試驗(yàn)組肌酸激酶的高活性可在運(yùn)動(dòng)中為運(yùn)動(dòng)馬機(jī)體提供大量可即時(shí)供能的磷酸肌酸，對(duì)運(yùn)動(dòng)馬的運(yùn)動(dòng)性能有一定的積極作用。

3.3 補(bǔ)喂GAA對(duì)運(yùn)動(dòng)馬2 000 m速度賽賽前、賽后即刻及賽后糖代謝的影響

動(dòng)物體內(nèi)激素含量受多種因素影響，如運(yùn)動(dòng)會(huì)導(dǎo)致胰島素、胰高血糖素含量發(fā)生改變。胰島素在代謝調(diào)節(jié)中是一種作用較強(qiáng)的激素，能夠全面促進(jìn)機(jī)體的合成代謝[23-24]。在本試驗(yàn)中，補(bǔ)喂GAA極顯著提高了伊犁馬2 000 m速度賽賽前、賽后即刻及賽后血漿胰島素含量，降低了血漿胰高血糖素、葡萄糖和乳酸的含量。Marco等[25]最早在動(dòng)物試驗(yàn)中研究發(fā)現(xiàn)，體外注射GAA及胍基衍生物，能夠刺激大鼠的胰腺分泌胰島素，并且胍基團(tuán)可是刺激胰島素分泌的一個(gè)重要原因。GAA刺激胰島素分泌的具體機(jī)制可能是由于GAA分子的極性能影響胰島細(xì)胞膜去極化，并通過(guò)蛋白激酶A和C增強(qiáng)靶細(xì)胞膜表面胰島素受體的活性，從而激活胰島素信號(hào)通路[26]。胰島素的生理功能主要表現(xiàn)為降低血糖含量，因此，外源性添加GAA能夠降低血漿中的葡萄糖含量，從而維持血糖穩(wěn)態(tài)。在保育豬的試驗(yàn)中，補(bǔ)喂600 mg/kg GAA 21 d后，發(fā)現(xiàn)補(bǔ)喂GAA可提高保育豬的血漿果糖-6-磷酸激酶、丙酮酸激酶、異檸檬酸脫氫酶、蘋(píng)果酸脫氫酶、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸-輔酶Q還原酶、三磷酸腺苷合成酶活性，通過(guò)提高糖代謝和呼吸鏈相關(guān)酶的活性來(lái)增加ATP的合成，進(jìn)而影響能量代謝[14]。孫正武[27]在探討磷酸肌酸對(duì)脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的人靜脈細(xì)胞(HUVECs)及其細(xì)胞線粒體氧化磷酸化途徑的調(diào)節(jié)作用時(shí)發(fā)現(xiàn)，磷酸肌酸對(duì)以琥珀酸為底物的呼吸控制率和磷氧比值的改善程度大于以蘋(píng)果酸和谷氨酸為底物的情況，并且磷酸肌酸能夠增強(qiáng)細(xì)胞線粒體內(nèi)磷酸激酶的活性，穩(wěn)定細(xì)胞整體能量代謝。

3.4 補(bǔ)喂GAA對(duì)運(yùn)動(dòng)馬2 000 m速度賽賽前、賽后即刻及賽后抗氧化能力的影響

GAA作為超氧化劑能夠從它的共軛堿提供1個(gè)電子生成超氧陰離子-氧自由基，從而產(chǎn)生活性氧[28]。其代謝物肌酸是溫和的直接抗氧化劑(自由基清除劑)，可通過(guò)直接清除細(xì)胞內(nèi)的活性氧特別是羧基以及活性氮來(lái)保護(hù)細(xì)胞，且肌酸激活肌酸激酶，通過(guò)ADP再循環(huán)機(jī)制消耗自由基，從而發(fā)揮抗氧化作用[29]。磷酸肌酸可以抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)增強(qiáng)抗氧化酶系統(tǒng)功能。生理狀態(tài)下，體內(nèi)自由基的產(chǎn)生與消除維持動(dòng)態(tài)平衡。在應(yīng)激情況下，自由基大量產(chǎn)生，當(dāng)超過(guò)抗氧化防御系統(tǒng)的能力時(shí)，就會(huì)引起自由基的堆積，產(chǎn)生氧化損傷，動(dòng)物通過(guò)抗氧化系統(tǒng)及時(shí)清除體內(nèi)過(guò)多的自由基維持機(jī)體的自由基平衡[27]。

在本試驗(yàn)中，補(bǔ)喂GAA均顯著提高了運(yùn)動(dòng)馬血漿的總抗氧化能力，血漿超氧化物歧化酶、過(guò)氧化氫酶活性，顯著降低了50 GAA組、75 GAA組血漿丙二醛含量。聞愛(ài)友等[30]研究發(fā)現(xiàn)在28日齡斷乳仔豬飼糧中添加150～450 mg/kg GAA可以提高動(dòng)物血清中總抗氧化能力以及超氧化物歧化酶、過(guò)氧化氫酶、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性，并且降低血清丙二醛含量。Wang等[31]學(xué)者發(fā)現(xiàn)，在育肥豬飼糧中添加2.0 g/kg GAA，補(bǔ)喂54 d后顯著提高了育肥豬肌肉超氧化物歧化酶活性、總抗氧化能力和血液總抗氧化能力、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶、過(guò)氧化氫酶等抗氧化酶活性，極顯著降低了肌肉和血液丙二醛含量。Aziza等[22]學(xué)者給180尾尼羅羅非魚(yú)補(bǔ)喂不同水平GAA，結(jié)果表明，0.12%組和0.18%組血清丙二醛含量顯著降低，血清超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性和一氧化氮含量均顯著升高。這與本試驗(yàn)研究結(jié)果相一致。此外，GAA是體內(nèi)合成肌酸的前體物質(zhì)，添加外源性GAA可有效增加機(jī)體肌酸、磷酸肌酸的含量，同時(shí)，補(bǔ)喂GAA可能節(jié)省了體內(nèi)從頭合成肌酸的原料，增加細(xì)胞內(nèi)精氨酸的含量，而精氨酸具有較強(qiáng)的抗氧化功效[32]。綜上所述，外源補(bǔ)喂GAA可以提高運(yùn)動(dòng)馬機(jī)體的抗氧化能力。

4 結(jié) 論

在本試驗(yàn)條件下，補(bǔ)喂25～75 mg/kg GAA提高了伊犁馬血漿肌酸代謝物含量、肌酸激酶活性、賽后肌酸代謝物排出量以及機(jī)體抗氧化能力，促進(jìn)了運(yùn)動(dòng)馬機(jī)體糖代謝對(duì)運(yùn)動(dòng)的供能，提高了伊犁馬2 000 m速度賽的運(yùn)動(dòng)成績(jī)，每匹馬補(bǔ)喂50 mg/kg時(shí)效果最佳。