塔娜 王霞 李文娟 張愛紅

超聲檢查是診斷乳腺癌的重要技術(shù)。超聲造影的時(shí)間-強(qiáng)度曲線可減少超聲造影定性分析帶來的誤差[1-3]。高爾基磷酸化蛋白3(golgi phosphoprotein 3，GOLPH3)屬于高爾基體復(fù)合物相關(guān)蛋白，與多種腫瘤的預(yù)后相關(guān)[4-5]。本研究觀察乳腺癌超聲造影的特征及GOLPH3的表達(dá)情況，評估兩者之間的關(guān)系。

對象與方法

一、對象

2014年1月～2015年4月我院收治乳腺癌病人107例，年齡39～73歲，平均年齡(60.18±7.28)歲。病理分型為浸潤性導(dǎo)管癌。臨床分期：Ⅰ期48例，Ⅱ期30例，Ⅲ期29例。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)病理檢查確診為乳腺癌；(2)無乳腺其他疾??；(3)知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他部位腫瘤或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移；精神疾病。

二、方法

1.超聲造影檢測：選擇Philips iU22多普勒彩色超聲儀，探頭型號EUP-L74M作為超聲診斷儀器，選用頻率為5～12 MHZ的線陣型高頻的探頭。首先評估腫塊邊界、形狀、縱橫比、內(nèi)部回聲、后放回聲、鈣化及血流等。隨后采用L9-3寬頻線陣探頭，調(diào)至造影模式，靜脈彈丸式注射常規(guī)配置的SonoVue超聲造影劑。造影過程觀察連續(xù)動態(tài)圖像2 min，全程圖像存于硬盤。分析病灶的造影圖像：選擇病灶區(qū)與周圍正常乳腺組織為感興趣區(qū)，得到時(shí)間強(qiáng)度曲線，分析到達(dá)時(shí)間、增強(qiáng)時(shí)間，減低時(shí)間，曲線下面積等參數(shù)。

2.乳腺癌組織中GOLPH3的表達(dá)及判斷：使用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)(SP)法檢測GOLPH3表達(dá)。免疫組化試劑盒(上海吉滿生物有限公司)，兔抗人GOLPH3 多克隆抗體(德國ChromoTek公司)，鼠抗兔單克隆二抗(上海吉滿公司)。GOLPH3陽性位于細(xì)胞膜上，黃褐色定義為陽性，分別選擇10個(gè)視野，計(jì)算1000個(gè)細(xì)胞陽性比例：<10%(-)；10%～49%(+)；50%～89%(++)；≥90%(+++)[4]。

3 隨訪：所有病人均隨訪60個(gè)月，失訪1例，失訪率0.93%。本研究以術(shù)后病理明確為起始日期至死亡日期或隨訪終止日期定義為總生存事件(OS)。隨訪方式主要以電話、門診復(fù)查方式。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

結(jié)果

1. 乳腺癌組織中GOLPH3不同表達(dá)與病理特征的關(guān)系 ：107例乳腺癌組織，GOLPH3表達(dá)陽性87例，陽性率81.21%。其中(+)13例，(++)25例，(+++)49例。見圖1。GOLPH3不同表達(dá)強(qiáng)度間年齡、腫瘤大小無明顯差異(P=0.431,0.238)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 乳腺癌組織中GOLPH3不同表達(dá)強(qiáng)度與臨床病理特征的關(guān)系

A:陰性；B:弱陽性；C:中等陽性；D:強(qiáng)陽性

2.超聲造影特征：乳腺癌超聲造影顯示病灶低增強(qiáng)21例(19.6%)，等增強(qiáng)22例(20.6%)，高增強(qiáng)64例(59.8%) ； 病灶早增強(qiáng)68例(63.6%)，同步增強(qiáng)22例(20.5%)，晚增強(qiáng)17例(15.9%)；病灶早消退35例(32.7%)，同步消退28例(26.2%)，晚消退44例(41.1%)。見圖2、3。

A:造影劑進(jìn)入豐富，腫塊呈整體性增強(qiáng)；B:乳腺癌組織和周圍乳腺組織的時(shí)間-強(qiáng)度曲線分析。與癌組織相比，周圍乳腺組織具有強(qiáng)回聲增強(qiáng)和快速輸出的特點(diǎn)。與周圍乳腺組織相比，乳腺癌組織曲線緩慢下降(黃色曲線)

乳腺癌周圍正常乳腺組織超聲造影顯示組織低增強(qiáng)76例(71.0%)，等增強(qiáng)18例(16.8%)，高增強(qiáng)13例(12.2%) ； 早增強(qiáng)9例(8.4%)，同步增強(qiáng)13例(12.2%)，晚增強(qiáng)85例(79.4%)；早消退26例(24.3%)，同步消退45例(42.1%)，晚消退36例(33.6%)。

3.GOLPH3陽性與陰性乳腺癌超聲造影定量分析參數(shù)比較見表2。與GOLPH3陰性乳腺癌比較，GOLPH3陽性乳腺癌的始增時(shí)間、達(dá)峰時(shí)間、峰值加速時(shí)間降低，始增速度、增強(qiáng)速率增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表2 GOLPH3陽性與陰性乳腺癌超聲造影定量分析參數(shù)比較

4.乳腺癌GOLPH3表達(dá)水平及超聲造影參數(shù)與病人預(yù)后的關(guān)系：不同GOLPH3表達(dá)水平及超聲造影參數(shù)乳腺癌病人的5年生存率差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見圖4。

A:超聲造彩圖，可見放射狀増強(qiáng)、造影后范圍擴(kuò)大；B:時(shí)間-強(qiáng)度曲線圖，曲線下面積為1 252.257 dB·S，峰值強(qiáng)度為22.674 dB

圖4 乳腺癌GOLPH3表達(dá)水平及超聲造影參數(shù)與病人預(yù)后的關(guān)系

討論

超聲造影可以及時(shí)獲取局部組織的血流情況，觀察造影區(qū)解剖和代謝等情況，從而增強(qiáng)細(xì)微特征的分辨和血流信號的靈敏度，清晰準(zhǔn)確的觀察腫瘤微血管灌注的特征，從而通過定量參數(shù)評估腫瘤的超聲特征[6-8]。乳腺癌超聲造影表現(xiàn)為快進(jìn)、有粗大血管供血、不均勻強(qiáng)化等。本研究結(jié)果表明，與周圍組織比較，乳腺癌組織的超聲造影各參數(shù)均有明顯差異。其原因可能為：腫瘤組織血管較多且管壁通透性高，易形成動靜脈瘺；同時(shí)腫瘤向周邊侵襲的過程中會分泌VEGF，刺激血管大量生成，但這些血管扭曲，粗細(xì)不均，表現(xiàn)為動靜脈瘺等特征，導(dǎo)致造影劑快速進(jìn)入并快速退出的現(xiàn)象，在造影圖像上表現(xiàn)為快速高增強(qiáng)，快進(jìn)快退征象。同時(shí)我們分析了乳腺癌組織的超聲造影各參數(shù)與預(yù)后的關(guān)系，結(jié)果顯示，超聲造影參數(shù)與乳腺癌病人的5年生存率有關(guān)。不同超聲參數(shù)代表了不同的腫瘤血管浸潤，影響腫瘤轉(zhuǎn)移，影響預(yù)后。

GOLPH3屬于高爾基體復(fù)合物相關(guān)蛋白，是一種癌基因，與腫瘤進(jìn)展密切相關(guān)[9]。多中心研究表明，GOLPH3能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲能力[10-11]。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，結(jié)直腸癌組織GOLPH3 高表達(dá)，與疾病的進(jìn)展密切相關(guān)[12]。另外研究表明，非小細(xì)胞肺癌組織GOLPH3 高表達(dá)提示病人預(yù)后不佳[13]。另有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，在舌癌、胃癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、前列腺癌及婦科多種惡性腫瘤等中GOLPH3同樣高表達(dá)[14-15]。本研究表明，GOLPH3在乳腺癌組織中高表達(dá)，提示預(yù)后不良，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[16]。目前超聲造影參數(shù)與GOLPH3蛋白的相關(guān)性尚不清楚，本研究結(jié)果表明，GOLPH3陽性與陰性乳腺癌病人的超聲造影參數(shù)顯著差異，與乳腺癌的預(yù)后有關(guān)，這提示乳腺癌組織的超聲參數(shù)與預(yù)后因子GOLPH3有關(guān)?？赡苁荊OLPH3通過調(diào)節(jié)DNA損傷后的多種機(jī)制，促進(jìn)腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移，在超聲造影特征上表現(xiàn)為始增時(shí)間、達(dá)峰時(shí)間、峰值加速時(shí)間降低，始增速度、增強(qiáng)速率增加。

本次研究尚存在一定的局限性，未對病人的臨床病理參數(shù)與免疫指標(biāo)進(jìn)行分析，同時(shí)未能對病人進(jìn)行隨訪，分析超聲參數(shù)與生存的關(guān)系。