魏根紅，王上曾，田明波，郭國(guó)興，郭小偉

1.平頂山市中醫(yī)醫(yī)院，河南 平頂山 467000；2.河南省中醫(yī)院，河南 鄭州 450002；3.鄭州市人民醫(yī)院，河南 鄭州 450015；4.鄭州市骨科醫(yī)院，河南 鄭州 450052

骨質(zhì)疏松癥是一種以骨量減少，骨微結(jié)構(gòu)破壞，骨密度降低等為特征的慢性骨骼疾病，在絕經(jīng)后女性中多見［1］。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國(guó)60歲以上老年人骨質(zhì)疏松癥患病率高達(dá)30%～50%，其中60～70歲絕經(jīng)后女性的患病率高達(dá)50%～70%［2］。臨床治療骨質(zhì)疏松的藥物主要有雌激素類藥物、雙膦酸鹽、鈣劑等，其中雌激素替代療法目前在臨床最常見，雖然該方法具有一定療效，但會(huì)增加乳腺癌、心腦血管疾病等的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)［3］。因此，尋找副作用低，療效穩(wěn)定的替代藥物尤為重要。雙藤湯由雷公藤和黑骨藤組成，雷公藤是衛(wèi)矛科植物，具有祛風(fēng)除濕、消腫止痛的功效，可改善骨微結(jié)構(gòu)，促進(jìn)骨折愈合［4］。黑骨藤是蘿藦科植物，具有活血消癰、祛風(fēng)除濕的功效，可抑制破骨細(xì)胞分化，抑制骨吸收［5］。二者均能改善骨質(zhì)疏松癥的相關(guān)臨床癥狀，但雙藤湯能否治療骨質(zhì)疏松癥尚未見文獻(xiàn)報(bào)道，因此，本研究建立去勢(shì)骨質(zhì)疏松大鼠模型，探討雙藤湯醇提取物對(duì)其的療效及相關(guān)作用機(jī)制，為雙藤湯在骨質(zhì)疏松癥臨床治療中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 動(dòng)物60只3月齡SPF級(jí)SD雌鼠，體質(zhì)量260～280 g，購(gòu)自北京華阜康生物科技股份有限公司，許可證號(hào)：SCXK（京）2019-0001。飼養(yǎng)條件：溫度18～26℃，相對(duì)濕度40%～60%，12 h/12 h晝夜循環(huán)，自由飲食、飲水。

1.2 藥物與試劑雷公藤木質(zhì)部、黑骨藤（亳州仁益中藥材銷售有限公司，批號(hào)：190613、190528）；阿侖膦酸鈉片（美國(guó)默沙東公司，規(guī)格：70 mg/片，批號(hào)：20190215A）；青霉素［華北制藥股份有限公司，規(guī)格：0.48 g（80萬U），批號(hào)：201904］。多聚甲醛、硝酸溶液（唐山中浩化工有限公司，貨號(hào)：135876、132691）；細(xì)胞裂解液（美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司，批號(hào)：201806）；反轉(zhuǎn)錄試劑盒（南京諾唯贊生物科技有限公司，貨號(hào)：G1023507）；大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate resistant acid phosphatase，TRAP）、Ⅰ型膠原交聯(lián)C-末端肽（C-terminal telopeptide of typeⅠcollagen，CTX-1）、骨鈣素（bonegla protein，BGP）、I型前膠原N端前肽（type I procollagen propeptide，PINP）ELISA試劑盒（武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司，批號(hào)：R190124、R190610、R190511、R190420）；蘇木素伊紅（hematoxylin and eosin，HE）染色試劑盒（武漢博士德生物工程有限公司，批號(hào)：20190415007）；Trizol（美國(guó)Invitrogen公司，批號(hào)：190412Y）；二喹啉甲酸法（bicin choninic acid，BCA）試劑盒（深圳晶美生物工程有限公司，批號(hào)：20190513）；熒光預(yù)混液（美國(guó)TaqMan公司，批號(hào)：190508C）；骨保護(hù)素（osteoprotegerin，OPG）、核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）、核因子κB受體活化因子配體（receptor activator of NF-κB ligand，RANKL）兔單克隆抗體及二抗（美國(guó)Abcam公司，批號(hào)：190216、190328、190410；190425、190427、190521）；β-actin蛋白一抗及二抗（南京博研生物科技有限公司，貨號(hào)：P0416112、P0528147）；引物合成委托蘇州金唯智生物科技有限公司。

1.3 儀器UltraFocus型小動(dòng)物雙能X線骨密度診斷儀（美國(guó)Faxitron公司）；TDZ5-BP型醫(yī)用離心機(jī)（長(zhǎng)沙湘銳離心機(jī)有限公司）；xMark酶標(biāo)儀（美國(guó)Bio-Rad公司）；9500型實(shí)時(shí)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（real time-quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR）儀（美國(guó)ABI公司）；LV-150N型光學(xué)顯微鏡（日本尼康公司）；DYCZ-30C型蛋白凝膠電泳儀（北京六一儀器廠）；Trans-Blot Turbo全能型蛋白轉(zhuǎn)印系統(tǒng)（美國(guó)Bio-Rad公司）；CA288型全自動(dòng)凝膠成像分析系統(tǒng)（上海精密儀器儀表有限公司）。

2 方法

2.1 雙藤湯醇提取物制備將15 g雷公藤和9 g黑骨藤混合后粉碎，加入80%乙醇，50℃加熱回流提取，可得雙藤湯醇提取物（1 g醇提取物相當(dāng)于5 g生藥量）。

2.2 模型建立及分組給藥3月齡的SPF級(jí)SD雌鼠60只，隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、阿侖膦酸鈉組、雙藤湯醇提取物高劑量組、雙藤湯醇提取物中劑量組、雙藤湯醇提取物低劑量組，每組10只。采用2%戊巴比妥鈉腹腔注射進(jìn)行麻醉，打開大鼠腹腔，暴露卵巢組織，在卵巢根部結(jié)扎并摘除雙側(cè)卵巢，假手術(shù)組大鼠僅切除卵巢附近脂肪組織，不切除卵巢，手術(shù)完成后縫合。術(shù)后每只大鼠每天注射1.0×105U的青霉素預(yù)防感染，連續(xù)3 d。3個(gè)月后，采用雙能X線骨密度診斷儀檢測(cè)大鼠股骨骨密度，大鼠骨密度值比建模前下降30%以上，認(rèn)為去勢(shì)骨質(zhì)疏松癥大鼠模型建模成功。建模成功后，雙藤湯醇提取物高、中、低劑量組分別灌胃給予2 mL不同濃度的雙藤湯醇提取物（161 g·L-1、80.5 g·L-1、40.25 g·L-1），阿侖膦酸鈉組灌胃給予2 mL濃度為50 g·L-1的阿侖膦酸鈉溶液，假手術(shù)組和模型組均灌胃給予等體積的生理鹽水，每日1次，連續(xù)2個(gè)月。

2.3 大鼠骨密度檢測(cè)采用雙能X線骨密度診斷儀分別于治療前、治療后檢測(cè)大鼠左側(cè)股骨和脛骨骨密度值。大鼠麻醉后，將待測(cè)部位固定在掃描儀探頭下，通過骨密度測(cè)定軟件，分析待測(cè)部位骨密度值。

2.4 ELISA法檢測(cè)大鼠骨代謝水平分別在治療前和治療后，采用ELISA法檢測(cè)大鼠血清中TRAP、CTX-1、BGP、PINP的水平。取大鼠尾靜脈血，室溫靜置2 h后，3 000×g離心20min分離血清，嚴(yán)格按照ELISA試劑盒說明書操作，使用酶標(biāo)儀檢測(cè)各樣本孔光密度（optical density，OD）值，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)蛋白濃度與OD值得到回歸方程，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣本孔OD值，計(jì)算出對(duì)應(yīng)蛋白濃度。

2.5 股骨形態(tài)學(xué)觀察通過HE染色觀察大鼠股骨病理變化。取大鼠股骨組織，4%多聚甲醛固定48 h，5%硝酸脫鈣處理1周后進(jìn)行石蠟包埋。將組織蠟塊切成厚度4μm的組織切片，經(jīng)過脫蠟復(fù)水后，按照HE染色試劑盒說明書對(duì)切片進(jìn)行HE染色，經(jīng)過中性樹脂封片后，光鏡下觀察大鼠股骨病理變化。

2.6 RT-qPCR檢測(cè)大鼠股骨組織中OPG mRNA、RANKL mRNA、NF-κB m RNA的表達(dá)水平采用RT-qPCR檢測(cè)大鼠股骨組織中OPG mRNA、RANKL mRNA、NF-κB mRNA的相對(duì)表達(dá)量。取大鼠股骨組織，加入少許液氮研磨成粉末狀，Trizol法提取股骨組織總RNA，依據(jù)反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書操作反轉(zhuǎn)錄成cDNA。根據(jù)美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心（national center for biotechnology information，NCBI）基因庫(kù)中查詢目的基因mRNA序列設(shè)計(jì)出上下游引物。引物序列見表1。以β-actin為內(nèi)參基因，通過配套熒光分析軟件分析樣本Ct值，按照2-△△Ct計(jì)算目的基因mRNA相對(duì)表達(dá)量。

表1 引物序列

2.7 Western Blot檢測(cè)大鼠股骨組織中OPG、RANKL、NF-κB蛋白的表達(dá)水平采用Western blot檢測(cè)大鼠股骨組織中OPG、RANKL、NF-κB蛋白的表達(dá)水平。取大鼠股骨組織加入少許液氮研磨，加入細(xì)胞裂解液，置于4℃裂解過夜。10 000×g離心10 min，取上清，即為總蛋白。采用BCA試劑盒進(jìn)行蛋白質(zhì)定量，沸水中變性5 min。蛋白上樣進(jìn)行凝膠電泳。經(jīng)過封閉，一抗（稀釋比例1∶1 000、1∶2 000、1∶1 000）、二抗（稀釋比例均為1∶5 000）雜交后顯色，根據(jù)圖像分析系統(tǒng)對(duì)目的條帶進(jìn)行灰度值分析，以β-actin為內(nèi)參，計(jì)算目的蛋白相對(duì)表達(dá)水平。

2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法使用SPSS 22.0對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)使用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間比較使用單因素方差分析，兩兩比較使用SNK-q檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 雙藤湯醇提取物對(duì)去勢(shì)骨質(zhì)疏松癥大鼠骨密度的影響造模結(jié)束后檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，模型組和阿侖膦酸鈉組均有1只造模不成功，后續(xù)實(shí)驗(yàn)將其舍棄。治療前，與假手術(shù)組比較，造模大鼠股骨和脛骨骨密度顯著下降（P＜0.05）。治療后，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠股骨和脛骨骨密度均顯著下降（P＜0.05）；與模型組比較，雙藤湯醇提取物高、中、低劑量組大鼠股骨和脛骨骨密度顯著升高（P＜0.05），且呈劑量依賴性。見表2。

表2 雙藤湯醇提取物對(duì)去勢(shì)骨質(zhì)疏松癥大鼠骨密度的影響 （±s）

表2 雙藤湯醇提取物對(duì)去勢(shì)骨質(zhì)疏松癥大鼠骨密度的影響 （±s）

注：與假手術(shù)組比較，a P＜0.05；與模型組比較，b P＜0.05；與治療前比較，△P＜0.05

-2組別 n 股骨/g·cm-2脛骨/g·cm治療前 治療后假手術(shù)組治療前 治療后10 0.29±0.02 0.28±0.02 0.24±0.02 0.23±0.01模型組 9 0.22±0.01a 0.21±0.01a 0.19±0.01a 0.18±0.01a阿侖膦酸鈉組 9 0.21±0.01a 0.25±0.01b△ 0.19±0.01a 0.21±0.01b△雙藤湯醇提取物高劑量組 10 0.21±0.01a 0.26±0.01b△ 0.19±0.01a 0.23±0.02b△雙藤湯醇提取物中劑量組 10 0.22±0.01a 0.25±0.01b△ 0.19±0.01a 0.21±0.01b△雙藤湯醇提取物低劑量組 10 0.21±0.01a 0.23±0.02b△ 0.19±0.02a 0.19±0.01b △

3.2 雙藤湯醇提取物對(duì)去勢(shì)骨質(zhì)疏松癥大鼠骨代謝的影響治療前，與假手術(shù)組比較，各造模大鼠血清中TRAP、CTX-1的水平顯著升高（P＜0.05），BGP、PINP的水平顯著降低（P＜0.05）。治療后，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠血清中TRAP、CTX-1的水平顯著升高（P＜0.05），BGP、PINP的水平顯著降低（P＜0.05）；與模型組比較，各給藥組大鼠血清TRAP、CTX-1的水平顯著下降（P＜0.05），而BGP、PINP的水平顯著升高（P＜0.05），且雙藤湯醇提物的作用效果呈現(xiàn)明顯的劑量依賴性。見表3。

表3 雙藤湯醇提取物對(duì)去勢(shì)骨質(zhì)疏松癥大鼠骨代謝的影響 （±s）

表3 雙藤湯醇提取物對(duì)去勢(shì)骨質(zhì)疏松癥大鼠骨代謝的影響 （±s）

注：與假手術(shù)組比較，a P＜0.05；與模型組比較，b P＜0.05；與治療前比較，△P＜0.05

-1分組 n TRAP/U·L CTX-1（ρ/μg·L-1）BGP（ρ/μg·L-1）PINP（ρ/μg·L-1）治療前 治療后假手術(shù)組 10 4.24±0.44 4.36±0.47 113.68±0.35 111.62±7.51 38.91±6.02 38.69±5.65 33.25±4.01治療前 治療后治療前 治療后治療前 治療后35.17±5.25模型組 9 9.33±1.06a 9.41±0.81a 184.68±10.50a 185.74±9.82a 18.12±1.96a 16.52±3.56a 14.33±2.58a 13.89±2.11a阿侖膦酸鈉組 9 9.41±0.69a 6.35±0.29b△ 185.71±9.12a 153.68±7.55b△17.98±3.05a 27.50±4.01b△ 13.92±2.20a 24.50±3.06b△雙藤湯醇提取物高劑量組10 9.35±1.93a 5.28±0.96b△ 187.02±7.65a 130.74±9.48b△18.15±2.89a 20.93±2.09b△ 14.04±1.74a 29.48±4.24b△雙藤湯醇提取物中劑量組10 9.37±1.63a 6.38±1.38b△ 182.90±8.23a 150.01±6.58b△17.66±2.68a 26.81±3.51b△ 13.65±2.66a 23.92±3.29b△雙藤湯醇提取物低劑量組10 9.40±0.90a 8.08±0.75b△ 191.22±9.29a 167.82±5.61b△18.09±1.06a 32.44±2.36b△ 14.23±3.15a 18.36±2.68b△

3.3 雙藤湯醇提取物對(duì)去勢(shì)骨質(zhì)疏松癥大鼠股骨組織形態(tài)學(xué)的影響假手術(shù)組大鼠骨小梁分布均勻致密，無明顯變細(xì)，結(jié)構(gòu)完整，骨髓腔較小。模型組大鼠骨小梁出現(xiàn)斷裂，連續(xù)性差，骨髓腔明顯增大。與模型組比較，雙藤湯醇提取物高、中、低劑量組大鼠股骨組織骨小梁面積增大，結(jié)構(gòu)完整，骨髓腔減小。見圖1。

圖1 雙藤湯醇提取物對(duì)去勢(shì)骨質(zhì)疏松癥大鼠股骨組織形態(tài)學(xué)的影響（HE染色，×400）

3.4 雙藤湯醇提取物對(duì)去勢(shì)骨質(zhì)疏松癥大鼠股骨組織中OPG mRNA、RANKL mRNA及NF-κB mRNA表達(dá)水平的影響與假手術(shù)組比較，模型組大鼠RANKL mRNA、NF-κB mRNA的表達(dá)水平顯著升高（P＜0.05），OPG mRNA的表達(dá)水平顯著降低（P＜0.05）；與模型組比較，雙藤湯醇提取物給藥組大鼠RANKL mRNA、NF-κB mRNA的表達(dá)水平顯著降低（P＜0.05），OPG mRNA的表達(dá)水平顯著升高（P＜0.05），且雙藤湯醇提物的作用效果呈現(xiàn)明顯的劑量依賴性。見表4。

表4 雙藤湯醇提取物對(duì)去勢(shì)骨質(zhì)疏松癥大鼠股骨組織中OPG m RNA、RANKL m RNA及NF-κB m RNA表達(dá)水平的影響 （±s）

表4 雙藤湯醇提取物對(duì)去勢(shì)骨質(zhì)疏松癥大鼠股骨組織中OPG m RNA、RANKL m RNA及NF-κB m RNA表達(dá)水平的影響 （±s）

注：與假手術(shù)組比較，a P＜0.05；與模型組比較，b P＜0.05

mRNA假手術(shù)組分組 n OPG mRNA RANKL mRNA NF-κB 3 0.68±0.12 0.52±0.06 0.41±0.07模型組 3 0.22±0.06a 1.21±0.15a 0.95±0.12a阿侖膦酸鈉組 3 0.45±0.05b 0.84±0.11b 0.66±0.06b雙藤湯醇提取物高劑量組3 0.59±0.06b 0.69±0.05b 0.53±0.05b雙藤湯醇提取物中劑量組3 0.47±0.08b 0.82±0.09b 0.68±0.05b雙藤湯醇提取物低劑量組3 0.31±0.07b 1.03±0.12b 0.83±0.09 b

3.5 雙藤湯醇提取物對(duì)去勢(shì)骨質(zhì)疏松癥大鼠股骨組織中OPG、RANKL及NF-κB蛋白表達(dá)水平的影響與假手術(shù)組比較，模型組大鼠股骨組織中RANKL、NF-κB蛋白的相對(duì)表達(dá)量顯著升高（P＜0.05），OPG蛋白的相對(duì)表達(dá)量顯著下降（P＜0.05）；與模型組比較，雙藤湯醇提取物高、中、低劑量組大鼠股骨組織RANKL、NF-κB蛋白相對(duì)表達(dá)量顯著下降（P＜0.05），OPG蛋白的相對(duì)表達(dá)量顯著升高（P＜0.05），且雙藤湯醇提取物的作用效果呈明顯的劑量依賴性。見圖2，表5。

圖2 雙藤湯醇提取物對(duì)去勢(shì)骨質(zhì)疏松癥大鼠股骨組織中OPG、RANKL及NF-κB蛋白表達(dá)的影響（Western blot檢測(cè)）

表5 雙藤湯醇提取物對(duì)去勢(shì)骨質(zhì)疏松癥大鼠股骨組織中OPG、RANKL及NF-κB蛋白表達(dá)水平的影響 （±s）

表5 雙藤湯醇提取物對(duì)去勢(shì)骨質(zhì)疏松癥大鼠股骨組織中OPG、RANKL及NF-κB蛋白表達(dá)水平的影響 （±s）

注：與假手術(shù)組比較，a P＜0.05；與模型組比較，b P＜0.05

組別 n OPG RANKL NF-κB 3 0.82±0.12 0.69±0.09 0.39±0.05模型組 3 0.33±0.08a 1.56±0.25a 1.25±0.11a阿侖膦酸鈉組 3 0.59±0.10b 1.05±0.18b 0.72±0.06b雙藤湯醇提取物高劑量組3 0.70±0.04b 0.83±0.09b 0.58±0.06b雙藤湯醇提取物中劑量組3 0.57±0.09b 1.08±0.12b 0.70±0.12b雙藤湯醇提取物低劑量組3 0.45±0.11b 1.32±0.20b 1.03±0.09假手術(shù)組b

4 討論

絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥是由于女性卵巢功能低下，雌激素分泌減少，激發(fā)了破骨細(xì)胞活性，導(dǎo)致機(jī)體骨量減少、骨微結(jié)構(gòu)退化、骨脆性增加而引起的，從而使骨折風(fēng)險(xiǎn)增高［6-8］。目前，骨質(zhì)疏松癥的治療常以補(bǔ)鈣、改善骨代謝、預(yù)防骨折為主，阿侖膦酸鈉可抑制破骨過程，保護(hù)骨結(jié)構(gòu)，提高骨密度，有效治療骨質(zhì)疏松并預(yù)防骨質(zhì)疏松性骨折［9-10］。因此，本研究選擇阿侖膦酸鈉作為陽性對(duì)照藥物。中藥在骨質(zhì)疏松癥臨床治療中運(yùn)用較廣，常見藥物有淫羊藿、骨碎補(bǔ)、地黃等［11-12］。研究表明，雙藤湯對(duì)膝骨關(guān)節(jié)炎具有一定治療效果［13］，但對(duì)骨質(zhì)疏松癥的療效尚未可知。因此，本研究使用雙藤湯治療去勢(shì)大鼠骨質(zhì)疏松癥，并初步探討其作用機(jī)制，為臨床治療提供新的參考。

TRAP和CTX-1反映骨吸收水平。TRAP是破骨細(xì)胞標(biāo)志酶，其活性可以衡量骨吸收能力［14-15］。CTX-1是反Ⅰ型膠原蛋白的代謝產(chǎn)物，是骨吸收水平的另一特異性指標(biāo)。研究表明，在骨質(zhì)疏松患者血清中可檢測(cè)出TRAP和CTX-1水平異常升高［16］。本研究顯示，骨質(zhì)疏松模型大鼠TRAP和CTX-1水平顯著升高，而雙藤湯醇提取物治療后，TRAP和CTX-1的水平顯著降低，提示雙藤湯具有抑制骨吸收的作用。BGP、PINP反映骨形成指標(biāo)［17］，其中BGP是成熟成骨細(xì)胞中分泌的鈣結(jié)合肽，血清中BGP水平可以反映成骨細(xì)胞活性［18］。Ⅰ型膠原主要在骨組織中合成，首先合成原膠原，在I型原膠原的氨基N端和C端各有1個(gè)延長(zhǎng)肽，其中N端的延長(zhǎng)肽即被稱為PINP，當(dāng)I型原膠原被成骨細(xì)胞分泌至細(xì)胞外，PINP被蛋白酶切割，進(jìn)入血液循環(huán)［19-20］，因此，PINP可準(zhǔn)確反映成骨細(xì)胞的活性。本研究顯示，去勢(shì)骨質(zhì)疏松癥大鼠血清中BGP、PINP的水平均顯著降低，而經(jīng)雙藤湯醇提取物治療后，BGP、PINP的水平顯著升高，表明雙藤湯醇提取物可促進(jìn)骨形成。此外，本研究檢測(cè)大鼠骨密度發(fā)現(xiàn)，經(jīng)雙藤湯醇提取物治療后，骨質(zhì)疏松癥大鼠骨密度顯著增加，且骨病理形態(tài)明顯改善，表明雙藤湯醇提取物對(duì)去勢(shì)骨質(zhì)疏松大鼠有治療效果。

OPG是RANKL的誘餌受體，主要由骨髓基質(zhì)細(xì)胞、成骨細(xì)胞等分泌，可與RANK競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合RANKL，從而誘導(dǎo)破骨細(xì)胞凋亡，抑制骨吸收［21-22］。研究表明，OPG基因敲除小鼠骨吸收能力增強(qiáng)，出現(xiàn)嚴(yán)重骨質(zhì)疏松癥［23］。而RANKL基因過表達(dá)小鼠會(huì)出現(xiàn)骨密度降低，骨脆性增大［24］。此外，RANKL表達(dá)水平還可影響骨代謝［25］，RANKL表達(dá)水平升高可引起TRAP和CTX-1水平升高，BGP、PINP水平下降［26］。NF-κB是OPG下游靶基因，當(dāng)OPG表達(dá)下降、RANKL表達(dá)升高時(shí)，NF-κB被激活，進(jìn)而參與骨破壞，在骨質(zhì)疏松癥發(fā)生和發(fā)展過程中均有重要作用［27］。研究表明，在骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型中可檢測(cè)出NF-κB異常活化，而NF-κB基因敲除大鼠則表現(xiàn)出破骨細(xì)胞減少，引起骨硬化［28］。本研究顯示，經(jīng)過雙藤湯醇提取物治療后，大鼠股骨組織中OPG水平升高，RANKL、NF-κB水平降低，推測(cè)雙藤湯醇提取物通過上調(diào)OPG表達(dá)，抑制RANKL、NF-κB表達(dá)治療去勢(shì)骨質(zhì)疏松癥大鼠。

綜上所述，雙藤湯醇提取物可提高去勢(shì)骨質(zhì)疏松癥大鼠的骨密度，改善骨代謝水平和骨組織病變，其機(jī)制可能與上調(diào)OPG表達(dá)，抑制RANKL、NF-κB表達(dá)有關(guān)。本研究?jī)H通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證雙藤湯醇提取物對(duì)骨質(zhì)疏松大鼠的治療效果，但雙藤湯醇提取物在臨床治療骨質(zhì)疏松的療效及可行性尚未討論，仍需進(jìn)一步研究。