嚴(yán)志宏 張開(kāi)榮 頓珠次仁

（1.江西中醫(yī)藥大學(xué)，江西 南昌 330004；2.西藏藏醫(yī)藥大學(xué)，西藏 拉薩 850000）

蒲公英是一種藥食兩用的植物，別名婆婆丁、白鼓丁、華花郎、黃花地丁等，主要分布于東北、華北、華東、華中、西南及陜西、甘肅、青海等地[1]。始載于《唐本草》，2015 版《中國(guó)藥典》收載為菊科植物蒲公英（Taraxacum mongolicum Hand.-Mazz.），堿地蒲公英（T.sinicum Kitag），或同屬數(shù)種植物的干燥全草[2]。蒲公英味苦、甘、性寒。具有清熱解毒、消腫散結(jié)、利尿通淋的功效。主治乳癰，也可用于疔瘡腫毒、瘰疬、目赤、咽痛、肺癰、腸癰、濕熱黃疸、熱淋澀痛等。蒲公英中含有多種化學(xué)成分，包括皂苷類、萜類、多糖類、有機(jī)酸、黃酮類、揮發(fā)油類等化學(xué)成分。近幾年有研究表明：蒲公英揮發(fā)油具有明顯的抗炎活性和抗乳腺癌作用[3]。但是目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)蒲公英的化學(xué)成分研究比較全面，但對(duì)其揮發(fā)性成分研究還較少，基本停留在早期的一些基礎(chǔ)研究上[2]。特別是關(guān)于不同產(chǎn)地和品種間的研究極少。

目前對(duì)蒲公英揮發(fā)性成分化學(xué)成分提取和分析的方法主要有水蒸氣蒸餾法、頂空固相微萃?。℉S-SPME）、溶劑提取法、同時(shí)蒸餾萃取法、亞臨界流體、超臨界CO2萃取法等結(jié)合GC 或GCMS[3-9]。水蒸氣蒸餾和溶劑萃取法等結(jié)合GC 或GC-MS 是分析中草藥中揮發(fā)油的傳統(tǒng)方法。但是，它需要相對(duì)大量的樣品，并且會(huì)造成部分分析物的損失。而HS-GC-MS 的分析方法可以分離和鑒定揮發(fā)油，此方法快速、準(zhǔn)確，彌補(bǔ)了傳統(tǒng)方法的不足。而且頂空分析作為一種無(wú)有機(jī)溶劑萃取的樣品處理技術(shù)，通常與氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS) 技術(shù)結(jié)合用來(lái)分析復(fù)雜基質(zhì)中的揮發(fā)性有機(jī)物，具有快速、高效、環(huán)保、靈敏度高等特點(diǎn)，在常規(guī)分析中發(fā)揮著重要作用，在中草藥中揮發(fā)性的分離和鑒定方面具有廣闊的前景[10]。

本課題首次采用HS-GC-MS 分析蒲公英揮發(fā)性成分，分析時(shí)將干燥粉碎的蒲公英藥材裝入頂空樣品瓶中，經(jīng)加熱平衡后，取揮發(fā)性氣體直接進(jìn)入GC-MS 系統(tǒng)進(jìn)行分析，大大減少了樣品預(yù)處理的復(fù)雜操作，并且避免一些化學(xué)成分加熱分解、轉(zhuǎn)化的可能，并且可快速分析蒲公英揮發(fā)性成分，通過(guò)比較不同產(chǎn)地蒲公英揮發(fā)性成分的種類和含量的差異，探討不同產(chǎn)地蒲公英的質(zhì)量情況，為蒲公英揮發(fā)性成分的進(jìn)一步研究和蒲公英質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)儀器與藥材

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

Agilent 7697A 自動(dòng)頂空進(jìn)樣器、7890A 型氣相色譜儀、5975C 單四極桿質(zhì)譜儀(安捷倫公司，美國(guó))、電子天平（型號(hào)YHC-11002B，瑞安市英衡電器有限公司監(jiān)制）、20 ml頂空瓶(安捷倫公司，美國(guó))。

1.2 藥材

蒲公英藥材來(lái)自河南、云南、安徽（三種網(wǎng)購(gòu)于天貓）、江西（購(gòu)于江西永樂(lè)大藥房）、吉林（購(gòu)于北京同仁堂）、甘肅（購(gòu)于安徽益豐大藥房）。經(jīng)江西中醫(yī)藥大學(xué)龔千鋒教授鑒定為菊科植物蒲公英T.mongolicum、堿地蒲公英T.borealisinense或同屬數(shù)種植物的干燥全草。

1.3 樣品制備

蒲公英藥材用粉碎機(jī)粉碎，再用分析天平精密稱取1.40 g 的不同產(chǎn)地蒲公英樣品，分別裝入未使用過(guò)潔凈的20 mL頂空瓶中密封,待測(cè)。

2 方法

2.1 實(shí)驗(yàn)方法優(yōu)化

本實(shí)驗(yàn)對(duì)樣品質(zhì)量，頂空溫度等條件進(jìn)行優(yōu)化，確定頂空氣相色譜-質(zhì)譜法檢測(cè)蒲公英揮發(fā)性成分的最佳方法。分別精密稱取安徽產(chǎn)蒲公英粉末1.00g、1.20g、1.40g、1.60g、1.80g、2.00g 分別在頂空溫度為100℃、110℃、120℃、130℃條件下進(jìn)行試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1 和圖1。

表1 蒲公英在不同樣品用量和不同樣品加熱溫度條件下的出峰個(gè)數(shù)

圖1 蒲公英的樣品用量和頂空溫度對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響

由表1 和圖1 可知，當(dāng)樣品用量為1.40g，頂空溫度為130℃時(shí)，檢出峰個(gè)數(shù)最多，檢測(cè)結(jié)果最好。最后，在樣品用量為1.40g，樣品加熱溫度為130℃的條件下，對(duì)氣相色譜的程序升溫等條件進(jìn)行優(yōu)化，得出最佳檢測(cè)條件，然后在此條件下分析六種不同產(chǎn)地蒲公英的揮發(fā)性成分。

2.2 頂空進(jìn)樣條件

樣品用量為1.40 g；樣品瓶加熱溫度130℃；定量環(huán)溫度140℃；傳輸線150℃；樣品瓶加熱時(shí)間為20 min；樣品環(huán)平衡時(shí)間0.05 min；進(jìn)樣時(shí)間1 min。

2.3 氣相色譜條件

HP-5 毛細(xì)管柱型彈性色譜柱(0.25μm×250 μm×30m)；載氣：高純氦氣，純度≥99.999%；柱流量1.0mL/min；分流進(jìn)樣，分流5:1；進(jìn)樣量1.0mL，進(jìn)樣口溫度為250℃。程序升溫條件：初始溫度為30℃(保持3min)，以2℃/min 的速度升溫至40℃(保持2 min)，再以3℃/min 的速度升溫至80℃保持1min，然后以6℃/min 的速度升溫至200℃，保持1min，最后以10℃/min 的速度升溫至250℃，保持5min。

2.4 質(zhì)譜條件

EI 離子源，電子能量70 e V；離子源溫度230℃；傳輸線溫度為280℃；四級(jí)桿溫度為150℃；全掃描模式；掃描范圍：m/z50～650。

2.5 數(shù)據(jù)處理

總離子流圖中的各個(gè)峰經(jīng)質(zhì)譜掃描后得到質(zhì)譜圖，利用氣相色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)通過(guò)NIST11.L 譜庫(kù)檢索并結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)鑒定檢測(cè)出的成分，對(duì)檢出的成分按峰面積歸一化法計(jì)算各成分在總揮發(fā)性成分中的相對(duì)百分含量。

3 檢測(cè)結(jié)果

從不同產(chǎn)蒲公英中分離和鑒定出的成分個(gè)數(shù)分別為甘肅75 種，鑒定48 種、安徽63 種，鑒定38種、河南60 種、鑒定出35 種、江西45 種，鑒定出33種、吉林63 種、鑒定出46 種、云南51 種，鑒定34 種。六個(gè)產(chǎn)地共鑒定出88 種化學(xué)成分，主要以醛類、酯類、酮類、烯烴和烷烴類物質(zhì)為主，有17 種成分為六個(gè)產(chǎn)地蒲公英共有。各產(chǎn)地鑒定出的揮發(fā)性成分含量占蒲公英總揮發(fā)性成分含量分別為甘肅77.8 %、安徽83.56 %、河南69.42 %、江西75.94 %、吉林73.69 %、云南85.17 %.此外，本次還從蒲公英中發(fā)現(xiàn)了十六烷酸丁基酯、2,3-二氫-2,2,6-三甲基苯甲醛、硬脂酸丁酯、異丁醛、異戊醛、Trans-2-(2-Pentenyl)furan，5-(1,1-dimethylethyl)-1,3-Cyclopentadiene等共有成分，其來(lái)源和藥理作用還有待進(jìn)一步確定?？傠x子流圖見(jiàn)圖2，所鑒定出的成分見(jiàn)表2 和其共有成分見(jiàn)表3。

圖2 不同產(chǎn)地蒲公英揮發(fā)性成分總離子流圖

表2 六個(gè)不同產(chǎn)地?fù)]發(fā)性成分

表2 （續(xù)）

表2 （續(xù)）

表3 六個(gè)產(chǎn)地共有成分

在檢測(cè)并鑒定出的揮發(fā)性成分中，六個(gè)產(chǎn)地均以醛類成分為主，除安徽外5 個(gè)產(chǎn)地都是2-甲基丁醛含量最高，占揮發(fā)性總成分含量的17%以上，安徽蒲公英二甲基硫醚含量最高（26.63%），但其2-甲基丁醛的相對(duì)含量也在20 %以上。其中有二甲基硫醚、異丁醛、異戊醛、2-甲基丁醛4 種醛類化學(xué)成分較高（均在5 %以上），含量總和占蒲公英揮發(fā)性總成分的45 %以上，其他含量較高的共有成分還有2-乙基呋喃、苯乙醛、苯甲醛、2-正戊基呋喃、正己醛五種，由此可知：這9 種成分是其揮發(fā)性成分中的主要成分，但與已報(bào)道的文獻(xiàn)[3-7]中其揮發(fā)油的主要成分不同，可能是研究人員所用方法。

5 結(jié)論

六種不同產(chǎn)地蒲公英揮發(fā)性成分的種類有較大差異，以甘肅產(chǎn)的蒲公英中檢測(cè)和鑒定出的成分最多，江西產(chǎn)的蒲公英最少，但是六個(gè)產(chǎn)地的蒲公英主要成分基本一致，只是含量稍有差異，有17 種成分為六個(gè)產(chǎn)地蒲公英共有。另外有44種成分為各個(gè)產(chǎn)地獨(dú)有，且含量較低，其中河南產(chǎn)的蒲公英只檢測(cè)出兩種特有成分，其他產(chǎn)地的蒲公英均有6 種以上。其他成分均在兩種以上產(chǎn)地中存在。藥用植物的揮發(fā)性成分的含量和種類存在差異，具有明顯的科屬和種的特異性［11］。劉鵬巖［5］等也發(fā)現(xiàn)蒲公英和高山蒲公英的揮發(fā)油成分種類各異，但其主要成分相同。

不同產(chǎn)地蒲公英在揮發(fā)性成分的種類和含量上存在差異，在一定程度上也反映了目前市場(chǎng)上蒲公英藥材的質(zhì)量參差不齊。從檢測(cè)出的揮發(fā)性成分種類來(lái)看吉林和甘肅等產(chǎn)地的蒲公英最多，江西產(chǎn)蒲公英檢測(cè)出的成分最少，這說(shuō)明各產(chǎn)地蒲公英質(zhì)量不一樣，江西的蒲公英質(zhì)量較差。蒲公英主要分布于東北、華北、華東、華中、西南及陜西、甘肅、青海等地?！侗静菥V目》中也有“地丁，江之南北頗多，他處亦有之，嶺南決無(wú)”［1］。況且中國(guó)植物志中顯示蒲公英的產(chǎn)地沒(méi)有江西，這也驗(yàn)證了江西的環(huán)境不適合蒲公英生長(zhǎng)，江西產(chǎn)蒲公英質(zhì)量不如其他產(chǎn)地。至于其具體原因，還有待進(jìn)一步研究。