孫軍萍 黎宗保 韓耀光

(海南省三亞中心醫(yī)院 海南省第三人民醫(yī)院內(nèi)分泌科，海南 三亞 572000)

我國(guó)2型糖尿病(T2DM)發(fā)病人數(shù)呈逐年上升的趨勢(shì)〔1〕。目前發(fā)現(xiàn)與T2DM發(fā)病相關(guān)的多個(gè)基因位點(diǎn)〔2〕，越來(lái)越多的易感基因也逐漸被人們挖掘。在目前被發(fā)現(xiàn)的18個(gè)與T2DM相關(guān)的基因(區(qū))中，甲狀腺腺瘤相關(guān)基因(THADA)最早是被全基因組關(guān)聯(lián)研究(GWAS)發(fā)現(xiàn)的與歐洲人T2DM相關(guān)的易感基因之一，長(zhǎng)度約365 kb，具有38個(gè)外顯子，位于人類(lèi)染色體2p21〔3〕。海南為移民島，生活習(xí)慣和工作均有其特殊性，與福建省等緯度接近的省份比，其T2DM發(fā)病率較高，海南四季天氣嚴(yán)酷，長(zhǎng)期室外勞作，體力消耗大和部分居民缺乏鍛煉，T2DM早期診斷和控制效果均較差〔4〕。本研究利用HapMap數(shù)據(jù)庫(kù)，并另外選擇5個(gè)位點(diǎn)研究THADA單核苷酸多態(tài)性(SNP)與海南省漢族人群T2DM的關(guān)聯(lián)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2014年6月至2017年6月海南省三亞中心醫(yī)院T2DM患者124例和糖耐量正常者(NGT組)120例。納入標(biāo)準(zhǔn)〔5〕：①所有患者符合WTO1990中關(guān)于T2DM的診斷；②個(gè)體間無(wú)血緣關(guān)系。排除標(biāo)準(zhǔn)：①具有潛在特殊類(lèi)型糖尿病者如1型糖尿病(T1DM)及成年型糖尿病(MODY)；②合并甲狀腺疾病、腫瘤疾病、風(fēng)濕、類(lèi)風(fēng)濕疾病及糖皮質(zhì)激素治療者。NGT者入選標(biāo)準(zhǔn)：①口服葡萄糖耐量試驗(yàn)(OGTT)、空腹血糖(FPG)和餐后2 h血糖(2 hPG)正常；②無(wú)T2DM家族史。兩組男女比例及男性腰圍無(wú)差異(P>0.05)，與NGT組比較，T2DM組年齡較高、男性和女性的糖化血紅蛋白(HbA1c)、空腹胰島素(Fins)、FPG、2 hPG和腰臀比(WHR)較高，體重指數(shù)(BMI)較低(P<0.05，P<0.001)，見(jiàn)表1。

表1 兩組臨床特征比較

1.2方法 詢問(wèn)受試者病史及家族史，空腹10 h后測(cè)量體重、身高、腰圍、計(jì)算BMI及測(cè)量右上臂血壓。均行75 g OGTT，取OGTT 2 h胰島素及血糖、Fins及FPG。胰島素抵抗評(píng)價(jià)采用胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR，F(xiàn)PG×Fins/22.5)，胰島細(xì)胞功能評(píng)價(jià)采用胰島β細(xì)胞功能指數(shù)(HOMA-β，20×Fins/22.5)。采用葡萄糖氧化法測(cè)定血糖，化學(xué)發(fā)光免疫法測(cè)定胰島素。基因分型：采用鹽析法提取外周血白細(xì)胞DNA。在HapMap數(shù)據(jù)庫(kù)基礎(chǔ)上，增加THADA區(qū)域前后5 kb和10 kb的序列信息，條件：r2>0.8、MAF>0.1并選擇tag單核苷酸多態(tài)性(SNP)。單堿基延伸的引物和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)多重反應(yīng)采用Iplex Gold技術(shù)設(shè)計(jì)，基因分型采用質(zhì)譜技術(shù)，各位點(diǎn)重復(fù)分型對(duì)10%的樣本量進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算各位點(diǎn)基因分型結(jié)果符合率使分型質(zhì)量得已驗(yàn)證。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用Plin1.06軟件、SAS軟件、Qvanto軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)、線性回歸分析、效力檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1海南省漢族人群T2DM與THADA基因SNP的關(guān)聯(lián) 120例NGT人群和124例T2DM患者成功分型了THADA基因區(qū)域的5個(gè)位點(diǎn)：rs13026309、rs6739828、rs4952986、rs13022691和rs13029250。分型成功率>94%，重復(fù)10%樣本量的分型結(jié)果一致率>96%。NGT組中THADA基因區(qū)域的5個(gè)位點(diǎn)均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。HapMap中國(guó)漢族人群數(shù)據(jù)庫(kù)的數(shù)據(jù)與次要等位基因頻率數(shù)據(jù)相同。相加遺傳模式中未發(fā)現(xiàn)T2DM與THADA基因區(qū)域的5個(gè)位點(diǎn)相關(guān)。經(jīng)年齡、性別及BMI調(diào)整得P值。顯性和隱性遺傳模式中也未發(fā)現(xiàn)T2DM與5個(gè)位點(diǎn)相關(guān)。見(jiàn)表2。

表2 海南省漢族人群T2DM與THADA基因SNP的關(guān)聯(lián)

2.2不同性別THADA基因rs4952986、rs6739828、rs13022691、rs13029250、rs13026309位點(diǎn)與T2DM的相關(guān)性 經(jīng)調(diào)整BMI和年齡后多重檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)女性組在相加遺傳模式下的rs4952986位點(diǎn)與HOMA-β(P=0.008 9)、HOMA-IR(P=0.012 2)及Fins(P=0.009 5)相關(guān)。3種基因分型中的水平為CC

表3 不同性別THADA基因rs4952986位點(diǎn)與T2DM的相關(guān)性

表4 不同性別THADA基因rs6739828位點(diǎn)與T2DM的相關(guān)性

表5 不同性別THADA基因rs13022691位點(diǎn)與T2DM的相關(guān)性

續(xù)表5 不同性別THADA基因rs13022691位點(diǎn)與T2DM的相關(guān)性

表6 不同性別THADA基因rs13029250位點(diǎn)與T2DM的相關(guān)性

表7 不同性別THADA基因rs13026309位點(diǎn)與T2DM的相關(guān)性

3 討 論

THADA是甲狀腺腺瘤靶向基因，是最早發(fā)現(xiàn)與甲狀腺腺瘤相關(guān)的基因之一。此后有學(xué)者指出在T2DM患者中THADA有異常表達(dá)〔6〕。研究顯示〔7〕，德國(guó)萊比錫人群中T2DM被發(fā)現(xiàn)與THADA基因存在相關(guān)聯(lián)的傾向，此外該基因還與0.5 Fins及FPG具有密切聯(lián)系。在此基礎(chǔ)上有國(guó)外研究報(bào)道〔8～10〕T2DM在丹麥錫克族、印度、芬蘭、意大利人群中未見(jiàn)與THADA基因相關(guān)傾向。

本研究選取的人群及THADA基因位點(diǎn)與其他研究小組具有一定差別，報(bào)道顯示〔11〕，THADA基因與T2DM表型相關(guān)的位點(diǎn)在歐洲人群HapMap數(shù)據(jù)庫(kù)中基因頻率為0.917∶0.083，但在中國(guó)漢族人群中該比例為1∶0。本研究結(jié)果顯示，與T2DM表型相關(guān)的rs4952986位點(diǎn)在歐洲人群HapMap數(shù)據(jù)庫(kù)中基因頻率為1∶0，但是在中國(guó)漢族中基因頻率為0.6∶0.4，因此在歐洲人群中該位點(diǎn)不存在多態(tài)性，研究顯示〔12，13〕該位點(diǎn)是亞洲人群獨(dú)特位點(diǎn)，因此研究該位點(diǎn)對(duì)了解中國(guó)T2DM患者中相關(guān)表型具有一定意義。本研究結(jié)果顯示，在NGT人群中HOMA-IR、HOMA-β及Fins水平與rs4952986位點(diǎn)T等位基因表達(dá)水平呈現(xiàn)明顯正相關(guān)。研究顯示〔14，15〕在機(jī)體附帶胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)下，NGT人群中攜帶該位點(diǎn)的患者，血液生化檢測(cè)可見(jiàn)胰島素水平增加，胰腺β細(xì)胞功能亢進(jìn)，進(jìn)而能夠維持機(jī)體血糖水平處于正常水平。本研究在男性患者中未見(jiàn)HOMA-IR、HOMA-β及Fins水平與rs4952986位點(diǎn)T等位基因表達(dá)水平相關(guān)，但是在所有女性患者中存在明顯上述關(guān)聯(lián)。主要原因：①入組男性患者中按照國(guó)際糖尿病協(xié)會(huì)對(duì)中國(guó)向心性肥胖患者制定標(biāo)準(zhǔn)，在本研究中的男性患者腰圍低于國(guó)際糖尿病協(xié)會(huì)制定的肥胖切點(diǎn)，而女性患者腰圍滿足上述標(biāo)準(zhǔn)；②本研究中入組男性患者樣本量較少，而女性樣本量較大，因此在男性患者中易出現(xiàn)假陰性，進(jìn)而導(dǎo)致結(jié)果誤差。此外本研究發(fā)現(xiàn)女性與男性胰島素抵抗能力方面背景具有差異，本研究認(rèn)為與HOMA-IR、HOMA-β及Fins水平與rs4952986位點(diǎn)未在本研究男性患者中觀察到有關(guān)。rs4952986不編碼蛋白，其位于THADA基因內(nèi)含子區(qū)，研究顯示，rs4952986位點(diǎn)上攜帶T等位基因數(shù)量與Fins水平及胰島素抵抗能力、胰島細(xì)胞分泌功能亢進(jìn)呈正相關(guān)，本研究認(rèn)為與rs4952986位點(diǎn)參與THADA基因表達(dá)調(diào)控相關(guān)。