和向蓮

【摘要】目的：對小型血站核酸檢測實(shí)驗(yàn)室乙型肝炎病毒（HBV）DNA項(xiàng)目檢測的室內(nèi)質(zhì)量控制方法進(jìn)行分析和探討。方法：以我站2018年6月1日至2021年5月31日期間收集的20464份無償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本，所有標(biāo)本經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測后均呈現(xiàn)為非反應(yīng)性，分241批次進(jìn)行乙型肝炎病毒（HBV）DNA測定。將HBV DNA陽性質(zhì)控品、試劑盒陽性對照為反應(yīng)性，將試劑盒陰性對照為陰性，且內(nèi)標(biāo)陽性為實(shí)驗(yàn)在控。記錄前3個月20批次的檢測數(shù)據(jù)，以其為依據(jù)對陽性質(zhì)控品循環(huán)域值（Ct）、陽性對照Ct值、內(nèi)標(biāo)Ct均值以及標(biāo)準(zhǔn)差進(jìn)行計算。再進(jìn)一步繪制Levey-Jenning質(zhì)控圖，采用Westgard多規(guī)則質(zhì)控方法判斷。對標(biāo)本總數(shù)、混樣反應(yīng)性、拆分反應(yīng)性次數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計，并最終計算混檢陽性率、拆分陽性率、拆出率等總體質(zhì)量監(jiān)控指標(biāo)。結(jié)果：本次研究所有批次的實(shí)驗(yàn)均在控。其中，陽性質(zhì)控品Ct值在第21批次、內(nèi)標(biāo)Ct均值在第30批次發(fā)生13s失控。共檢測標(biāo)本241批次，混檢陽性率、拆分陽性率和拆出率分別為0.34‰、0.29‰、85.17%。結(jié)論：對于小型血站血液篩查檢測而言，在使用HBV DNA陽性質(zhì)控品判定作為實(shí)驗(yàn)在控基礎(chǔ)的同時，還可進(jìn)一步對陽性質(zhì)控品、試劑盒陽性對照Ct值以及內(nèi)標(biāo)Ct均值的Levey-Jenning質(zhì)控圖和總體監(jiān)控指標(biāo)進(jìn)行回顧性分析，以此實(shí)現(xiàn)更加有效的HBV DNA項(xiàng)目檢測質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】小型血站核酸檢測實(shí)驗(yàn)室;HBV DNA;室內(nèi)質(zhì)量控制

【中圖分類號】R44 ? 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A ? 【文章編號】2026-5328（2021）09--01

室內(nèi)質(zhì)量控制是我國醫(yī)療衛(wèi)生行業(yè)對于血站核酸檢測的強(qiáng)制性要求，是保證檢測結(jié)果準(zhǔn)確性和有效性的前提所在[1]。目前，我國血站關(guān)于血液篩查核酸檢測的質(zhì)量控制尚未建立起統(tǒng)一的質(zhì)控方案[2]。本次研究結(jié)合本血站的基本情況，分析探討了小型血站核酸檢測實(shí)驗(yàn)室HBV DNA項(xiàng)目室內(nèi)質(zhì)量控制方法。現(xiàn)報告如下。

1.資料與方法

1.1一般資料

本次研究標(biāo)本共計20464份，分241批次檢測，均為2018年6月1日至2021年5月31日期間收集的，經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測后均呈現(xiàn)為非反應(yīng)性的無償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本。

1.2方法

本次研究所用試劑盒、儀器如下：

HBV DNA陽性質(zhì)控品，北京康徹思坦公司生產(chǎn)，規(guī)格為1.0mL/支，濃度為200IU/mL;

含陰、陽性對照的HBV、丙型肝炎病毒、人類免疫缺陷病毒（I型）核酸檢測試劑盒，上海科華公司生產(chǎn);

ABI7500實(shí)時熒光PCR擴(kuò)增儀，美國ABI公司生產(chǎn);

MicrolabSTAR全自動樣本處理儀，瑞士HAMILTON公司生產(chǎn)。

在8份標(biāo)本混檢模式下，嚴(yán)格依據(jù)試劑盒說明書的各項(xiàng)步驟對每批次核酸進(jìn)行檢測。每批實(shí)驗(yàn)中均包括陽性質(zhì)控品、陽性對照、陰性對照各1個。若檢測結(jié)果顯示，HBV DNA陽性質(zhì)控品、試劑盒陽性對照呈現(xiàn)為反應(yīng)性，試劑盒陰性對照呈現(xiàn)為陰性，且內(nèi)標(biāo)顯示為陽性，則認(rèn)為該批實(shí)驗(yàn)在控。

1.3觀察指標(biāo)

統(tǒng)計每批次實(shí)驗(yàn)的陽性質(zhì)控品Ct值、陽性對照Ct值、內(nèi)標(biāo)Ct均值，以前20次數(shù)據(jù)為基準(zhǔn)，用Excel軟件繪制Levey-Jenning質(zhì)控圖。

使用Westgard多規(guī)則質(zhì)控方法根據(jù)Levey-Jenning質(zhì)控圖進(jìn)行判斷，得到回顧性分析結(jié)果。

對3年內(nèi)所有檢測標(biāo)本的混檢陽性率、拆分陽性率以及拆出率進(jìn)行計算。

2.結(jié)果

2.1實(shí)驗(yàn)在控判定結(jié)果

在3年的檢測中，所得到的各個批次檢測數(shù)據(jù)顯示，所有實(shí)驗(yàn)HBV DNA陽性質(zhì)控品、試劑盒陽性對照以及陰性對照均滿足反應(yīng)性或者陰性的判定規(guī)則，且內(nèi)標(biāo)顯示為陽性，據(jù)此認(rèn)為本次研究中的各個批次實(shí)驗(yàn)均在控。

2.2回顧性分析結(jié)果

所有結(jié)果均服從正態(tài)分布，計算得到的實(shí)驗(yàn)累積均值、標(biāo)準(zhǔn)差、變異系數(shù)如表1所示。

整合前20次實(shí)驗(yàn)批次數(shù)據(jù)，繪制Levey-Jenning質(zhì)控圖，使用Westgard多規(guī)則質(zhì)控方法進(jìn)行質(zhì)量控制判斷。數(shù)據(jù)顯示，陽性質(zhì)控品在第1、10、20批次發(fā)生了12s警告，第21批次發(fā)生13s失控，第23批次違背41s規(guī)則。陽性對照在第15、20、24、29批次發(fā)生12s警告。內(nèi)標(biāo)Ct均值在第25批次發(fā)生12s警告，第30批次發(fā)生13s失控。

2.3總體監(jiān)控指標(biāo)分析結(jié)果

在3年的檢測時間內(nèi)，累及檢測20464份標(biāo)本，HBV DNA混樣反應(yīng)性共7次，拆分反應(yīng)性6次。20464份標(biāo)本的總體監(jiān)控指標(biāo)分析結(jié)果如表2所示。

3.討論

在本次研究中，我們選擇了濃度為200IU/mL的質(zhì)控品，并設(shè)立了質(zhì)控品和陽性對照，目的在于排除假陰性和假陽性[3]。本次研究數(shù)據(jù)顯示，各項(xiàng)結(jié)果均服從正態(tài)分布，遂進(jìn)一步繪制Levey-Jenning質(zhì)控圖進(jìn)行質(zhì)量控制，并用Westgard多規(guī)則質(zhì)控方法進(jìn)行判斷，將12s作為警告規(guī)則。研究數(shù)據(jù)顯示，實(shí)驗(yàn)中發(fā)生的12s警告，按Westgard規(guī)則依次檢驗(yàn)，均未發(fā)生失控。陽性質(zhì)控品、內(nèi)標(biāo)Ct均值分別在第21批次、30批次違背13s規(guī)則，分析其原因，考慮與質(zhì)控品復(fù)融時間不夠、上樣前混勻不充分有關(guān)[4]，但同時該批實(shí)驗(yàn)結(jié)果的陰、陽性對照和質(zhì)控品有效，因此檢測結(jié)果可接受。在總體監(jiān)控指標(biāo)方面，研究數(shù)據(jù)顯示混檢陽性率為0.34‰、拆分陽性率為0.29‰、拆出率為85.71%%，表明整個核酸檢測過程具有較高的穩(wěn)定性、污染風(fēng)險低[5]。

綜上所述，在小型血站血液篩查檢測中，通過計算分析陽性質(zhì)控品循環(huán)域值（Ct）、陽性對照Ct值、內(nèi)標(biāo)Ct均值繪制Levey-Jenning質(zhì)控圖，再進(jìn)一步進(jìn)行總體監(jiān)控指標(biāo)統(tǒng)計分析觀察實(shí)驗(yàn)的有效性和穩(wěn)定性的方式，可實(shí)現(xiàn)對小型血站HBV DNA檢測的有效質(zhì)量控制、保證檢測效果與效率。

參考文獻(xiàn)：

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[2] 胡紅梅. 血站核酸檢測工作如何控制質(zhì)量[J]. 東方藥膳，2021（5）：3.

[3] 張龍穆，袁欣，楊忠思. 核酸混樣檢測中假反應(yīng)性的原因分析和質(zhì)量控制[J]. 世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘（連續(xù)型電子期刊），2021，21（6）：38-40.

[4] 劉鋒，孫昂，吳曉晉，等. 酶免聯(lián)合核酸檢測技術(shù)對岳陽地區(qū)近4年無償獻(xiàn)血人群檢測結(jié)果分析[J]. 現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2021，37（10）：1705-1708.

[5] 張燕，方建華，葛文超，等. 河南省18家血站2017～2019年HIV/HBV/HCV核酸單獨(dú)陽性結(jié)果趨勢性分析[J]. 中國輸血雜志，2021，34（1）：68-72.