楊 帆，馮文斌，董 馨，馬飛祥，陸景坤，薛培鳳*

1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110

2.呼倫貝爾市中蒙醫(yī)院 藥劑科，內(nèi)蒙古 呼倫貝爾 021000

蒙藥塔布森-2 又稱二味杜仲湯，由杜仲與蒙藥藍(lán)刺頭配伍而成，記載于經(jīng)典的蒙醫(yī)醫(yī)學(xué)著作《蒙醫(yī)金匱》，是蒙醫(yī)治療骨傷的常用方劑，可固骨質(zhì)、接骨愈傷、清赫依，用于治療骨折、骨熱、赫依癥等。應(yīng)用蒙藥二味杜仲湯臨床治療60 例絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥患者，總體治愈率達(dá)到90%[1]。蒙藥二味杜仲湯可通過類雌激素樣作用抑制骨吸收，促進(jìn)骨形成，調(diào)節(jié)骨吸收與骨形成的耦聯(lián)，降低骨轉(zhuǎn)換率，減少骨丟失，延緩絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生發(fā)展過程[2]。

本課題組前期對蒙藥塔布森-2 進(jìn)行了提取工藝、體內(nèi)藥理學(xué)、網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)、藥動學(xué)、血清藥物化學(xué)及血清代謝組學(xué)研究[3-4]，發(fā)現(xiàn)蒙藥塔布森-2能夠明顯改善去勢大鼠骨密度、骨體積/總體積、骨小梁數(shù)量、骨小梁分離度等骨微結(jié)構(gòu)參數(shù)。采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測了蒙藥塔布森-2 與絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松密切相關(guān)的3 個創(chuàng)新性靶點(diǎn)并在血清中進(jìn)行了機(jī)制驗(yàn)證，結(jié)果表明蒙藥塔布森-2 能夠降低血清中維生素D 受體（vitamin D receptor，VDR）、細(xì)胞色素P450 19A1（cytochrome p450 19A1，CYP19A1）含量從而發(fā)揮抗絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的作用。但是僅僅通過藥效學(xué)、藥動學(xué)和血清藥物化學(xué)的研究單一且分散，不能很好地反映蒙藥治療疾病的整體觀。而網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)雖然具有“多成分、多目標(biāo)”的整體觀念，但只能起到預(yù)測的作用。

代謝組學(xué)是繼基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)后興起的系統(tǒng)生物學(xué)分支，被認(rèn)為是最新的“組學(xué)”科學(xué)，可以對來自組織、細(xì)胞或生物體液的小分子代謝產(chǎn)物進(jìn)行全面、系統(tǒng)地分析[5]。代謝物的組成和濃度可能隨著疾病的進(jìn)展而改變，代謝組學(xué)有助于篩選與疾病密切相關(guān)的潛在生物標(biāo)志物或靶向治療途徑的基因[6]。因此，本研究從尿液糞便樣品入手，采用超高效液相色譜聯(lián)用四極桿-靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜（UPLC-Q-Exactive-ΜS）代謝組學(xué)技術(shù)研究蒙藥塔布森-2 對去勢大鼠代謝的調(diào)控作用，以期更加全面地闡述蒙藥塔布森-2 治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的代謝通路。

1 材料

1.1 動物

SPF 級Wistar 雌性大鼠48 只，12 周齡，體質(zhì)量（220±20）g，購自內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物研究中心，動物許可證號SCXK（蒙）2015-0001。動物于溫度20～23 ℃、相對濕度50%～60%、12 h晝夜交替的環(huán)境中適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d，自由進(jìn)食飲水。動物實(shí)驗(yàn)經(jīng)內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)（批準(zhǔn)號YKD2018056）。

1.2 藥材

蒙藥藍(lán)刺頭藥材于2019年8月采自內(nèi)蒙古呼和浩特市武川縣，杜仲藥材（批號112987）購自安徽亳州市大禹藥業(yè)有限公司，經(jīng)內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院薛培鳳教授鑒定分別為菊科植物驢欺口Echinops latifoliusTausch 的干燥花序、杜仲科植物杜仲Eucommia ulmoidesOliv.的干燥樹皮。

1.3 藥品與試劑

結(jié)合性雌激素片（批號20170102，每片含結(jié)合雌激素0.625 mg）購自新疆新姿源生物制藥公司生產(chǎn)；骨疏康顆粒（批號180108073，10 g/袋）購自遼寧康辰藥業(yè)；水合氯醛（批號RH122661）購自羅恩試劑；質(zhì)譜級甲酸、甲醇購自美國Thermo Fisher Scientific 公司；超純水經(jīng)ALH-600-U 凈化系統(tǒng)制備。

1.4 儀器

UPLC-Q-Exactive-ΜS（美國 Thermo Fisher Scientific 公司）；BA210 型數(shù)碼顯微鏡（麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司）；EYELAN-1100 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海愛郎儀器有限公司）；移液槍（德國Eppendorf公司）；離心機(jī)（德國CHRIST 公司）；BCD-290W型電冰箱（青島海爾股份有限公司）。

2 方法

2.1 蒙藥塔布森-2 藥液的制備

根據(jù)本課題組前期確定的蒙藥塔布森-2 的最佳提取工藝進(jìn)行藥液制備，具體操作如下：將方中藍(lán)刺頭與杜仲粉碎后過篩制得粗粉，各取250 g，加入10 倍量蒸餾水浸泡30 min，連續(xù)加熱回流提取2 次，30 min/次。合并濾液，減壓濃縮，冷凍干燥，凍干粉末于4 ℃保存，使用時用適量蒸餾水溶解。該法平均得粉率為25%，蒙藥塔布森-2 藥液含有效成分京尼平苷酸0.100 mg/g、新綠原酸0.086 mg/g、綠原酸0.587 mg/g、京尼平苷0.021 mg/g、松脂醇二葡萄糖苷0.140 mg/g、異綠原酸A 0.116 mg/g、1,5-O-二咖啡?；鼘幩?.070 mg/g、異綠原酸C 0.042 mg/g、紫云英苷0.025 mg/g。

2.2 造模、分組與給藥

大鼠隨機(jī)分為空白組、假手術(shù)組、模型組、結(jié)合雌激素組（0.065 mg/kg）、骨疏康顆粒組（105.1 mg/kg）和蒙藥塔布森-2 高、中、低劑量（950.0、475.0、237.5 mg/kg，分別相當(dāng)于臨床4、2、1 倍劑量）組，每組6 只。除空白組外，其余各組均進(jìn)行卵巢摘除術(shù)，假手術(shù)組只摘除相應(yīng)位置的部分脂肪團(tuán)。術(shù)后連續(xù)3 d 大鼠im 青霉素鈉，防止術(shù)后感染。手術(shù)7 d 后，取空白組和模型組大鼠進(jìn)行陰道上皮角化實(shí)驗(yàn)，每日涂片1 次，連續(xù)觀察5 d，細(xì)胞的形態(tài)及染色情況見圖1，空白組大鼠表現(xiàn)為動情周期交替出現(xiàn)，模型組大鼠連續(xù)5 d 均表現(xiàn)為發(fā)情間期，提示造模成功[7]。蒙藥塔布森-2 凍干粉溶于0.9%氯化鈉溶液，分別配制成質(zhì)量濃度為29.69、59.38、118.75 mg/mL 的溶液；骨疏康顆粒溶于0.9%氯化鈉溶液，分別配制成質(zhì)量濃度為13.14 mg/mL 的溶液；結(jié)合雌激素片溶于0.9%氯化鈉溶液，分別配制成質(zhì)量濃度為8.13 mg/mL 的溶液。手術(shù)7 d 后，各給藥組ig 相應(yīng)藥物，空白組、假手術(shù)組和模型組ig 等體積0.9%氯化鈉溶液，1 次/d，連續(xù)8 周。大鼠末次給藥后，進(jìn)入代謝籠飼養(yǎng)，期間禁食不禁水，24 h 后收集尿液和糞便，迅速分裝后于-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

圖1 顯微鏡下大鼠動情周期陰道涂片F(xiàn)ig.1 Rat estrus cycle vaginal smear under microscope

2.3 UPLC-Q-Exactive-MS 代謝組學(xué)分析

2.3.1 尿液、糞便樣本的處理 取出凍存尿液，自然解凍，每個尿液樣本取200 μL，分別置于干燥的離心管中，加入3 倍量甲醇渦旋3 min，4 ℃、3500 r/min 離心10 min，收集上清液。取出凍存糞便，自然解凍，每個糞便樣本取50 mg，加入3 倍量甲醇進(jìn)行研磨，渦旋5 min，4 ℃、3500 r/min 離心10 min，收集上清液。將所有的上清液于35 ℃減壓干燥后加入200 μL 甲醇復(fù)溶，渦旋3 min，離心，取上清液，經(jīng)0.22 μm 微孔濾膜濾過，轉(zhuǎn)移至自動進(jìn)樣瓶，進(jìn)行UPLC-Q-Exactive-ΜS 分析。

2.3.2 質(zhì)控樣本的處理 將所有待測尿液或糞便樣本按“2.3.1”項(xiàng)下方法處理，得到上清液，各取20 μL，混合成糞便或尿液質(zhì)控樣本，經(jīng)0.22 μm 微孔濾膜濾過，轉(zhuǎn)移至自動進(jìn)樣瓶，進(jìn)行UPLC-QExactive-ΜS 分析。進(jìn)樣時，每走完1 組樣本，插入1 針質(zhì)控樣本。

2.3.3 色譜條件 Waters Acquity UPLC HSS T3 色譜柱（50 mm×2.1 mm，1.8 μm），流動相為甲醇（A）-0.1%甲酸水溶液（B），梯度洗脫：0～1.7 min，5%～15% A；1.7～3.0 min，15%～17% A；3.0～3.3 min，17% A；3.3～8.0 min，17%～25% A；8.0～9.7 min，25%～30% A；9.7～10.6 min，30%～35% A；10.6～14.1 min，35%～55% A；14.1～4.6 min，55% A；14.6～15.1 min，55%～100% A；15.1～17.0 min，100% A；17.0～18.1 min，100%～5% A；18.1～20 min，5% A；柱溫為35 ℃；體積流量為0.4 mL/min；進(jìn)樣量為5 μL。

2.3.4 質(zhì)譜條件 電噴霧離子源（ESI）；正離子模式下離子源電壓為4 kV，鞘氣體積流量為40 L/min；負(fù)離子模式下離子源電壓為3.2 kV，鞘氣體積流量為35 L/min；離子源溫度為350 ℃；飽和輔助氣體積流量為2 L/min；裂解電壓為300 V；霧化氣為氮?dú)?；?shù)據(jù)采集范圍m/z100～1100，采用全掃描方式。

2.3.5 多元數(shù)據(jù)分析及數(shù)據(jù)處理 原始數(shù)據(jù)文件通過Discoverer Compound（CD）? 2.0 軟件，進(jìn)行峰對齊、峰過濾、峰提取和自動積分，最終創(chuàng)建了1個包含相對分子質(zhì)量、保留時間（tR）、峰面積、mzCloud 等信息的多維峰表。利用SIΜCA-P 14.1軟件進(jìn)行主成分分析（principal component analysis，PCA）以識別每組樣品的總體代謝譜。通過正交偏最小二乘法-判別分析（orthogonal partial least squares discriminant analysis，OPLS-DA）對蒙藥塔布森-2 中劑量組和模型組的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，用于降低所獲得的多維復(fù)雜數(shù)據(jù)的維度，繪制出反映組間離散程度的得分圖。

篩選出變量重要性投影值（VIP，variable importance plot）＞1 且P＜0.05 的離子作為潛在的特征性生物標(biāo)志物，將潛在的生物標(biāo)志物與人類代謝組數(shù)據(jù)庫（HΜDB，http://www.hmdb.ca/）和mzCloud（https://www.mzcloud.org/）進(jìn)行生物標(biāo)志物的名稱和HΜDB 編號等信息的匹配。再利用ΜetaboAnalyst（http://www.metaboanalyst.ca/）分析參與代謝的生物通路和意義。

3 結(jié)果

3.1 潛在生物標(biāo)志物的篩選

3.1.1 尿液樣本中潛在生物標(biāo)志物的篩選 各組大鼠尿液的PCA 得分圖見圖2，在正負(fù)離子模式下，質(zhì)控樣品分布集中，顯示出良好的重現(xiàn)性和可靠性；模型組與其他組的數(shù)據(jù)得到了良好區(qū)分，空白組和模型組大鼠樣品距離較遠(yuǎn)，表明造模成功；空白組數(shù)據(jù)有一些離散，可能是由大鼠的個體差異和進(jìn)樣的時間差異導(dǎo)致的。OPLS-DA 是基于偏最小二乘法的降噪方法，可以消除與變量相關(guān)的正交成分，提高模型的準(zhǔn)確度和有效性，很好地揭示組間差異，排除潛在混淆的影響與組差異無關(guān)的變量[8]。為了進(jìn)一步探索蒙藥塔布森-2 治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的尿液潛在生物標(biāo)志物，將蒙藥塔布森-2 中劑量組與模型組進(jìn)行OPLS-DA 分析，見圖3。采用200 次置換檢驗(yàn)的方法對模型進(jìn)行驗(yàn)證，具體擬合參數(shù)結(jié)果見表1，正離子模式下：模型解釋率（R2Y）＝0.998，模型預(yù)測率（Q2）＝0.934；負(fù)離子模式下：R2Y＝0.995，Q2＝0.896，表明模型未過擬合，具有很好的預(yù)測能力及可靠性。模型組與蒙藥塔布森-2 中劑量組樣本具有很好的區(qū)分。結(jié)合VIP-plot 分析結(jié)果，篩選VIP＞1 且P＜0.05 的離子作為差異性代謝物，最終篩選得到28 個潛在差異生物標(biāo)志物見表2，其中正離子15 個、負(fù)離子13 個。

表1 200 次置換檢驗(yàn)后蒙藥塔布森-2 中劑量組與模型組大鼠尿液樣本的OPLS-DA 模型擬合參數(shù)Table 1 OPLS-DA model parameters of urine samples of rats in medium-dose Mongolian medicine Tubson-2 group and model group by 200 permutation tests

表2 蒙藥塔布森-2 中劑量組與模型組大鼠尿液樣本的潛在差異代謝物Table 2 Potential different metabolites in urine samples of rats in medium-dose Mongolian medicine Tubson-2 group and model group

圖2 正離子 (A) 和負(fù)離子 (B) 下各組大鼠尿液樣本的PCA 得分圖Fig.2 PCA score plot of urine samples of rats in each group in positive ion (A) and negative ion (B)

圖3 正離子 (A) 和負(fù)離子 (B) 下蒙藥塔布森-2 中劑量組與模型組大鼠尿液樣本的OPLS-DA 得分圖Fig.3 OPLS-DA score plot of urine samples of rats in medium-dose Mongolian medicine Tubson-2 group and model group in positive ion (A) and negative ion (B)

3.1.2 糞便樣本中潛在生物標(biāo)志物的篩選 各組大鼠的糞便代謝輪廓PCA 得分圖見圖4，在正負(fù)離子模式下，質(zhì)控樣品均顯示出良好的集中趨勢，表明本次實(shí)驗(yàn)的可靠性。為了篩選糞便樣本中蒙藥塔布森-2 治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的潛在生物標(biāo)志物，進(jìn)一步采用有監(jiān)督的OPLS-DA，可以更好地獲取組間差異信息，并對樣品的分組進(jìn)行預(yù)測，結(jié)果見圖5。采用200 次響應(yīng)排列測試對模型的質(zhì)量進(jìn)行研究，模型未過擬合，具有很好的預(yù)測能力及可靠性，具體擬合參數(shù)見表3，表明模型組與蒙藥塔布森-2 中劑量組樣本得到了良好的區(qū)分。結(jié)合VIP-plot 分析結(jié)果，篩選VIP＞1 且P＜0.05 的離子作為差異性代謝物，最終篩選得到28 個潛生物標(biāo)志物見表4，其中正離子19 個、負(fù)離子9 個。

表3 200 次置換檢驗(yàn)后蒙藥塔布森-2 中劑量組與模型組大鼠糞便樣本的OPLS-DA 模型擬合參數(shù)Table 3 OPLS-DA model parameters of feces samples of rats in medium-dose Mongolian medicine Tubson-2 group and model group by 200 permutation tests

表4 蒙藥塔布森-2 中劑量組與模型組大鼠糞便樣本的潛在差異代謝物Table 4 Potential different metabolites in feces samples of rats in medium-dose Mongolian medicine Tubson-2 group and model group

圖4 正離子 (A) 和負(fù)離子 (B) 下各組大鼠糞便樣本的PCA 得分圖Fig.4 PCA score plot of feces samples of rats in each group in positive ion (A) and negative ion (B)

圖5 正離子 (A) 和負(fù)離子 (B) 下蒙藥塔布森-2 中劑量組與模型組大鼠糞便樣本的OPLS-DA 得分圖Fig.5 OPLS-DA score plot of feces samples of rats in medium-dose Mongolian medicine Tubson-2 group and model group in positive ion (A) and negative ion (B)

3.2 代謝通路的分析

3.2.1 尿液樣本中潛在生物標(biāo)志物的代謝通路分析 為了進(jìn)一步探索蒙藥塔布森-2 調(diào)節(jié)去勢大鼠尿液潛在生物標(biāo)志物的代謝通路，將上述分析得到的28 個差異性代謝物導(dǎo)入ΜetaboAnalyst 數(shù)據(jù)庫對鑒定出的差異代謝生物標(biāo)志物進(jìn)行代謝通路的富集，將通路影響值＞0.1 的代謝通路作為目標(biāo)代謝通路。如圖6和表5所示，蒙藥塔布森-2 主要通過參與組氨酸代謝、牛磺酸和亞?；撬岬拇x以及丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代謝3 個代謝通路來治療去勢大鼠的絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥。

圖6 蒙藥塔布森-2 調(diào)節(jié)去勢大鼠尿液潛在生物標(biāo)志物的代謝通路Fig.6 Metabolic pathway of Mongolian medicine Tubson-2 regulated potential biomarkers in urine of ovariectomized rats

表5 蒙藥塔布森-2 調(diào)節(jié)去勢大鼠尿液潛在生物標(biāo)志物的代謝通路分析Table 5 Metabolic pathways analysis of Tubson-2 regulated potential biomarkers in urine of ovariectomized rats

3.2.2 糞便樣本中潛在生物標(biāo)志物的代謝通路分析 為了進(jìn)一步探索蒙藥塔布森-2 調(diào)節(jié)去勢大鼠糞便潛在生物標(biāo)志物的代謝通路，將上述分析得到的28 個差異性代謝物導(dǎo)入ΜetaboAnalyst 數(shù)據(jù)庫進(jìn)行代謝通路富集，將通路影響值＞0.1 的代謝通路作為目標(biāo)代謝通路。如圖7和表6所示，蒙藥塔布森-2 主要通過參與維生素B6代謝、丙氨酸，天冬氨酸和谷氨酸代謝、谷氨酰胺和谷氨酸代謝3 個代謝通路來治療去勢大鼠的絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥。

表6 蒙藥塔布森-2 調(diào)節(jié)去勢大鼠糞便潛在生物標(biāo)志物的代謝通路分析Table 6 Metabolic pathways analysis of Mongolian medicine Tubson-2 regulated potential biomarkers in feces of ovariectomized rats

圖7 蒙藥塔布森-2 調(diào)節(jié)去勢大鼠糞便潛在生物標(biāo)志物的代謝通路Fig.7 Metabolic pathway of Mongolian medicine Tubson-2 regulated potential biomarkers in feces of ovariectomized rats

4 討論

骨質(zhì)疏松癥是一種由多種原因引起的代謝性骨疾病，隨著世界老齡化進(jìn)程的加速，骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病率已躍居慢性病第3 位。我國骨質(zhì)疏松癥的總患病率平均為13%[9]。其中最常見的類型為絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥，它是一種由雌激素缺少而導(dǎo)致的骨量低下、骨質(zhì)量受損及骨強(qiáng)度降低的原發(fā)性I 型骨質(zhì)疏松疾病。目前雌激素代替療法仍然為治療絕經(jīng)型骨質(zhì)疏癥的“黃金手段”，但是長期采用此療法會誘發(fā)卵巢疼痛和浸潤性乳腺癌[10]。因此尋找安全可靠的抗絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松藥物意義重大。

通過對大鼠的尿液樣品、糞便樣品的代謝組學(xué)分析可知，蒙藥塔布森-2 治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥與多條代謝通路的紊亂相關(guān)，包括丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代謝及?；撬岷蛠喤；撬岬拇x、組氨酸代謝和維生素B6代謝。其中丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代謝為尿液、糞便樣本中共同存在的代謝通路。天冬氨酸是一種興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，參與機(jī)體內(nèi)多種代謝過程，通常情況下，機(jī)體代謝發(fā)生異常均會引起丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代謝的紊亂。模型組大鼠尿液、糞便樣本中天冬氨酸水平均有所升高，而蒙藥塔布森-2 能夠顯著回調(diào)天冬氨酸水平，其發(fā)生機(jī)制和變化的意義尚缺乏文獻(xiàn)報道，需要進(jìn)一步研究。

組氨酸代謝主要通過下調(diào)組氨酸及上調(diào)尿刊酸水平來干擾組氨酸代謝的紊亂，進(jìn)而控制去勢大鼠的骨質(zhì)疏松進(jìn)程，達(dá)到治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的作用。組氨酸脫羧基生成組氨，組氨可以間接增加破骨細(xì)胞的數(shù)量和活性，進(jìn)而導(dǎo)致骨質(zhì)疏松癥和異常骨組織形態(tài)學(xué)指標(biāo)的發(fā)生[11]，組氨酸的水平降低能夠抑制破骨細(xì)胞活性，降低骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生率。本研究結(jié)果顯示，經(jīng)蒙藥塔布森-2 治療后大鼠尿液中組氨酸水平下降，尿刊酸水平上升，進(jìn)而減輕絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的程度。尿刊酸是由L-組氨酸通過組氨酸解氨酶脫氨而來，是組氨酸的下游產(chǎn)物[12]。蒙醫(yī)理論認(rèn)為，骨病的治療原則與赫依盛型腎病相吻合，因此推測尿刊酸可能通過影響腎功能進(jìn)而影響骨代謝。牛磺酸是?；撬崤c亞?；撬岽x通路的關(guān)鍵代謝物，具有抗氧化應(yīng)激的作用，能夠提高超氧化物歧化酶活性、降低丙二醛水平[13]。研究表明，老年大鼠體內(nèi)雌激素水平下降，導(dǎo)致骨組織中丙二醛水平升高，超氧化物歧化酶活性下降，進(jìn)而造成骨流失[14]。吡哆醛、吡哆醇、吡哆胺是維生素B6的3 種存在形式，而吡哆氨5′-磷酸鹽、4-吡哆酸是維生素B6的2 種活性存在形式，均是維生素B6代謝途徑上的關(guān)鍵代謝產(chǎn)物。飲食中維生素B6的攝入量低或血液中維生素B6的含量低可能是誘導(dǎo)骨質(zhì)疏松癥的重要危險因素[15]。蒙藥塔布森-2 干預(yù)后，大鼠糞便中吡哆醛、吡哆醇、吡哆胺、吡哆氨5′-磷酸鹽、4-吡哆酸的代謝量發(fā)生改變，表明蒙藥塔布森-2 調(diào)節(jié)大鼠機(jī)體內(nèi)的維生素B6代謝進(jìn)而減輕去勢大鼠的骨質(zhì)疏松程度，與本課題組前期血清代謝組學(xué)研究結(jié)果一致，豐富了蒙藥塔布森-2 通過調(diào)節(jié)維生素B6代謝紊亂來治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的科學(xué)內(nèi)涵。

通過分析骨疏康顆粒與雌激素組對去勢大鼠尿液、糞便樣品的潛在生物標(biāo)志物的代謝通路發(fā)現(xiàn)，雌激素通過調(diào)節(jié)三羧酸循環(huán)、牛磺酸和亞?；撬岽x以及丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代謝、苯丙氨酸、絡(luò)氨酸和色氨酸的生物合成和苯丙氨酸代謝來改善去勢大鼠的絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松程度；其中，丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代謝及?；撬岷蛠喤；撬岽x與蒙藥塔布森-2 的代謝組學(xué)研究結(jié)果一致，均調(diào)節(jié)L-天冬氨酸、牛磺酸含量，調(diào)節(jié)趨勢一致，但對?；撬岷康恼{(diào)節(jié)強(qiáng)度較蒙藥塔布森-2 稍弱。骨疏康通過調(diào)節(jié)組氨酸代謝、三羧酸循環(huán)、?；撬岷蛠喤；撬岽x、維生素B6代謝、精氨酸生物合成以及丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代謝來改善絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松程度；其中，組氨酸代謝、牛磺酸和亞?；撬岽x及維生素B6代謝與蒙藥塔布森-2 的代謝組學(xué)研究結(jié)果相同，調(diào)節(jié)趨勢一致，強(qiáng)度相近。

綜上所述，蒙藥塔布森-2 主要通過調(diào)節(jié)組氨酸代謝、牛磺酸和亞?；撬岽x以及丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代謝、維生素B6代謝治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥。此外，蒙藥塔布森-2 在調(diào)節(jié)牛磺酸和亞?；撬岽x紊亂方面優(yōu)于骨疏康顆粒與雌激素，其他通路上的調(diào)節(jié)作用差異不大。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突