劉露 曹劍 許彥 黃志偉 覃貴勇

摘 要 為篩選黨參根腐病最佳抑菌化學(xué)藥劑，在實(shí)驗(yàn)室條件下，采用生長(zhǎng)速率法，選擇苯醚甲環(huán)唑、甲基硫菌靈、噁霉靈、十三嗎啉、噻呋酰胺、福美雙6種常見(jiàn)殺菌劑，每種藥劑設(shè)置5個(gè)濃度梯度，開(kāi)展室內(nèi)毒力測(cè)定試驗(yàn)，研究其菌落生長(zhǎng)及抑制效果。結(jié)果表明：十三嗎啉、甲基硫菌靈對(duì)菌絲生長(zhǎng)有明顯抑制作用，苯醚甲環(huán)唑、噁霉靈、噻呋酰胺能有效減少病菌色素分泌。十三嗎啉、甲基硫菌靈、苯醚甲環(huán)唑?qū)h參根腐病菌的生長(zhǎng)有明顯抑制作用，EC50分別為0.46×10-3、 0.852×10-3、1.31×10-3 g·L-1;福美雙、噁霉靈對(duì)其抑制作用稍弱，EC50分別為154.99×10-3、435.31×10-3 g·L-1。噻呋酰胺對(duì)該病菌基本沒(méi)有抑制效果。

關(guān)鍵詞 黨參根腐病;殺菌劑;室內(nèi)毒力測(cè)定

中圖分類號(hào)：S435.672 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2021.25.007

藥材黨參為桔?？浦参稂h參的干燥根，功效與人參相似，為常用藥材。黨參味甘性平，入脾、肺經(jīng)，是補(bǔ)氣養(yǎng)血的常見(jiàn)藥材。隨著黨參種植面積的持續(xù)擴(kuò)大，部分地區(qū)連作重茬等，病害問(wèn)題已逐漸成為影響黨參產(chǎn)量和品質(zhì)的重要因素之一，其中根腐病是發(fā)生最為常見(jiàn)且嚴(yán)重的病害[1]，根腐病菌的厚垣孢子抗逆性強(qiáng)，在無(wú)寄主存在時(shí)也可在土壤中存活多年，導(dǎo)致發(fā)生愈加嚴(yán)重。黨參根腐病于4月中下旬發(fā)生，平均病株率相對(duì)較低，在8月病株率最高。早期發(fā)病時(shí)，側(cè)根表面或下部須根初現(xiàn)褐色小斑點(diǎn)，輕度腐爛，隨后逐漸蔓延到主根，根部自下向上逐步腐爛，出現(xiàn)黑褐色水漬狀病斑。發(fā)病后，地上部莖和葉隨著根的腐爛由下而上逐漸變黃，以致枯死。如發(fā)病較晚，秋后剩下部分多為半截參。次年春天，留下的半截參雖可發(fā)芽出苗，但不久便會(huì)繼續(xù)腐爛，地上部葉片也相應(yīng)變黃，逐漸枯死[2]。根腐病常常導(dǎo)致黨參產(chǎn)量下降，質(zhì)量變劣，有的甚至完全失去藥用價(jià)值，給藥農(nóng)造成極大損失。根腐病菌的小種較多，各地區(qū)的發(fā)生及防控各有差異，尤其重慶氣候濕潤(rùn)，更適合黨參根腐病的發(fā)生，導(dǎo)致目前重慶黨參根腐病的防控難度較大。本文針對(duì)重慶地區(qū)分離出的致病菌進(jìn)行最佳抑菌劑的篩選試驗(yàn)，希望篩選出較為理想的防治殺菌劑，為該病的綜合防控提供一定依據(jù)。

1? 材料與方法

1.1? 試驗(yàn)材料

1.1.1? 供試菌株

從重慶奉節(jié)黨參（川黨參 Codonopsis tangshen Oliv.）種植基地采集的根腐組織上分離所得菌株，本文編號(hào)為P5。

1.1.2? 供試殺菌劑

此次試驗(yàn)選取市面上常見(jiàn)的，可用于防治根腐病的6種殺菌劑（見(jiàn)表1）。

1.1.3? 培養(yǎng)基

馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基（簡(jiǎn)稱PDA）：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂17 g，蒸餾水1 L。

清水瓊脂培養(yǎng)基（簡(jiǎn)稱WA）：瓊脂30 g，蒸餾水1 L。

1.2? 試驗(yàn)方法

1.2.1? 菌株分離

組織分離：將生病根部切成約5 cm長(zhǎng)的小段，浸泡于75%酒精中約30 s后，在0.1%升汞水溶液中浸約1 min，后用無(wú)菌水換洗3次，放在干燥的無(wú)菌紙上吸干水分后，用滅菌手術(shù)刀在病害標(biāo)本病健交界處切取邊長(zhǎng)為3 mm左右的立方塊組織，并將其移置于PDA培養(yǎng)基平板中央，將培養(yǎng)皿倒置于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3～5 d后觀察。

單孢分離：在超凈工作臺(tái)上，用無(wú)菌手術(shù)刀將WA平板切成邊長(zhǎng)約為1.0 cm×2.0 cm的塊狀，放置在滅菌載玻片上，并將其平均切成8塊0.5 cm×0.5 cm的小塊。使用針灸針沾取根腐病菌分離物，連續(xù)在8塊WA平板上各輕觸1下，隨后在4×10倍顯微鏡下觀察孢子。最后將沾有單孢的瓊脂塊，轉(zhuǎn)移至PDA中央，倒置于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2? 含毒介質(zhì)制備

將供試殺菌劑按照表2對(duì)應(yīng)的質(zhì)量濃度配置成不同濃度含毒培養(yǎng)基，以無(wú)殺菌劑加入的PDA平板作為對(duì)照[3]。每皿培養(yǎng)皿倒入20 mL培養(yǎng)基，每個(gè)殺菌劑濃度5個(gè)重復(fù)。

1.2.3? 不同化學(xué)殺菌劑對(duì)黨參根腐病病原菌菌落生長(zhǎng)的抑制作用

菌絲生長(zhǎng)速率法：使用直徑為5 mm的無(wú)菌打孔器在菌落樣本邊緣處打下菌餅[3]。取菌餅移入對(duì)應(yīng)培養(yǎng)基中心位置，使用封口膜密封培養(yǎng)皿邊緣使之隔絕污染，用標(biāo)簽作相對(duì)應(yīng)標(biāo)記，將平板放置于25 ℃恒溫條件下培養(yǎng)。接種后，在培養(yǎng)第3 d、5 d、7 d時(shí)，采用十字交叉法測(cè)量菌落直徑，并按照如下公式，計(jì)算6種殺菌劑對(duì)應(yīng)的抑制生長(zhǎng)率。

[抑制生長(zhǎng)率=（1-處理菌落直徑-菌餅直徑對(duì)照菌落直徑-菌餅直徑）×100%]

1.2.4? 數(shù)據(jù)整理

以殺菌劑質(zhì)量濃度的對(duì)數(shù)值為x，抑制率值為y，使用Excel進(jìn)行回歸分析，得毒力回歸方程y=ax+b，求出決定系數(shù)（R2）及EC50。使用DPS 9.01對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 殺菌劑處理P5后菌落生長(zhǎng)情況

試驗(yàn)結(jié)果表明，在相同濃度處理下，6種不同藥劑對(duì)P5菌落的生長(zhǎng)抑制作用有明顯影響。十三嗎啉、甲基硫菌靈、苯醚甲環(huán)唑、福美雙對(duì)P5均有明顯抑制作用，噁霉靈對(duì)其抑制作用稍差，噻呋酰胺對(duì)其抑制作用不明顯。其中十三嗎啉、甲基硫菌靈明顯優(yōu)于其他殺菌劑的處理，實(shí)際觀察發(fā)現(xiàn)，這兩種殺菌劑處理下的P5菌落生長(zhǎng)邊緣不平整，說(shuō)明菌絲的生長(zhǎng)受到較大阻礙。其余菌落邊緣生長(zhǎng)平滑，說(shuō)明其余4種殺菌劑對(duì)菌絲的生長(zhǎng)形態(tài)沒(méi)有太大影響。此外，從各菌落培養(yǎng)基顏色來(lái)看，各殺菌劑對(duì)P5分泌色素的能力有一定影響。十三嗎啉、甲基硫菌靈處理下的菌落培養(yǎng)基顏色偏紅且較深，說(shuō)明藥劑并未過(guò)多減少其色素的產(chǎn)生。福美雙處理下的菌落培養(yǎng)基稍紅但顏色較淺，說(shuō)明該藥較前兩種藥劑，對(duì)其色素的分泌起到了更大程度的抑制。苯醚甲環(huán)唑、噁霉靈、噻呋酰胺處理下的菌落培養(yǎng)基顏色幾乎沒(méi)有變化，說(shuō)明3種藥劑較好地抑制了P5分泌色素。

2.2? 生長(zhǎng)速率法測(cè)定各殺菌劑的抑制作用

從表3可以看出，各藥劑的EC50值差異較大，苯醚甲環(huán)唑、甲基硫菌靈、十三嗎啉對(duì)P5的生長(zhǎng)抑制作用明顯優(yōu)于其他幾種殺菌劑，說(shuō)明P5對(duì)這幾種殺菌劑更為敏感，其中十三嗎啉的抑制作用最好。福美雙、噁霉靈對(duì)P5的生長(zhǎng)抑制作用稍弱，但其用量也低于生產(chǎn)上常規(guī)劑量，說(shuō)明其抑制效果也較好。而24%噻呋酰胺的EC50值高達(dá)55 258.62×10-3 g·L-1，抑制效果不明顯。

從表4置信區(qū)間數(shù)據(jù)可以看出，苯醚甲環(huán)唑和十三嗎啉、甲基硫菌靈和十三嗎啉對(duì)P5的生長(zhǎng)抑制作用差異不顯著，其余各藥劑相互間對(duì)P5的生長(zhǎng)抑制作用的差異顯著，說(shuō)明藥劑間的抑制作用差異明顯。

比較組別中：1. 苯醚甲環(huán)唑，2. 噁霉靈，3. 甲基硫菌靈，4. 噻呋酰胺，5. 福美雙，6. 十三嗎啉

3? 討論

本文的毒力回歸方程能夠有效地反映出不同濃度的殺菌劑與抑制菌落生長(zhǎng)的關(guān)系，本次試驗(yàn)采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定了6種殺菌劑對(duì)黨參根腐病的室內(nèi)毒力，結(jié)果表明，6種殺菌劑對(duì)黨參根腐病病菌P5的抑制作用由強(qiáng)到弱順序?yàn)槭龁徇?甲基硫菌靈>苯醚甲環(huán)唑>福美雙>噁霉靈>噻呋酰胺。十三嗎啉、甲基硫菌靈對(duì)菌絲生長(zhǎng)有明顯抑制，苯醚甲環(huán)唑、噁霉靈、噻呋酰胺能有效減少病菌色素分泌。十三嗎啉、苯醚甲環(huán)唑、甲基硫菌靈對(duì)P5生長(zhǎng)抑制作用最好，噁霉靈、福美雙對(duì)P5生長(zhǎng)抑制作用稍弱;噻呋酰胺抑制效果最差，在生產(chǎn)上不作推薦。

十三嗎啉、甲基硫菌靈、苯醚甲環(huán)唑、福美雙、噁霉靈這5種殺菌劑均有抗菌譜較廣、高效、低毒的特點(diǎn)，對(duì)本試驗(yàn)中的病菌P5有較好的抑制效果。建議生產(chǎn)上可多種殺菌劑交替使用，以有效控制黨參根腐病害，防止病原菌對(duì)某種單一試劑產(chǎn)生抗藥性。

室內(nèi)藥劑篩選試驗(yàn)結(jié)果僅代表藥劑與病原菌直接接觸時(shí)，藥劑對(duì)病原菌生長(zhǎng)的抑制效果，而藥劑在田間對(duì)病害的實(shí)際防治效果還與藥劑作用機(jī)理、施藥方式、施藥天氣狀況等因素有關(guān)。下一步可選用在室內(nèi)毒力測(cè)定中對(duì)黨參根腐病病菌抑制效果較好的殺菌劑進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 孫新榮，仲彩萍，張西梅，等.甘肅定西地區(qū)黨參根腐病病原鑒定與防治研究[J].植物保護(hù)，2020，46（5）：290-297.

[2] 余中蓮，雷美艷，蒲盛才，等.重慶黨參真菌病害種類調(diào)查及病原鑒定[J].中藥材，2015，38（6）：1119-1122.

[3] 陳雨姍，尹群，王杰，等.紅花玉蘭根腐病化學(xué)防治藥劑的室內(nèi)篩選及毒力測(cè)定[J].東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2020，48（9）：107-113.

（責(zé)任編輯：丁志祥）