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        電針額區(qū)對血管性癡呆模型大鼠學(xué)習(xí)記憶能力及海馬回CA1區(qū)細(xì)胞凋亡的影響

        2021-10-09 08:53:48馬莉陳玉伍思政肖海燕趙鑫宇張雪松
        中醫(yī)藥信息 2021年6期
        關(guān)鍵詞:神經(jīng)細(xì)胞電針西藥

        馬莉,陳玉,伍思政,肖海燕,趙鑫宇,張雪松*

        (1. 黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院,黑龍江 哈爾濱 150040;2. 黑龍江中醫(yī)藥大學(xué),黑龍江哈爾濱 150040)

        血管性癡呆(VD)是由腦卒中(缺血或者出血)引起的一種認(rèn)知功能障礙及情感障礙的綜合征[1]。隨著我國社會不斷進(jìn)步和發(fā)展,生活條件和醫(yī)療環(huán)境不斷改善,生活習(xí)慣不規(guī)律和人口老齡化也隨之越來越嚴(yán)重,癡呆類疾病也逐漸引起社會的關(guān)注。據(jù)統(tǒng)計(jì),我國有關(guān)癡呆這一疾病的發(fā)病率逐年遞增,其中VD 位居發(fā)病率排名第二,就目前而言在這些癡呆類疾病中,VD是唯一可以通過積極治療可控制和改善的。VD患者識人不清、記憶力下降、情感表達(dá)異常,使患者家庭背負(fù)了沉重的負(fù)擔(dān)[2]。VD 的發(fā)病主要是因?yàn)殚L期或者反復(fù)的腦組織缺血、缺氧,神經(jīng)元賴以生存的環(huán)境遭到破壞,使神經(jīng)元變性、凋亡等[3]。因此,如何控制、改善或修復(fù)腦組織缺血、缺氧的狀態(tài),解決這一問題的關(guān)鍵就是腦血管再通問題。腦組織有賴于腦血管中血液的滋養(yǎng),當(dāng)出現(xiàn)腦卒中時(主要是腦缺血),會引起血管堵塞,所以在缺血區(qū)域改善供血或者建立新的側(cè)支循環(huán)是解決該問題的可行方法[4]。本研究探討電針對VD模型大鼠的影響,現(xiàn)報(bào)告如下。

        1 材料與方法

        1.1 實(shí)驗(yàn)動物

        本研究實(shí)驗(yàn)動物情況詳見表1。

        表1 實(shí)驗(yàn)動物基本情況

        1.2 藥物與試劑

        腦復(fù)康(湖南迪諾制藥有限公司,批號:H43020666);大鼠血管內(nèi)皮生長因子(江蘇酶免實(shí)業(yè)有限公司,批號:2019-10);細(xì)胞凋亡試劑盒(Roche Molecular Biochemicals,germany,批號:11684817910)。

        1.3 造模與分組

        VD 模型參照采用2-VO 法。將大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(0.9%NaCl,15只)、模型組(0.9%NaCl,15只)、西藥組(腦復(fù)康,15 只)和電針組(2 Hz 疏密波電針,15只),造模方法見參考文獻(xiàn)[5]。

        1.4 給藥

        電針組:將大鼠固定在大鼠臺上(采用俯臥位),根據(jù)于致順老師頭穴分區(qū)針刺這一理論,本實(shí)驗(yàn)選取的腧穴都在大鼠額區(qū),分別是前庭和囟會穴以及其向左、右各1寸及2寸的穴位,用脈沖電療儀連接前庭和囟會穴(參照華興邦等[6]的《大鼠穴位圖譜的研制》),給予疏密波,將這波形的頻率調(diào)至2 Hz,20 min,1 次/d,連續(xù)治療30 d。其余3組大鼠只束縛在鼠臺上20 min。

        西藥組:腦復(fù)康配置為濃度40 mg/mL,大鼠給藥時,劑量為6 mL/kg,1次/d,連續(xù)治療30 d。

        假手術(shù)組:0.9% NaCl 進(jìn)行灌胃,給藥體積、頻次和時間同西藥組。

        模型組:治療同假手術(shù)組。

        1.5 觀察指標(biāo)

        1.5.1 Morris 水迷宮檢測

        該實(shí)驗(yàn)包括定位航行和空間探索試驗(yàn)。該測試所需要的時間為6 d,每天測驗(yàn)8 次,上午和下午進(jìn)行測驗(yàn)次數(shù)相同。

        1.5.2 血清VEGF含量檢測

        按照試劑盒說明進(jìn)行嚴(yán)格操作。

        1.5.3 細(xì)胞凋亡檢測

        將大鼠脫頸處死取腦組織,浸入10%福爾馬林溶液中。利用TUNEL 法,查看光鏡下大鼠海馬區(qū)細(xì)胞凋亡狀態(tài)并拍照。

        1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

        采用SPSS 22.0軟件分析系統(tǒng)對各組數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算,所有數(shù)據(jù)以±s表示,P≤0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 Morris水迷宮檢測結(jié)果比較

        2.1.1 大鼠逃避潛伏期時間比較

        與模型組比較,其余3 組均低于模型組(P<0.05),電針組與西藥組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

        表2 各組大鼠逃避潛伏期時間比較(±s)

        表2 各組大鼠逃避潛伏期時間比較(±s)

        注:與模型組比較,1)P <0.05;與西藥組比較,2)P >0.05。

        組別模型組假手術(shù)組西藥組電針組n 15 15 15 15逃避潛伏期(s)53.90±4.31 39.46±2.391)42.47±3.261)40.25±1.221)2)

        2.1.2 穿過平臺次數(shù)比較

        與模型組比較,其余3 組均高于模型組(P<0.05),電針組與西藥組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

        表3 各組大鼠穿過平臺次數(shù)比較(±s)

        表3 各組大鼠穿過平臺次數(shù)比較(±s)

        注:與模型組比較,1)P <0.05;與西藥組比較,2)P >0.05。

        組別模型組假手術(shù)組西藥組電針組n 15 15 15 15穿越平臺次數(shù)(次)3.14±0.29 9.06±1.131)7.51±0.581)6.73±0.141)2)

        2.2 各組大鼠血清VEGF含量比較

        西藥組和電針組大鼠血清VEGF 含量明顯高于模型組,并且模型組高于假手術(shù)組(P<0.05);電針組與西藥組在血清VEGF 含量方面比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表4。

        表4 各組大鼠血清中VEGF的含量比較(±s)

        表4 各組大鼠血清中VEGF的含量比較(±s)

        注:與模型組比較,1)P <0.05;與西藥組比較,2)P >0.05。

        組別模型組假手術(shù)組西藥組電針組n 15 15 15 15 VEGF(pg/mL)132.53±17.21 94.66±10.071)165.80±14.191)169.41±12.521)2)

        2.3 各組大鼠海馬回CA1 區(qū)錐體細(xì)胞結(jié)構(gòu)和凋亡細(xì)胞情況

        錐體細(xì)胞結(jié)構(gòu)情況:假手術(shù)組可見這一結(jié)構(gòu)致密;模型組可見這一結(jié)構(gòu)模糊,細(xì)胞核深染,結(jié)構(gòu)變得殘缺;西藥組其結(jié)構(gòu)排列比模型組稍許緊;電針組可見其結(jié)構(gòu)排列比模型組明顯致密。細(xì)胞凋亡情況:假手術(shù)組可見少量凋亡細(xì)胞;模型組可見大量凋亡細(xì)胞;西藥組和電針組可見凋亡細(xì)胞,相較于模型組而言,其數(shù)量相對較少,但高于假手術(shù)組。詳見圖1。

        圖1 大鼠海馬回CA1區(qū)細(xì)胞凋亡情況(TUNEL,×400)

        3 討論

        VD 在中醫(yī)學(xué)中可歸屬“癡證”或者“呆病”范疇,病位在腦,腦為髓海,腦失所養(yǎng),髓海不足,就會引發(fā)癡證的發(fā)生。引起腦失所養(yǎng)的病因有很多,比如老年腎精虧少,臟腑功能低下,髓海不足等[7]。VD 主要是因?yàn)轲鲅铚X竅,使氣血運(yùn)行不暢,腦竅無氣血滋養(yǎng)而發(fā)病。和早期老年性癡呆不同,VD 在早期是可以通過積極治療得到控制和改善的。臨床常口服美金剛、安理申等,這兩種藥物所代表的兩大類藥物其實(shí)都是治療阿爾茨海默病的代表藥物,還有神經(jīng)營養(yǎng)劑(腦復(fù)康)和抗精神病類藥物,這些對于血管性癡呆來說也有一定作用,但不明顯,而且長期服用,會產(chǎn)生不良反應(yīng)[8]。中醫(yī)學(xué)對VD 的早期治療效果明顯[9]。

        VD 發(fā)病究其根本原因和過程其實(shí)就是發(fā)生腦血管疾病之后,因?yàn)槟X組織缺血或者出血原因使腦血管破裂或腦血管堵塞,血液循環(huán)障礙,最終導(dǎo)致相應(yīng)神經(jīng)元受到破壞(尤其是海馬,其主要功能就是記憶,而且對缺血、缺氧十分靈敏),最終導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞凋亡的過程。當(dāng)腦組織一開始受到損傷時,其中心出血或者缺血區(qū)域的神經(jīng)細(xì)胞會發(fā)生變性或者凋亡,但周圍遠(yuǎn)離中心區(qū)域的部位神經(jīng)細(xì)胞要經(jīng)過1~2 d 后才出現(xiàn)退化,然后慢慢凋亡。這種逐漸自我凋亡過程是具有潛伏性的,而海馬CA1 區(qū)對這種逐漸自我凋亡過程的病理變化最為突出和明顯,尤其是海馬CA1 區(qū)的椎體細(xì)胞。當(dāng)腦血管疾病急性發(fā)作時,這種細(xì)胞凋亡程度會有高峰期,一般是1~5 d 內(nèi),但是這種持續(xù)細(xì)胞凋亡的狀態(tài)會持續(xù)1 個月[10]。近年來研究表明,積極促進(jìn)側(cè)支循環(huán)的建立,這就讓血液在新的通路得以通暢循環(huán),使腦組織損傷得以控制和緩解,在很大程度上對腦神經(jīng)細(xì)胞起到了積極有效的保護(hù)作用[11]。

        有關(guān)頭穴叢刺這一理論主要來源于于致順教授臨床和理論知識的總結(jié)[12]。該理論大致內(nèi)容是在對頭部進(jìn)行針刺時,其針刺局部會產(chǎn)生一種“場”,這種“場”有著直接的滲透作用,可以作用于大腦皮層和腦組織(不同腦區(qū)域?qū)?yīng)不同疾?。_(dá)到緩解相對應(yīng)癥狀的作用[13]。本實(shí)驗(yàn)研究的是VD 大鼠學(xué)習(xí)記憶能力,而根據(jù)頭穴叢刺這一理論,其需要針刺的部位即是前額區(qū)域,在這一區(qū)域針刺可以緩解記憶和情感障礙的癥狀,因此筆者選取的腧穴是額區(qū)的前庭等穴位。對于頭穴叢刺治療VD 的文獻(xiàn)已經(jīng)很多,但是在頭穴叢刺基礎(chǔ)上加用電針的方法,這一研究文獻(xiàn)相對較少,而且電針2 Hz 疏密波在興奮這一方面具有很大優(yōu)勢,具有促進(jìn)血液循環(huán),消除炎性水腫等特點(diǎn)[14]。有研究表明,在腦組織受到損傷時,運(yùn)用電針治療,可以讓已經(jīng)受損的神經(jīng)傳導(dǎo)通路再次得到建立[15]。

        VEGF 又稱血管通透因子,當(dāng)腦組織出現(xiàn)血液循環(huán)障礙進(jìn)而神經(jīng)細(xì)胞發(fā)生凋亡時,因其可以促進(jìn)血管再生,形成側(cè)支循環(huán),并且有著非常高的生物活性,這就使得血液循環(huán)得以維序,血液循環(huán)的通暢與否關(guān)系著神經(jīng)細(xì)胞的生存環(huán)境,因此VEGF 對神經(jīng)細(xì)胞有著保護(hù)作用,并且它還有著極高的特殊性[16]。有研究發(fā)現(xiàn),當(dāng)腦缺血時,其中心缺血區(qū)域VEGF 含量在第1 天或者第2 天會達(dá)到最高峰,有血管結(jié)構(gòu)從周圍缺血部位向中心缺血部位延伸,7 d 后中心缺血區(qū)域VEGF 含量逐漸降低,但周圍缺血區(qū)域VEGF 含量增加,因此,當(dāng)腦缺血時,如何采取治療措施,促進(jìn)中心缺血區(qū)域VEGF 含量增加或者不持續(xù)降低以及讓周圍缺血區(qū)域VEGF 含量保持增加不降低,是目前面臨的巨大問題[17]。本實(shí)驗(yàn)表明,假手術(shù)組在血清VEGF 的含量方面明顯低于模型組,電針組(2 Hz 疏密波電針額區(qū))和西藥組(腦復(fù)康)的血清VEGF 含量明顯高于模型組,這就說明VEGF 在VD 發(fā)病時,其含量會增加,促進(jìn)血管再生進(jìn)行自我修復(fù),但是如果不進(jìn)行有效早期積極治療,其增加的量相對較低,自我修復(fù)的速度會相對緩慢。在水迷宮實(shí)驗(yàn)和海馬回CA1 區(qū)細(xì)胞凋亡方面,不管是電針組(電針額區(qū)),還是西藥組(腦復(fù)康),又或者是假手術(shù)組,都比模型組有優(yōu)勢。電針組(電針額區(qū))與西藥組(腦復(fù)康)在上述觀察指標(biāo)方面比較無差異,說明在VD 治療結(jié)果上,兩者療效相當(dāng)。

        綜上所述,電針額區(qū)(2 Hz疏密波電針額區(qū))對VD的作用機(jī)制之一可能是通過調(diào)節(jié)血清VEGF,促進(jìn)腦血管再生,血液循環(huán)障礙情況得以緩解,神經(jīng)細(xì)胞的生存環(huán)境得到改善,抑制減緩細(xì)胞凋亡,神經(jīng)傳導(dǎo)通路建立,最終改善臨床癥狀。

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