劉小朵

南通大學(xué)附屬通州醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇南通 226300

據(jù)相關(guān)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，近幾年臨床出現(xiàn)敗血癥、菌血癥等概率呈升高態(tài)勢(shì)，對(duì)患者的健康及生命安全造成不良危害。感染患者普遍存在發(fā)病急、進(jìn)展快、死亡率高等特點(diǎn)，因此找尋一種快速、便捷、準(zhǔn)確的診斷方法至關(guān)重要。 熒光免疫定量分析法具有專一性強(qiáng)、靈敏度高、實(shí)用性好等優(yōu)點(diǎn)[1]。血培養(yǎng)是目前較為常用診斷血流感染疾病的措施，然而結(jié)果容易受采血位置、采血時(shí)機(jī)、抗生素藥物等干擾，且診斷周期較長(zhǎng)，難以及時(shí)得到結(jié)果，且容易出現(xiàn)假陰性、假陽(yáng)性問(wèn)題。降鈣素原屬于人體蛋白質(zhì)指標(biāo)之一，臨床研究發(fā)現(xiàn)敗血癥患者普遍存在降鈣素原升高情況，因此提出能否通過(guò)檢測(cè)降鈣素原用于預(yù)測(cè)血液感染[2]。該文以2019 年1 月—2020 年1 月該院收治患者1 690 例進(jìn)行分析，利用熒光免疫定量分析法檢測(cè)降鈣素原，分析其與血培養(yǎng)結(jié)果的關(guān)聯(lián)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取該院收治患者1 690 例作為研究對(duì)象，包括男性患者890 例，女性患者800 例；年齡最小為1 歲，最大為 90 歲，平均年齡（45.6±1.3）歲。 所有患者血培養(yǎng)送檢時(shí)間和PCT 送檢時(shí)間相差不超過(guò)24 h ，每次只記錄第1 次血培養(yǎng)和PCT 檢測(cè)結(jié)果。 經(jīng)過(guò)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者及家屬知情同意。

1.2 方法

要求所有患者在入院后采集血液樣本，血培養(yǎng)遵照SOP 手冊(cè)要求選擇合適的采集時(shí)間并保證在未使用任何抗生素類藥物的前提下采集，利用此樣本開展PCT 和血培養(yǎng)兩項(xiàng)檢測(cè)。

1.2.1 熒光免疫定量分析法 將采集血樣以3 000 r/min離心5 min，提取上清液作為血清樣本以供檢測(cè)。使用熒光免疫定量分析儀進(jìn)行檢測(cè)，要求必須使用配套試劑盒，嚴(yán)格按照設(shè)備說(shuō)明書開展相關(guān)操作[3]。試劑盒顯示PCT 陽(yáng)性臨界值為0.10 ng/mL，如PCT＞0.10 ng/mL提示PCT 陽(yáng)性，并按要求進(jìn)行每日質(zhì)控活動(dòng)。

1.2.2 血培養(yǎng)方法 血培養(yǎng)儀為Bact/Alert3D120 瓶，使用配套的培養(yǎng)瓶，鑒定與藥敏采用Vitek-2 全自動(dòng)分析系統(tǒng)，并按以下要求執(zhí)行：

①血液采集必須嚴(yán)格遵照SOP 標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行， 最佳時(shí)機(jī)為患者已出現(xiàn)明顯體溫升高、 寒戰(zhàn)等癥狀時(shí)，如入院后未發(fā)生也需在使用抗生素藥物前采集，成年人需為 5～10 mL，嬰幼兒則 1 ～5 mL 即可。 血樣采集完成后需在保證無(wú)菌的環(huán)境中注入全自動(dòng)血培養(yǎng)設(shè)備內(nèi)，目前我院要求做到雙側(cè)單瓶。 ②需及時(shí)將培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)運(yùn)至檢驗(yàn)科并置入恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)[4]。 根據(jù)儀器提示觀察樣本變化情況， 如血樣當(dāng)中含有細(xì)菌，則其通過(guò)生理代謝會(huì)產(chǎn)生CO2氣體，此時(shí)盛裝樣本的培養(yǎng)瓶底部感應(yīng)器便會(huì)接收到氣體反應(yīng)，說(shuō)明培養(yǎng)瓶當(dāng)中呈細(xì)菌陽(yáng)性。 且隨CO2氣體量的增加，感應(yīng)器會(huì)每隔相應(yīng)時(shí)間檢測(cè)1 次。 ③根據(jù)感應(yīng)器定時(shí)監(jiān)測(cè)的CO2氣體量制作成變化曲線圖， 同時(shí)記錄各報(bào)警時(shí)間點(diǎn)，待培養(yǎng)7 d 左右后，將感應(yīng)器提示為陰性性的培養(yǎng)瓶卸載。 ④針對(duì)感應(yīng)器提示為陽(yáng)性的培養(yǎng)瓶進(jìn)行檢查，使用無(wú)菌一次性注射器采集瓶?jī)?nèi)樣本，并直接涂抹于載玻片上，待自然干燥后進(jìn)行革蘭氏染色[5]，記錄形態(tài)特征，評(píng)估相應(yīng)危機(jī)值，并報(bào)告給主治醫(yī)生，由醫(yī)生判斷患者具體病情狀態(tài)。 ⑤將樣本分別接種在血液、巧克力培養(yǎng)基上， 放置在35℃， 含有5%CO2的孵化箱內(nèi)，24 h 后觀察培養(yǎng)基上菌落生長(zhǎng)情況， 挑取單個(gè)菌落進(jìn)行菌種鑒定和藥物敏感性實(shí)驗(yàn)[6]。

1.3 觀察指標(biāo)

探討血培養(yǎng)結(jié)果陽(yáng)性與陰性患者降鈣素原水平差異，分析血培養(yǎng)陽(yáng)性患者病原菌分布情況，并對(duì)比不同病原菌患者降鈣素原指標(biāo)。 陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)：PCT≥0.05 ng/mL。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件完成數(shù)據(jù)處理， 計(jì)量資料以（）表示，組間差異比較以t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)及百分比表示， 組間差異比較以χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血培養(yǎng)結(jié)果與降鈣素原水平關(guān)系分析

該次1 690 例患者經(jīng)血培養(yǎng)檢驗(yàn)，340 例患者結(jié)果呈陽(yáng)性，占比20.11%，1 350 例患者結(jié)果呈陰性，占比79.89%， 血培養(yǎng)結(jié)果呈陽(yáng)性患者降鈣素原水平明顯高于血培養(yǎng)結(jié)果呈陰性患者， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表 1。

表1 血培養(yǎng)結(jié)果與降鈣素原水平關(guān)系分析[(),ng/mL]

表1 血培養(yǎng)結(jié)果與降鈣素原水平關(guān)系分析[(),ng/mL]

血培養(yǎng)結(jié)果 降鈣素原水平陽(yáng)性（n=340）陰性（n=1 350）t 值P 值2.71±0.89 0.81±0.35 61.769＜0.05

2.2 血培養(yǎng)陽(yáng)性患者病原菌分布

340 例血培養(yǎng)陽(yáng)性患者總計(jì)發(fā)現(xiàn)病原菌包括革蘭陰性菌、革蘭陽(yáng)性菌，其中以革蘭陰性菌占比最高，見表2。

表2 血培養(yǎng)陽(yáng)性患者病原菌分布

2.3 不同病原菌患者降鈣素原水平對(duì)比

革蘭氏陰性菌患者降鈣素原水平明顯高于革蘭氏陽(yáng)性菌及真菌患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表3。

表3 不同病原菌患者降鈣素原水平對(duì)比[(),ng/mL]

表3 不同病原菌患者降鈣素原水平對(duì)比[(),ng/mL]

血培養(yǎng)結(jié)果 降鈣素原水平革蘭陰性菌（n=250）革蘭陽(yáng)性菌（n=79）真菌（n=11）F 值P 值5.74±1.15 1.62±0.47 1.41±0.39 550.819＜0.05

3 討論

血液感染性病變是臨床較為常見的感染性病變之一，例如敗血癥、菌血癥等，由于血液循環(huán)系統(tǒng)遍布全身， 一旦發(fā)生血液感染就會(huì)引發(fā)全身性炎癥反應(yīng)，如不及時(shí)治療很容易累積各類臟器，因此當(dāng)前臨床對(duì)該類病變的重視度越來(lái)越高。其中菌血癥即是指外源性細(xì)菌經(jīng)開放性腔室，例如口腔、鼻腔、創(chuàng)口等進(jìn)入到血液系統(tǒng)當(dāng)中，進(jìn)而定植并大量繁殖，隨血液循環(huán)至全身各臟器或組織內(nèi)，造成大范圍感染癥狀。 敗血癥則是在菌血癥基礎(chǔ)上發(fā)展而成，在細(xì)菌在循環(huán)系統(tǒng)內(nèi)大量繁殖后會(huì)釋放相應(yīng)量的毒素，從而引起全身性重癥感染性病變，且根據(jù)所感染細(xì)菌種類不同、病情程度不同可分為多種疾病， 例如革蘭氏陰性菌敗血癥、革蘭氏陽(yáng)性菌敗血癥、膿毒敗血癥等。 患者在發(fā)病后具有極高的死亡率，且全身性炎癥還會(huì)引發(fā)嚴(yán)重的高燒、寒戰(zhàn)等明顯癥狀，目前只能通過(guò)合理的抗菌藥物方案進(jìn)行干預(yù)，最大程度保障其生存概率。 但與治療其它炎性病變一樣，首先需開展早期診斷，確定患者感染的細(xì)菌種類，并根據(jù)其藥敏結(jié)果選擇相應(yīng)的抗菌藥物進(jìn)行針對(duì)性治療。

血培養(yǎng)檢測(cè)方法在血液感染性疾病中應(yīng)用時(shí)間較早，其操作和判斷方式相對(duì)簡(jiǎn)便，但所得出的結(jié)果具有不穩(wěn)定性，例如容易產(chǎn)生假陰性，操作過(guò)程步驟較多，如其中一步導(dǎo)致樣本污染，那么整體檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確率便會(huì)大打折扣，無(wú)法滿足臨床醫(yī)生判斷的準(zhǔn)確需求[7]。

降鈣素原屬于降鈣素的前肽物質(zhì)，在正常的狀態(tài)下無(wú)任何激素類活性， 其中絕大部分由甲狀腺C 細(xì)胞合成和分泌，屬于典型的糖蛋白類物質(zhì)。 在健康人血液當(dāng)中降鈣素原的含量極低，基本維持在0.1 ng/mL以下，當(dāng)人體感染外源性細(xì)菌、病毒或出現(xiàn)過(guò)敏性反應(yīng)時(shí)， 該物質(zhì)在血液中的含量并不會(huì)出現(xiàn)明顯變化，但當(dāng)細(xì)菌、微生物等感染引發(fā)臟器損傷后，會(huì)導(dǎo)致各類細(xì)胞因子分泌量增加，此時(shí)血液中降鈣素原的含量就會(huì)大幅度提升。因此臨床將其作為判斷感染性疾病程度的重要指標(biāo)，一旦含量超過(guò)0.1 ng/mL，則說(shuō)明患者感染病癥嚴(yán)重，需立即開展抗菌治療干預(yù)[8]。

根據(jù)臨床研究顯示，血液感染性疾病患者中超過(guò)90%以上者表現(xiàn)為降鈣素原血清含量超過(guò)0.1 ng/mL，且利用降鈣素原檢測(cè)方式獲得的陽(yáng)性率普遍高于常規(guī)血液培養(yǎng)檢查，陽(yáng)性準(zhǔn)確率也普遍較高。 同時(shí)需要注意的是，部分血樣在血液培養(yǎng)時(shí)呈陰性，但經(jīng)過(guò)熒光免疫定量分析法檢測(cè)后也可測(cè)量到降鈣素原高于0.1 ng/mL 的情況， 這是由于影響降鈣素原分泌量增加的因素有很多種，例如外傷、手術(shù)創(chuàng)傷、內(nèi)分泌失調(diào)等，而這些因素也有可能成為引發(fā)血液感染性疾病的誘因[9]。因此，實(shí)際檢驗(yàn)時(shí)臨床醫(yī)生需進(jìn)一步結(jié)合患者自身臨床癥狀和其它指標(biāo)進(jìn)行綜合評(píng)估，有效排除局限性感染導(dǎo)致的指標(biāo)異常問(wèn)題[10-11]。 但從整體角度來(lái)看，血液培養(yǎng)檢測(cè)周期較長(zhǎng)，并受到假陽(yáng)性或假陰性的影響，不適合用于急性發(fā)作類患者[12]。 降鈣素原檢測(cè)則更加快速，且可直接反應(yīng)患者血液感染的程度高低，對(duì)于感染源的鑒別也具有一定的指導(dǎo)意義，整體檢驗(yàn)周期更短， 可有效彌補(bǔ)血液培養(yǎng)檢驗(yàn)的缺陷，可將二者結(jié)合應(yīng)用于血液感染性疾病的診斷中，以確保治療的準(zhǔn)確性和快速性。

該研究結(jié)果顯示，血培養(yǎng)結(jié)果呈陽(yáng)性患者降鈣素原水平（2.71±0.89）ng/mL 明顯高于血培養(yǎng)結(jié)果呈陰性患者（P＜0.05）。 該研究結(jié)果與金鑫[12]文章結(jié)果血培養(yǎng)陽(yáng)性患者 PCT （2.64±1.01）ng/mL 高于陰性患者 PCT（0.79±0.39）ng/mL 相一致。

綜上所述，通過(guò)熒光免疫定量分析法檢測(cè)降鈣素原水平有助于鑒別診斷患者血流感染病原菌，為臨床提供可靠數(shù)據(jù)支持。