董柏余，湯洪敏，姚秋萍，朱德全，韓洪強(qiáng)，周培富，何可群，丁曉春

（1.貴州民族大學(xué)民族醫(yī)藥學(xué)院，貴州貴陽(yáng) 550025；2.中國(guó)科學(xué)院華南植物園，廣東廣州 510650）

金刺梨（Rosa sterilis）又稱無(wú)籽刺梨，為貴州省安順市特有物種，在當(dāng)?shù)匾汛笠?guī)模種植[1]。相較于普通刺梨，金刺梨果實(shí)中VC含量與超氧化物歧化酶（superoxidedismutase, SOD）活性更高。作為具有高營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的新型水果，近年來(lái)對(duì)于金刺梨的研究也逐漸增多[2?3]。金刺梨鮮果含糖量高，易受病原物的侵染而發(fā)生腐爛，常溫條件下不耐貯藏，從而給生產(chǎn)者和經(jīng)營(yíng)者帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失[4?5]。目前金刺梨的保鮮方法主要集中于物理保鮮技術(shù)，如低溫貯藏[5]、PE 袋包裝貯藏[6]、UV-C 輻射[7]、氣調(diào)袋貯藏[8]等。其中低溫保鮮技術(shù)雖然效果顯著，但存在成本高、技術(shù)設(shè)備要求高的缺陷，其他物理保鮮技術(shù)雖然成本低，設(shè)備要求低但是對(duì)于病害的控制效果并不顯著。因此，在物理保鮮技術(shù)的基礎(chǔ)上急需開發(fā)安全、高效的新型保鮮劑[9?10]。

水楊酸（salicylic acid, SA）又名鄰羥基苯甲酸，能夠誘導(dǎo)果蔬產(chǎn)生系統(tǒng)獲得性抗性，在甜瓜[11]、獼猴桃[12]、蘋果[13]、枸杞[14]、臍橙[15]等果實(shí)上均表現(xiàn)出良好的誘抗效果，可顯著降低果實(shí)的腐爛率。水楊酸相比于市面上常用的殺菌劑具有殘留危害小、無(wú)抗藥性以及環(huán)境友好等特點(diǎn)，目前尚未見(jiàn)到采后水楊酸處理對(duì)金刺梨誘導(dǎo)抗性的報(bào)道。水楊酸處理提高果實(shí)采后品質(zhì)的作用機(jī)理與其能夠提高活性氧代謝與苯丙烷代謝關(guān)鍵酶活性并激發(fā)活性氧與酚類物質(zhì)的產(chǎn)生密切相關(guān)[16?17]。但是，尚未見(jiàn)到采后水楊酸處理對(duì)金刺梨誘導(dǎo)抗性的報(bào)道。本研究以金刺梨果實(shí)為試材，采后用水楊酸溶液浸泡處理，探索其對(duì)果實(shí)活性氧代謝及苯丙烷代謝的影響，以期為水楊酸處理誘導(dǎo)金刺梨果實(shí)產(chǎn)生抗性從而延緩果實(shí)衰老提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

試驗(yàn)材料 采摘自安順市春歸保健科技有限公司金刺梨基地，選擇九成熟的金刺梨果實(shí)（盛花期后105 d），紙箱包裝后當(dāng)天運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行處理；水楊酸 Sigma-Aldrich 公司產(chǎn)品；丙酮、四氯化鈦、β-巰基乙醇、Tris-HCl 生工生物工程（上海）股份有限公司；二硫蘇糖醇、愈創(chuàng)木酚、蛋氨酸、苯甲基磺酰氟 上海阿拉丁生化科技股份有限公司；冰醋酸、乙醇、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、硼酸、MgCl2·6H2O上海麥克林生化科技有限公司；以上試劑 均為分析純。

TU-1901 型分光光度計(jì) 北京普析; CP70ME日立超速離心機(jī) 日本日立；IKA-2900025 冷凍磨樣機(jī) 中國(guó)艾卡。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)分組與處理 挑選大小一致，成熟度一致的金刺梨果實(shí)，用1.5 mmol/L（預(yù)實(shí)驗(yàn)篩選獲得）水楊酸溶液（0.05% Tween 80）浸泡10 min，完全晾干后備用。清水處理作為對(duì)照組，每個(gè)處理3 個(gè)生物學(xué)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)200 個(gè)果實(shí)。

1.2.2 取樣 分別在處理的 0、2、4、6、8 d，用直徑5 mm 打孔器在果實(shí)赤道部位選三個(gè)點(diǎn)，取皮下2～4 mm處約2 g 果肉組織。樣品錫箔紙包裝后液氮冷凍，放入?80 ℃冰箱保存待用。每次處理用果實(shí)30 個(gè)。

1.2.3 腐爛率的測(cè)定 以貯藏期間腐爛果實(shí)數(shù)占果實(shí)總數(shù)的百分比表示。每組處理用果實(shí)100 個(gè)，重復(fù)3 次。

1.2.4 失重率測(cè)定 采用稱量法進(jìn)行測(cè)定，按下列公式計(jì)算：

失重率（%）=[（貯藏前質(zhì)量?貯藏后質(zhì)量）/貯藏前質(zhì)量]×100。每組處理用果實(shí)10 個(gè)，重復(fù)3 次。

1.2.5 細(xì)胞膜完整性測(cè)定 參照Sayyari 等[18]的方法并修改。取赤道部位的皮下1～4 mm 處果肉組織2 g，切成10 片厚約2 mm 左右薄片后用去離子水沖洗3 次，然后用濾紙吸干多余水分，加入裝有20 mL去離子水的離心管中，在 25 ℃下浸泡 3 h 后用電導(dǎo)率儀測(cè)定電導(dǎo)率，計(jì)為 CI，再在沸水浴中煮沸 30 min，待冷卻至室溫（22 ℃）后再次測(cè)定電導(dǎo)率為其最終電導(dǎo)率，記為 CF，最后按照下面的公式計(jì)算細(xì)胞膜完整性：細(xì)胞膜完整性（%）=[1?（CI/ CF）]×100。

1.2.6 O2－·產(chǎn)生速率的測(cè)定 參照Xu 等[19]的方法并修改。取2.0 g 果肉組織，加入5 mL 100 mmol/L磷酸緩沖液（pH 7.8），在冰浴條件下研磨成勻漿后于4 ℃下12000×g 離心20 min。取1 mL 上清液，加入1 mL 50 mmol/L 磷酸緩 沖液（pH 7.8）和1 mL 1 mmol/L 的鹽酸羥胺溶液，搖勻后在25 ℃保溫1 h。取出后加入1 mL 17 mmol/L 對(duì)氨基苯磺酸和1 mL 7 mmol/Lα-萘胺，于25 ℃保溫20 min 進(jìn)行顯色反應(yīng)，測(cè)定顯色液在530 nm 處測(cè)定吸光度值，以不進(jìn)行保溫1h 的測(cè)定作為參比對(duì)照，重復(fù)三次。單位以mmol·g?1·min?1表示。

1.2.7 過(guò)氧化氫（H2O2）含量測(cè)定 參照Prochazkova等[20]的方法并修改。稱取2.0 g 果肉組織用冷凍磨樣機(jī)打成粉末后，轉(zhuǎn)移至預(yù)冷的研缽，加入2 mL 冷丙酮，繼續(xù)研磨成勻漿。轉(zhuǎn)移勻漿至15 mL 離心管，4 ℃溫度下，12000×g 離心20 min。取1 mL 上清液轉(zhuǎn)移至新的2 mL 離心管，加入100 μL 20%的四氯化鈦溶液（溶于濃鹽酸，V/V）和200 μL 濃氨水，充分混勻反應(yīng)5 min，4 ℃溫度下離心15 min。沉淀用冷丙酮洗滌3 次，加1.5 mL 1 mmol/L H2SO4重懸沉淀，在410 nm 波長(zhǎng)下用紫光分光光度計(jì)處測(cè)定吸光值。H2O2含量以μmol/g 鮮重（FW）表示。

1.2.8 超氧化物歧化酶（SOD）活性測(cè)定 參照Lacan 等[21]方法并修改。稱取2.0 g 果肉組織用冷凍磨樣機(jī)打成粉末后，轉(zhuǎn)移至預(yù)冷的研缽，加入3 mL 100 mmol/L 磷酸緩沖液（pH 7.5，含5 mmol/L 二硫蘇糖醇（DTT）和2% 交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮（PVPP，W/V），繼續(xù)研磨成勻漿。在4 ℃條件下12000×g離心20 min，棄沉淀保留上清液即為粗酶液。反應(yīng)體系包含：0.4 mL 的粗酶，1.5 mL 的50 mmol/L 磷酸鈉緩沖液（pH 7.8），0.2 mL 的130 mmol/L 蛋氨酸（MET），0.3 mL 的100 μmol/L EDTA，0.3 mL 的750 μmol/L 硝基藍(lán)四唑（NBT）和0.3 mL 的20 μmol/L核黃素。對(duì)照組：將裝有混合液的離心管置于暗處。實(shí)驗(yàn)組：將裝有混合液的離心管在光照培養(yǎng)箱中（4000 LUX 日光燈）放置15 min。在560 nm 處測(cè)定吸光值，以對(duì)照組作為空白參比。NBT 光化還原的50%，作為一個(gè)酶活性單位（U/mg protein）。

1.2.9 過(guò)氧化氫酶（CAT）活性測(cè)定 測(cè)定方法參考Wang 等[22]并修改。稱取2.0 g 果肉組織用冷凍磨樣機(jī)打成粉末后，轉(zhuǎn)移至預(yù)冷的研缽，加入3 mL 100 mmol/L 磷酸緩沖液（pH 7.5，含5 mmol/L 二硫蘇糖醇（DTT）和2% PVPP（W/V）），充分研磨成勻漿。在4 ℃下12000×g 離心20 min，取上清液作為粗酶用于酶活性測(cè)定。反應(yīng)體系包括：2 mL 10 mmol/L H2O2（用50 mmol/L、pH 7.5 的磷酸緩沖液配制）和150 μL 粗酶液。在240 nm 波長(zhǎng)下，記錄2 min 內(nèi)樣品動(dòng)態(tài)吸光值變化。以每分鐘OD 值變化0.01 為1 U，CAT 活性表示為U/mg protein。

1.2.10 過(guò)氧化物酶（POD）活性測(cè)定 參照Venisse 等[23]并調(diào)整。稱取2.0 g 果肉組織用冷凍磨樣機(jī)打成粉末后，轉(zhuǎn)移至預(yù)冷的研缽，加入3 mL pH 7.5 的 50 mmol/L 磷 酸 提 取 緩 沖 液（內(nèi) 含 4%PVPP（W/V），1 mmol/L 聚乙二醇，1 mmol/L 苯甲基磺酰氟（PMSF），0.01% Triton X-100（V/V）），迅速充分研磨成勻漿。于4 ℃下，15000×g 離心20 min，轉(zhuǎn)移上清液至新的離心管，作為粗酶液用于酶活性測(cè)定。POD 反應(yīng)體系為2.5 mL 0.025 mol/L 愈創(chuàng)木酚、0.2 mL 0.25 mol/L H2O2和0.2 mL 粗酶液。加酶液后，于470 nm 波長(zhǎng)系下記錄2 min 內(nèi)反應(yīng)體系中吸光值變化。以每分鐘OD 值變化0.01 為1 U，POD 活性表示為U/mg protein。

1.2.11 苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性測(cè)定 參照Assis 等[24]方法并作修改。取2.0 g 果肉組織，用液氮磨碎，在研缽中加入5 mL 經(jīng)4 ℃預(yù)冷的0.1 mol/L pH 8.8 的硼酸緩沖液（含1 mmol/L EDTA，10%（w/v）PVPP 和50 mmol/Lβ-巰基乙醇）繼續(xù)在冰浴下研磨成勻漿，然在4 ℃條件下，12000×g 離心20 min，取上清液作為粗酶液,并用于酶活性測(cè)定。將1 mL 粗酶與3 mL 1-苯丙氨酸在37 ℃下孵育60 min。在290 nm 處測(cè)定吸光值?；钚员硎緸閁/mg protein，其中U = 0.01ΔOD290min?1。

1.2.12 4-香豆酰-輔酶A 連接酶（4CL）活性測(cè)定參考范存斐等[25]方法并修改。稱取2.0 g 果肉組織用冷凍磨樣機(jī)打成粉末后，轉(zhuǎn)移至預(yù)冷的研缽，加入3 mL 0.2 mol/L Tris-HCL 緩沖液（25%甘油、0.1 mol/L DTT、pH 8.0）及少量石英砂。在4 ℃溫度下，15000×g，離心30 min，取上清液至新的離心管中作為粗酶?jìng)溆?。反?yīng)液包括：0.45 mL15 μmol/L MgCl2·6H2O，0.15 mL 5 μmol/mL p-香豆酸，0.15 mL 50 μmol/mL ATP，0.15 mL 1 μmol/mL CoA 以及0.5 mL酶液?；旌弦涸?0 ℃水浴鍋中，反應(yīng)10 min。紫外分光光度計(jì)在333 nm 處測(cè)定樣品吸光值，1 min內(nèi)OD333變化0.1 作為1 個(gè)活性單位（U）?；钚员硎緸閁/mg protein。

1.2.13 總酚含量測(cè)定 參考范存斐等[25]并修改。稱取2.0 g 果肉組織用冷凍磨樣機(jī)打成粉末后，轉(zhuǎn)移至預(yù)冷的研缽，加入5 mL 1% HCl–甲醇后，充分研磨。12000×g 離心30 min，棄沉淀保留上清液。在280 nm 測(cè)定吸光值。總酚含量表示為OD280·g FW?1。

1.2.14 木質(zhì)素含量的測(cè)定 參照范存斐等[25]方法。稱取2.0 g 果肉組織用冷凍磨樣機(jī)打成粉末后，轉(zhuǎn)移至預(yù)冷的研缽，研缽中加入5 mL 預(yù)冷的95%乙醇，充分研磨。12000×g 離心30 min。保留沉淀，先用95%乙醇沖洗3 次，再用乙醇:正己烷=1:2（V/V）沖洗3 次。收集沉淀在60 ℃烘箱中使其充分干燥，用1 mL 25%溴化乙酰冰醋酸溶液重懸沉淀，70 ℃恒溫水浴30 min，然后加1 mL 2 mol/L NaOH 中止反應(yīng)。再加2 mL 冰醋酸和0.1 mL 7.5 mol/L 羥胺鹽酸，離心。取0.02 mL 上清液，用冰醋酸定容至5 mL。紫外分光光度計(jì)在280 nm 波長(zhǎng)下，測(cè)定樣品吸光值。木質(zhì)素含量以O(shè)D280·g FW?1表示。

1.3 數(shù)據(jù)處理

各項(xiàng)指標(biāo)結(jié)果均以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤（SE）”表示，用 SPSS 16.0 軟件進(jìn)行 Duncan’s 多重差異顯著性分析，*表示P<0.05。用 Microsoft Excel 2010 軟件作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 水楊酸處理對(duì)金刺梨果實(shí)腐爛率和失重率的影響

由圖1 可知，從貯藏6 d 開始，對(duì)照組與水楊酸處理果實(shí)出現(xiàn)腐爛。貯藏8 d 時(shí)，對(duì)照組腐爛率為7.6%，水楊酸處理組腐爛率為4.0%并顯著（P<0.05）低于對(duì)照組（圖1A）。由此可見(jiàn)，1.5 mmol/L 水楊酸處理能夠有效抑制采后常溫貯藏期間金刺梨果實(shí)腐爛的發(fā)生。水楊酸處理組與對(duì)照組果實(shí)失重率均呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢(shì)。但是，在整個(gè)貯藏期間水楊酸處理組果實(shí)的失重率始終低于對(duì)照組，并且在4、8 d兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)顯著低于對(duì)照組（圖1B）。水分蒸騰是導(dǎo)致果蔬采后失重的重要原因，結(jié)果表明，水楊酸處理能夠減緩采后金刺梨果實(shí)的水分損失。

圖1 水楊酸處理對(duì)金刺梨果實(shí)腐爛率（a）和失重率（b）的影響Fig.1 Effects of salicylic acid treatment on the decay rate（a）and weight loss rate（b）in Rosa sterilis

2.2 水楊酸處理對(duì)金刺梨果實(shí)細(xì)胞膜完整性的影響

水楊酸處理組和對(duì)照組細(xì)胞膜完整性隨貯藏時(shí)間延長(zhǎng)均出現(xiàn)呈緩慢下降的趨勢(shì)，但與對(duì)照組相比，水楊酸處理能有效保持果實(shí)細(xì)胞膜的完整性。在貯藏4、6、8 d 三個(gè)時(shí)間點(diǎn)，水楊酸處理果實(shí)的細(xì)胞膜完整性顯著（P<0.05）高于對(duì)照果實(shí)（圖2）。由此可見(jiàn)，水楊酸處理能夠較好的保持金刺梨果實(shí)的細(xì)胞膜完整性。細(xì)胞膜起到維持果肉細(xì)胞內(nèi)外滲透壓平衡的作用，細(xì)胞膜完整性的提高可以延緩果實(shí)的采后衰老進(jìn)程。

圖2 水楊酸處理對(duì)金刺梨果實(shí)細(xì)胞膜完整性的影響Fig.2 Effects of salicylic acid treatment on the cell membrane integrity in Rosa sterilis

2.3 水楊酸處理對(duì)金刺梨果實(shí)O2－·產(chǎn)生速率和H2O2含量的影響

由圖3A 可知，水楊酸處理果實(shí)中 O2?·產(chǎn)生速率在貯藏開始階段迅速升高，并在4 d 達(dá)到最大值，顯著（P<0.05）高于對(duì)照組48.2%，隨后緩慢下降。整個(gè)貯藏期間，水楊酸處理組 O2?·產(chǎn)生速率始終高于對(duì)照組（圖3A）。在貯藏過(guò)程中，處理和對(duì)照果實(shí)中H2O2含量均呈現(xiàn)出在前6 d 升高隨后下降的趨勢(shì)，但水楊酸處理提高了果實(shí)H2O2含量，在貯藏6 d 時(shí)達(dá)到最大值并顯著（P<0.05）高于對(duì)照，高出對(duì)照23.5%。整個(gè)貯藏期水楊酸處理組H2O2含量始終高于對(duì)照組（圖3B）。誘導(dǎo)ROS 產(chǎn)生是果蔬增強(qiáng)其本身抗病能力的機(jī)制之一，其中 O2?·和H2O2是ROS 的典型代表，結(jié)果顯示，水楊酸處理能夠促進(jìn)金刺梨果實(shí)O2?·和H2O2貯藏期間的積累，并且與對(duì)照組相比，水楊酸處理促進(jìn)了 O2?·產(chǎn)生速率峰值的提前出現(xiàn)。

圖3 水楊酸處理對(duì)金刺梨果實(shí)O2?·產(chǎn)生速率（A）和H2O2 含量（B）的影響Fig.3 Effects of salicylic acid treatment on the O2?· production rate（A）and H2O2 content（B）in Rosa sterilis

2.4 水楊酸處理對(duì)金刺梨果實(shí)SOD 和CAT 活性的影響

SOD 與CAT 是活性氧代謝的關(guān)鍵酶，SOD 可以直接將不穩(wěn)定的O2?·分解成為更穩(wěn)定的H2O2，而CAT 能夠?qū)2O2分解為H2O 和O2。在整個(gè)貯藏過(guò)程中，水楊酸處理果實(shí)SOD 活性逐漸升高，而對(duì)照組SOD 活性在前2 d 先下降隨后緩慢上升。水楊酸處理果實(shí)SOD 活性在第2、4、8 d 顯著（P<0.05）高于對(duì)照，分別高出對(duì)照組10.9%，15.5%和17%（圖4A）。對(duì)照組CAT 活性在整個(gè)貯藏期間變化不明顯，處理組CAT 活性總體呈先升高后下降趨勢(shì)，在貯藏第6 d達(dá)到最大，高出對(duì)照119%（圖4B）。由此可知，水楊酸處理促進(jìn)了金刺梨果實(shí)常溫貯藏期間SOD 與CAT 活性的升高。

圖4 水楊酸處理對(duì)金刺梨果實(shí)SOD（a）和CAT（b）活性的影響Fig.4 Effects of salicylic acid treatment on the activity of SOD（a）and CAT（b）in Rosa sterilis

2.5 水楊酸處理對(duì)金刺梨果實(shí) POD 活性的影響

POD 廣泛存在于植物中，在果實(shí)體內(nèi)主要參與活性氧的清除、木質(zhì)素的合成等過(guò)程。在整個(gè)貯藏期間水楊酸處理和對(duì)照果實(shí) POD 活性都呈先上升后下降的趨勢(shì)，但水楊酸處理果實(shí) POD 活性始終高于對(duì)照，并在貯藏第4、6、8 d 三個(gè)時(shí)間點(diǎn)顯著（P<0.05）高于對(duì)照，分別高出對(duì)照23.7%，35.3%和35.0%（圖5）。從上述結(jié)果得知，水楊酸處理促進(jìn)了金刺梨果實(shí)常溫貯藏期間POD 活性的升高。

圖5 水楊酸處理對(duì)金刺梨果實(shí)POD 活性的影響Fig.5 Effects of salicylic acid treatment on the activity of POD in Rosa sterilis

2.6 水楊酸處理對(duì)金刺梨果實(shí) PAL 和4CL 活性的影響

PAL 是苯丙烷途徑的限速酶，其活性的高低與酚類、黃酮類和木質(zhì)素合成密切相關(guān)。在整個(gè)貯藏期間，處理組果實(shí)PAL 活性始終高于對(duì)照組，水楊酸處理果實(shí) PAL 呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，在貯藏第4 d 達(dá)到最大，高出對(duì)照 64.2%，而對(duì)照果實(shí)PAL 活性變化不大（圖6A）。4CL 可催化各種羥基肉桂酸生成相應(yīng)的硫酯，從而形成木質(zhì)素合成所必須的中間產(chǎn)物香豆酸、阿魏酸以及咖啡酸。水楊酸處理后，金刺梨果實(shí)4CL 活性迅速升高，并在第4 d 達(dá)到最大，高出對(duì)照50.9%，而對(duì)照組果實(shí)4CL 活性在整個(gè)貯藏期間變化不明顯（圖6B）。由此可知，水楊酸處理提高了金刺梨果實(shí)常溫貯藏期間苯丙烷代謝途徑中關(guān)鍵酶PAL 與4CL 的活性。

圖6 水楊酸處理對(duì)金刺梨果實(shí)PAL（A）和4CL（B）活性的影響Fig.6 Effects of salicylic acid treatment on the activity of PAL（A）and 4CL（B）in Rosa sterilis

2.7 水楊酸處理對(duì)金刺梨果實(shí)總酚和木質(zhì)素含量的影響

水楊酸處理明顯提高了金刺梨果實(shí)的總酚含量，在貯藏過(guò)程中，處理組總酚含量呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢(shì)，在貯藏第6 d 時(shí)達(dá)到最大，高出對(duì)照41.0%，而對(duì)照組總酚含量在整個(gè)貯藏期間緩慢下降（圖7A）。木質(zhì)素含量的變化趨勢(shì)與總酚變化基本一致，水楊酸處理明顯提高了木質(zhì)素含量，并在6 d 達(dá)到最大，高出對(duì)照 31.1%（圖7B）。由此可見(jiàn)，水楊酸處理能夠提高采后金刺梨果實(shí)實(shí)驗(yàn)貯藏中后期酚類物質(zhì)與木質(zhì)素的含量。

圖7 水楊酸處理對(duì)金刺梨果實(shí)總酚（A）和木質(zhì)素（B）含量的影響Fig.7 Effects of salicylic acid treatment on the content of total phenolic compounds（A）and lignin（B）in Rosa sterilis

3 討論

水楊酸作為一種重要的植物誘抗劑，可誘導(dǎo)植物產(chǎn)生系統(tǒng)獲得性抗性，增強(qiáng)植物的廣譜抗性[26]。采后水楊酸處理可以通過(guò)提高相應(yīng)防御酶活性來(lái)增強(qiáng)果實(shí)抗病性、延緩果實(shí)衰老。本研究發(fā)現(xiàn)，1.5 mmol/L水楊酸采后處理不僅可以降低貯藏期間金刺梨果實(shí)的腐爛率，還可以減輕果實(shí)失重率以及保持細(xì)胞膜完整性，從而延緩采后金刺梨果實(shí)品質(zhì)下降。這與采后水楊酸處理在芒果[27]、枸杞[14]、哈密瓜[11]等果實(shí)上的研究結(jié)果相似。

植物體受到外界環(huán)境脅迫后，會(huì)在短時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生大量ROS[28]。低水平的ROS 充當(dāng)誘導(dǎo)防御基因表達(dá)的信號(hào)分子，并參與細(xì)胞壁的交聯(lián)和木質(zhì)化以抵抗真菌感染[29?30]。本研究發(fā)現(xiàn)，水楊酸處理能夠提高采后金刺梨H2O2含量，這有可能與果實(shí)中SOD 活性的提升相關(guān)。該結(jié)果與水楊酸處理誘導(dǎo)“玉金香”厚皮甜瓜H2O2含量升高的結(jié)果類似[31]。但是，過(guò)量的ROS 則會(huì)對(duì)細(xì)胞本身造成破壞[29]。由SOD、CAT、POD 等活性氧代謝關(guān)鍵酶組成ROS 清除系統(tǒng)，能夠及時(shí)清除植物細(xì)胞中過(guò)量的ROS[32?33]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，水楊酸能顯著提升采后金刺梨果實(shí)中SOD、CAT 和POD 活性。在對(duì)梨[34]、厚皮甜瓜[31]、樹莓[35]、棗[36]以及番茄[37]的研究中也得到了類似結(jié)果。這說(shuō)明水楊酸提高金刺梨果實(shí)抗性，延緩果實(shí)衰老與其調(diào)節(jié)活性氧代謝有關(guān)。

苯丙烷代謝是植物的次級(jí)代謝，植物中許多主要的抗菌物質(zhì)均由苯丙烷代謝直接或間接的生成，如酚類化合物、木質(zhì)素等[38]。PAL 和4CL 是苯丙烷代謝中的兩個(gè)重要的限速酶，PAL 已被證實(shí)為植物體內(nèi)最主要的抗性酶之一，其活性的強(qiáng)弱與酚類和木質(zhì)素等抗菌物質(zhì)密切相關(guān)[39]。而4CL 的作用是調(diào)控苯丙烷代謝主途徑向木質(zhì)素合成途徑與花青素合成途徑進(jìn)行轉(zhuǎn)折[40]。本實(shí)驗(yàn)表明，水楊酸能顯著提升金刺梨果實(shí)中PAL 和4CL 的活性。這就說(shuō)明，采后水楊酸處理可激活金刺梨果實(shí)苯丙烷代謝途徑中關(guān)鍵酶活性，進(jìn)而增強(qiáng)金刺梨果實(shí)的采后抗病性。在對(duì)葡萄[41]、柑橘[42]果實(shí)的研究中也得到了類似的結(jié)果。酚類和木質(zhì)素是苯丙烷代謝的末端產(chǎn)物，具有一定的抗菌作用，酚類化合物在多酚氧化酶作用下可氧化成毒性更強(qiáng)的醌類物質(zhì)，能有效抑制病原物的擴(kuò)展。此外，酚類物質(zhì)也是木質(zhì)素合成的前體物[43?45]。果實(shí)中木質(zhì)素大量沉積，能夠?qū)е录?xì)胞壁木質(zhì)化，從而有效抵抗病原物的侵染[38]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，采后水楊酸處理促進(jìn)了金刺梨果實(shí)中總酚與木質(zhì)素的積累。在水楊酸處理柑橘[42]、葡萄[41]與煙草[46]的研究中也得到了類似的結(jié)果。

4 結(jié)論

采后1.5 mmol/L 水楊酸處理抑制金刺梨果實(shí)衰老過(guò)程中失重率、腐爛率和電導(dǎo)率的升高。水楊酸處理激活金刺梨果實(shí)中活性氧代謝，增強(qiáng)了SOD，CAT 和POD 抗氧化酶活性。另外，水楊酸處理提高了果實(shí)中與苯丙烷代謝關(guān)鍵酶PAL 與4CL 的活性，促進(jìn)了總酚和木質(zhì)素的積累。綜上所述，采后水楊酸處理可以延緩金刺梨果實(shí)衰老從而提高果實(shí)品質(zhì)。但由于本研究?jī)H僅是在短期室溫條件下通過(guò)水楊酸浸泡處理對(duì)金刺梨果實(shí)活性氧以及苯丙烷代謝中部分酶的變化進(jìn)行了研究，未來(lái)可以對(duì)活性氧代謝、苯丙烷代謝進(jìn)行更深入的研究，另外還可以從呼吸代謝、能量代謝方面開展研究，以便更全面地揭示水楊酸處理對(duì)金刺梨果實(shí)衰老的影響。