譚高好，王承業(yè)，鄭金明，尹青春，徐 彬，吳基任

（海南省食品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，海南?？?570314）

磺胺類藥物（Sulfonamides，SAs）和硝基咪唑類藥物（Nitroimidazoles，NMZs）因具有性質(zhì)穩(wěn)定、抗菌譜廣、高效、療效好、價(jià)格低和使用方便等優(yōu)點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用到養(yǎng)殖業(yè)和畜牧業(yè)上，用來(lái)治療和預(yù)防動(dòng)物的疾病感染[1?4]、促進(jìn)動(dòng)物的生長(zhǎng)[5?6]。SAs 易在動(dòng)物組織中富集進(jìn)而通過(guò)食物鏈傳遞的方式危害人體健康，具體表現(xiàn)在破壞人的造血系統(tǒng)，導(dǎo)致毒性損傷及激素障礙變態(tài)反應(yīng)等危害[7?9]。NMZs 長(zhǎng)期攝入則會(huì)引起消化道不良反應(yīng)，嚴(yán)重時(shí)會(huì)出現(xiàn)如變態(tài)反應(yīng)、過(guò)敏性休克、泌尿系統(tǒng)損害等[10]，動(dòng)物源性食品中的磺胺類和硝基咪唑類藥物的殘留對(duì)消費(fèi)者身體健康構(gòu)成直接威脅。

我國(guó)和歐盟將硝基咪唑類藥物列為動(dòng)物性食品不得檢出的對(duì)象。《GB 31650-2019 食品中獸藥最大殘留限量》[11]明確規(guī)定地美硝唑、甲硝唑允許作治療用，但不得在動(dòng)物性食品中檢出；同時(shí)也規(guī)定了動(dòng)物源性食品以及組織中磺胺類總量最大殘留限量（MRLs）為100 μg/kg；甲氧芐氨嘧啶MRLs 為50 μg/kg（馬肉組織為100 μg/kg）。但不合理濫用和違法使用等現(xiàn)象屢禁不止，抽檢中出現(xiàn)不合格樣品時(shí)有發(fā)生。

食品中磺胺類和硝基咪唑類藥物殘留的檢測(cè)方法報(bào)道主要有高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LCMS/MS）[12?15]和超高效液相色譜-四極桿/靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜（UPLC-Q-Orbitrap HRMS）[16?17]等。LC-MS/MS 具有快速、高效、高特異性、高靈敏度等特點(diǎn)，是目前檢測(cè)磺胺類及硝基咪唑類藥物及其代謝物殘留常用的分析。樣品前處理方法主要有加壓液體萃取（Pressurized liquid extraction，PLE）、基質(zhì)固相分散（MSPD）、固相萃取（Solid phase extraction，SPE）等[18?21]，但都存在操作步驟多、檢測(cè)成本高、耗時(shí)長(zhǎng)等問(wèn)題，很難實(shí)現(xiàn)快速高效檢測(cè)需求；而QuEChERS 能有效除去食品基質(zhì)中的絕大部分干擾物，且具有操作簡(jiǎn)單、快速，環(huán)境污染少等特點(diǎn)，因此常與LC-MS/MS 相結(jié)合分析食品中的獸藥。目前，研究報(bào)道大多數(shù)是針對(duì)磺胺類和硝基咪唑類單一種類藥物測(cè)定，或者其中少部分藥物殘留的分析，但隨著同類獸藥和具有抗菌增效作用藥物被廣泛使用，現(xiàn)有檢測(cè)方法不能滿足檢測(cè)需求。本文從質(zhì)譜條件、色譜柱、流動(dòng)相、提取溶劑、凈化方式、復(fù)溶液等參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，以期建立QuEChERS 凈化結(jié)合UPLCMS/MS 同時(shí)測(cè)定動(dòng)物源性食品中37 種獸藥殘留批量檢測(cè)的分析方法。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

16 種硝基咪唑混標(biāo)（詳見(jiàn)表1 序號(hào)2～17，其中羥基甲硝唑?yàn)榧紫踹虼x物）、19 種磺胺類混標(biāo)（詳見(jiàn)表1 序號(hào)18～36） 100 μg/mL，A ChmTek. Inc；磺胺二甲異嘧啶、羥甲基甲硝咪唑（羥甲基甲硝咪唑?yàn)槎紫踹溥颉⒙逑鯂}唑代謝物） 純度均≥99.0%，購(gòu)于Dr Ehrenstorfer 公司；乙腈、甲醇 色譜純，德國(guó)Merck 公司；甲酸 色譜純，美國(guó)恩科化學(xué)（ACS）；鴨肉中磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶質(zhì)控樣品 中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)院測(cè)試評(píng)價(jià)中心；QuEChERS 提取鹽包 安捷倫科技有限公司，部件號(hào)5982-1010、5982-0101；十八烷基硅烷鍵合硅膠（C18，50 μm） 博納艾杰爾科技有限公司；N-丙基乙二胺（PSA，40～60 μm） Agela Technologies；氨基（NH2）吸附劑（40～63 μm） 逗點(diǎn)生物技術(shù)有限公司；陶瓷均質(zhì)子安捷倫科技有限公司；Waters ACQUITY UPLC BEH C18（1.7 μm，2.1 mm×100 mm） 沃特世科技有限公司；Thermo Accucore C18（2.6 μm，2.1×100 mm）賽默飛世爾科技有限公司；ACE Ultra Core 2.5 Super C18（2.5 μm，2.1 mm×100 mm） 英國(guó)ACE；HYPERSEP Rotain-PEP 固相萃取柱、EMR-Lipid 固相萃取柱（3 mL，300 mg） 安捷倫科技有限公司；Waters PRIME HLB 固相萃取柱（6cc，200 mg） 沃特世科技有限公司；羅非魚(yú)、海蝦、海蟹、螺、豬肉 海口市某農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)。

表1 37 種獸藥質(zhì)譜檢測(cè)參數(shù)Table 1 Detection parameters of 37 veterinary drugs

Thermo TSQ Quantiva 三重四極桿質(zhì)譜儀（配有ESI 源）、Ultimate 3000 超高效液相色譜儀 美國(guó)Thermo Fisher 公司；Centrifuge 5804R 高速冷凍離心機(jī) Eppendorf 公司；Multi Reax 多管渦旋混合器 德國(guó)Heidolph 公司；Mettler XS204 型十萬(wàn)分之一分析天平 美國(guó)Mettler Toledo 公司；SCIENTZ-950E 超聲波提取器 寧波新芝生物科技公司；Milli-Q 超純水儀 美國(guó)Millipore 公司；AutoVap S60 多樣品自動(dòng)濃縮儀 美國(guó)ATR 公司；0.22 μm 有機(jī)相針式濾器 尼龍。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制 分別準(zhǔn)確稱取適量磺胺二甲異嘧啶、羥甲基甲硝咪唑標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解配制成為濃度為100 μg/mL 標(biāo)準(zhǔn)使用溶液。

混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液（1.00 μg/mL）：準(zhǔn)確吸取濃度均為100 μg/mL 的16 種硝基咪唑混標(biāo)溶液、19 種磺胺類混標(biāo)和100 μg/mL 的磺胺二甲異嘧啶、羥甲基甲硝咪唑標(biāo)準(zhǔn)使用溶液各100 μL 至10 mL 容量瓶中，用甲醇稀釋并定容。所有標(biāo)準(zhǔn)使用溶液置于?18 ℃冰箱冷藏保存。

1.2.2 樣品前處理 將樣品切成小塊后用勻漿機(jī)粉碎，準(zhǔn)確稱取2 g（精確至0.01 g）試樣置于50 mL 塑料離心管中，加入3 粒陶瓷均質(zhì)子，再加入10 mL 1%甲酸乙腈提取液[22]，漩渦10 min，超聲（超聲波功率800 W）10 min，4 ℃ 10000 r/min 離心5 min；凈化：取上清液2.0 mL，加入凈化鹽包（含約100 mg C18、200 mg PSA、100 mg NH2），漩渦10 min，4 ℃10000 r/min 離心5 min，取上清液1.0 mL 置于氮吹儀中，40 ℃氮吹至近干。加入1.0 mL 甲醇-水溶液（50:50, V/V），超聲溶解5 min，過(guò)0.22 μm 有機(jī)相濾膜，上機(jī)測(cè)定。

1.2.3 基質(zhì)匹配混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液配制 取空白樣品，按照“1.2.2 項(xiàng)”處理方法制得空白基質(zhì)溶液，并用其稀釋混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液，配成濃度分別為1、5、10、20、50、100、200 ng/mL（分別相當(dāng)于測(cè)試樣品中含有5、25、50、100、250、500、1000 μg/mL 的目標(biāo)化合物）系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.2.4 分析條件

1.2.4.1 色譜條件 ACQUITY UPLC BEH C18（1.7 μm，2.1 mm×100 mm）；柱溫35 ℃；進(jìn)樣量3.0 μL；梯度洗脫程序見(jiàn)表2 中運(yùn)行時(shí)間為16 min 的梯度。

表2 7 min 和16 min 梯度洗脫程序Table 2 Gradient elution program of 7 min and 16 min

1.2.4.2 質(zhì)譜條件 離子源：H-ESI 源，正離子模式；掃描模式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式；噴霧電壓3500 kV；汽化溫度350 ℃；離子傳輸管溫度350 ℃；鞘氣（氮?dú)猓┝魉?2 L/min；輔助氣（氮?dú)猓┝魉? L/min；碰撞氣：高純氬氣，壓力為200 KPa。優(yōu)化后37 種目標(biāo)化合物的質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)表1。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用統(tǒng)計(jì)軟件Excel 2007 和Thermo TSQ Quantiva 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀配備的定量分析軟件對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)處理分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜和質(zhì)譜條件的優(yōu)化

2.1.1 質(zhì)譜條件的優(yōu)化 質(zhì)譜條件中的碰撞能量和RF Lens 電壓對(duì)離子豐度具有較大影響，對(duì)方法靈敏度有決定性作用。碰撞能量過(guò)高時(shí)，由母離子生成的碎片過(guò)多，子離子響應(yīng)過(guò)低；碰撞能量過(guò)低時(shí)，不能生成所需的子離子[23]。RF Lens 電壓的優(yōu)化有利于得到更穩(wěn)定的化合物響應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)針泵以流動(dòng)注射的方式對(duì)“1.2.1 配制”中濃度均為（1.0 μg/mL）的混合標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行優(yōu)化，接入三通接頭并通入分析時(shí)使用的初始流動(dòng)相，使優(yōu)化條件同分析條件一致，儀器默認(rèn)碰撞能范圍為5～55 V 的條件下進(jìn)行母離子全掃描，為每個(gè)待測(cè)藥物選取響應(yīng)最高的兩對(duì)離子對(duì)及相應(yīng)的最佳RF Lens 電壓和碰撞能量，并確定其定量與定性離子對(duì)（具體優(yōu)化后參數(shù)見(jiàn)表1）。

2.1.2 色譜柱的篩選 色譜分離優(yōu)化考慮的主要因素有共流出物分離情況和采集時(shí)間。本文對(duì)比了Waters ACQUITY UPLC BEH C18、Thermo Accucore C18和ACE Ultra Core 2.5 Super C18三種色譜柱分離效果，發(fā)現(xiàn)Waters 柱分析大部分目標(biāo)物響應(yīng)強(qiáng)度均比Thermo 和ACE 柱高。同時(shí)考察Waters 柱洗脫梯度程序?qū)?7 種目標(biāo)物分離的影響，比較了運(yùn)行7 和16 min 時(shí)各色譜峰的分離效果（洗脫程序見(jiàn)表2），由圖1 可以看出運(yùn)行7 min 時(shí)總離子圖多數(shù)峰形較寬，大部分目標(biāo)物都集中重疊在5～6.5 min時(shí)出峰；而運(yùn)行時(shí)間調(diào)至16 min 時(shí)目標(biāo)化合物峰形變尖銳，出峰分布更均勻，分離效果較好；且Waters柱對(duì)分離磺胺鄰二甲氧嘧啶、磺胺間二甲氧嘧啶；磺胺間甲氧嘧啶、磺胺對(duì)甲氧嘧啶、磺胺甲氧噠嗪；磺胺二甲嘧啶、磺胺二甲異嘧啶三組異構(gòu)體效果較好，均能達(dá)到基線分離（見(jiàn)圖2）。綜合分離及響應(yīng)效果、峰形、色譜柱保留時(shí)間等[22,24]因素，最終選用Waters柱進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分析。

圖1 37 種獸藥運(yùn)行7 min 和16 min 時(shí)總離子流色譜圖（Waters BEH 柱）Fig.1 37 veterinary drugs at 7min and 16min of total ion chromatograms (Waters BEH column)

圖2 三組磺胺類異構(gòu)體質(zhì)量色譜圖Fig.2 Mass chromatogram of three groups sulfonamides isomers

2.2 流動(dòng)相的篩選

本研究對(duì)比了水-甲醇、0.1%甲酸水-甲醇、5 mmol/L 乙酸銨水溶液（含0.1%甲酸）-甲醇、0.1%甲酸水-乙腈和5 mmol/L 乙酸銨水溶液（含0.1%甲酸）-乙腈5 種不同流動(dòng)相體系對(duì)37 種獸藥的分離及響應(yīng)效果。結(jié)果表明：由于乙腈洗脫能力較強(qiáng)，目標(biāo)化合物整體出峰時(shí)間提前，存在色譜峰重疊現(xiàn)象，而且不能完全將磺胺類中磺胺間甲氧嘧啶、磺胺對(duì)甲氧嘧啶、磺胺甲氧噠嗪三種異構(gòu)體色譜峰分開(kāi)。在流動(dòng)相中加入5 mmol/L 乙酸銨溶液時(shí)可以適當(dāng)?shù)母纳品逍?，但同時(shí)大多數(shù)硝基咪唑及其代謝物的響應(yīng)效果均下降，尤其是對(duì)羥甲基甲硝咪唑、羥基甲硝唑和氯甲硝咪唑三種物質(zhì)影響最大?；前奉愒谒嵝匀芤褐幸苑肿訝顟B(tài)存在，從而很好地與固定相作用而被保留和分離，因此需在流動(dòng)相中加入一定量的甲酸[25]。

綜合考慮，采用0.1%甲酸水-甲醇作為流動(dòng)相時(shí)對(duì)大部分磺胺類和硝基咪唑類藥物及其代謝物的分離效果均較好，色譜峰型、信號(hào)響應(yīng)、穩(wěn)定性最優(yōu)。張鴻偉[16]、勵(lì)炯[26]等分別在分析磺胺類和硝基咪唑類藥物殘留的方法時(shí)，均發(fā)現(xiàn)流動(dòng)相采用0.1%甲酸水-甲醇時(shí)各目標(biāo)物分離度和質(zhì)譜響應(yīng)效果最佳。因此本文選擇是0.1%甲酸水-甲醇作為體系的流動(dòng)相。

2.3 樣品提取液的篩選

以空白基質(zhì)加標(biāo)回收率為指標(biāo)，添加100 μg/kg加標(biāo)量考察各目標(biāo)物回收率。本研究分別以1%甲酸-乙腈、2%甲酸-乙腈、5%甲酸-乙腈、80%乙腈-水（含1%甲酸）、1%甲酸-甲醇、2%甲酸-甲醇6 種有機(jī)溶劑作為提取液。由圖3 可知，采用5%甲酸-乙腈、80%乙腈-水（含1%甲酸）、1%甲酸-甲醇、2%甲酸-甲醇做提取溶劑時(shí)，羥基甲硝唑和羥甲基甲硝咪唑的提取率均小于40%，可能是兩種物質(zhì)結(jié)構(gòu)上的羥基官能團(tuán)導(dǎo)致在酸度過(guò)高和甲醇提取體系中不易被提取出來(lái)；2%甲酸-乙腈提取時(shí)阿苯噠唑亞砜、磺胺苯甲酰、磺胺苯吡唑、磺胺間二甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉5 種回收率均小于40%；選用1%甲酸-乙腈提取時(shí)37 種獸藥的回收率均在70%～100%之間。與文獻(xiàn)[27?29]中結(jié)果相同，綜合考慮，本文選擇1%甲酸-乙腈作為提取液。

圖3 不同提取溶劑對(duì)37 種獸藥回收率的影響Fig.3 Effects of different extraction solvents of adsorbent on recoveries of 37 veterinary drugs

2.4 凈化方式的篩選

以空白基質(zhì)加標(biāo)回收率為指標(biāo)，添加100 μg/kg加標(biāo)量考察各目標(biāo)物回收率。基于文獻(xiàn)[16?17,26,30?32]報(bào)道，本文比較了C18+PAS 混合吸附劑、C18+PSA+NH2混合吸附劑、HYPERSEP Rotain-PEP 固相萃取柱、安捷倫QuEChERS 提取鹽包、EMRLipid 固相萃取柱、Waters PRIME HLB 固相萃取柱6種方式的凈化效果。由圖4 可知，HYPERSEP Rotain-PEP 柱、安捷倫QuEChERS 提取鹽包、EMR-Lipid柱、Waters PRIME HLB 柱進(jìn)行凈化時(shí)，大部分磺胺類回收率均小于60%，而甲氧芐氨嘧啶和硝基咪唑及其代謝物回收率均大于70%，可能是甲氧芐啶磺胺結(jié)構(gòu)中苯環(huán)上的三個(gè)甲氧基的影響，使其化學(xué)性質(zhì)與其他磺胺類產(chǎn)生較大的差異。采用C18+PSA（100 mg+100 mg）和C18+PSA+NH2（100 mg+100 mg+150 mg）進(jìn)行凈化時(shí)所得回收率均在60%～95%之間；通過(guò)進(jìn)一步研究三種吸附劑的配比和用量：C18吸附劑含量（100、200 mg），PSA 吸劑含量（100、200 mg），NH2吸附劑含量（50、100 mg）時(shí)，從圖5 中可見(jiàn)當(dāng)C18+PAS+NH2三種吸附劑配比為100 mg+200 mg+100 mg 時(shí)，37 種目標(biāo)物回收率總體較好。因此，本試驗(yàn)采用C18+PSA+NH2（100 mg+200 mg+100mg）的填料進(jìn)行樣品凈化。

圖5 不同吸附劑加入量?jī)艋瘜?duì)37 種獸藥回收率的影響Fig.5 Effects of different mass of adsorbent on recoveries of 37 veterinary drugs

2.5 復(fù)溶液的選擇

以空白基質(zhì)加標(biāo)回收率為指標(biāo)，添加100 μg/kg加標(biāo)量考察各目標(biāo)物回收率。按1.2 項(xiàng)下進(jìn)行樣品前處理，取1 mL 凈化后的提取液，置于氮?dú)鈨x45 ℃吹至近干后復(fù)溶，對(duì)比不同比例的甲醇/水和乙腈/水作為復(fù)溶液對(duì)目標(biāo)物回收率的影響。使用不同比例的乙腈/水作為復(fù)溶液時(shí)大部分硝基咪唑及其代謝物的峰型較差，其中羥甲基硝咪唑、羥基甲硝唑還出現(xiàn)峰分叉現(xiàn)象；由圖6 可知，隨著乙腈比比例的增大，大部分目標(biāo)物回收率呈下降趨勢(shì)，其中甲硝唑、甲氧芐氨嘧啶、羥甲基甲硝咪唑下降最為明顯。采用不同比例甲醇/水復(fù)溶時(shí)，隨著甲醇比例的增加，甲苯硝唑、奧苯噠唑、氟苯咪唑、芬苯達(dá)唑4 種硝基咪唑類回收率提高至80%～90%；當(dāng)甲醇比例達(dá)80%時(shí)，磺胺醋酰、羥基甲硝唑、地美硝唑、磺胺嘧啶回收率下降顯著。10%甲醇/水作為復(fù)溶液小部分硝唑咪唑及其代謝物的峰型不好，且較使用50%甲醇/水時(shí)回收率低，可能是增加甲醇的比率有利于硝基咪唑類的溶出率，但當(dāng)甲醇比率太大會(huì)引起溶劑效應(yīng)。綜合考慮，本試驗(yàn)采用50%甲醇/水溶液為復(fù)溶液。

圖6 不同復(fù)溶液對(duì)37 種獸藥回收率的影響Fig.6 Effects of different dissolved solution on recoveries of 37 veterinary drugs

2.6 線性范圍、檢出限、定量限

采用優(yōu)化好的UPLC-MS/MS 參數(shù)進(jìn)行方法學(xué)研究，基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。移取適量的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，用空白樣品提取液分別配制成不同質(zhì)量濃度的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液，具體見(jiàn)1.2.3 項(xiàng)；以各組分濃度與其色譜峰面積進(jìn)行線性回歸，結(jié)果37 種目標(biāo)化合物均呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，線性范圍為1.0～200 μg/L，相關(guān)系數(shù)r≥0.9980。在空白羅非魚(yú)基質(zhì)樣品中進(jìn)行低濃度加標(biāo)試驗(yàn)，直到目標(biāo)化合物濃度添加量至信噪比為3 和10 獲得方法檢出限（LOD）為0.01～0.16 μg/kg，定量限（LOQ）0.01～0.54 μg/kg，具體數(shù)值列于表3。與現(xiàn)行相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)比較[33?35]，本方法中硝基咪唑類及其代謝物和磺胺類的檢出限均分別低于《SN/T 2624-2010 動(dòng)物源性食品中多種堿性藥物殘留量的檢測(cè)方法液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》、《SN/T 1626-2019 出口肉及肉制品中甲硝唑、替硝唑、奧硝唑、洛硝噠唑、二甲硝咪唑、賽克硝唑殘留量測(cè)定方法液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》方法中的測(cè)定低限和《農(nóng)業(yè)部1025 號(hào)公告-23-2008 動(dòng)物源食品中磺胺類藥物殘留檢測(cè)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》方法中的檢測(cè)低限，說(shuō)明本檢測(cè)方法靈敏度較高。

表3 37 種獸藥的線性關(guān)系、相關(guān)系數(shù)和定量限Table 3 Linear equations, correlation coefficents (r) and quantitative limit of 37 veterinary drugs

2.7 回收率實(shí)驗(yàn)和精密度實(shí)驗(yàn)

將“1.2.1 配制”的混合標(biāo)準(zhǔn)使用液添加到空白羅非魚(yú)樣品進(jìn)行5、50、100 μg/kg 三個(gè)水平的添加回收實(shí)驗(yàn)，每個(gè)水平取6 個(gè)平行樣，在優(yōu)化條件下進(jìn)行處理后測(cè)定，平均回收率為70.1%～97.7%，方法的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD 為0.9%～5.6%，說(shuō)明本方法回收率及重復(fù)性較好。對(duì)質(zhì)量濃度為20.0 ng/mL 的37 種目標(biāo)物標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行重復(fù)測(cè)定6 次，RSD（n=6）為0.4%～2.3%，說(shuō)明儀器具有良好的精密度。

2.8 樣品測(cè)定

為考察方法準(zhǔn)確性和科學(xué)性，運(yùn)用該方法對(duì)中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)院測(cè)試評(píng)價(jià)中心的質(zhì)控樣品進(jìn)行測(cè)定，檢測(cè)結(jié)果均在特性值區(qū)間范圍內(nèi)（見(jiàn)表4）。通過(guò)本文建立的方法對(duì)?？谑心侈r(nóng)貿(mào)市場(chǎng)購(gòu)買的152 批動(dòng)物源性食品樣品中37 種獸藥殘留量的進(jìn)行測(cè)定，每個(gè)樣品平行測(cè)定2 次，發(fā)現(xiàn)羅非魚(yú)1 號(hào)樣磺胺類總量和甲氧芐氨嘧啶兩個(gè)項(xiàng)目均不合格，羅非魚(yú)2 號(hào)樣磺胺類總量不合格，硝基咪唑及其代謝物類藥物均未檢出（見(jiàn)表5）。

表4 質(zhì)控樣品檢測(cè)結(jié)果Table 4 Results of quality control sample

表5 樣品中硝基咪唑類及其代謝物和磺胺類的檢出結(jié)果Table 5 The results of nitroimidazoles and their metabolites, sulfonamides in the samples

3 結(jié)論

本文通過(guò)對(duì)質(zhì)譜條件、色譜柱、流動(dòng)相、提取溶劑、凈化方式、復(fù)溶液等參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化，采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線外標(biāo)法定量，結(jié)合UPLC-MS/MS 方法檢測(cè)，建立了UPLC-MS/MS 測(cè)定動(dòng)物源性食品中37 種獸藥殘留的測(cè)定方法。運(yùn)用該方法對(duì)質(zhì)控樣中磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶進(jìn)行分析，結(jié)果都在特征范圍值區(qū)間之內(nèi)；并通過(guò)檢測(cè)?？谑心侈r(nóng)貿(mào)市場(chǎng)購(gòu)買的152 批動(dòng)物源性食品樣品，發(fā)現(xiàn)兩批問(wèn)題樣品。該方法前處理簡(jiǎn)單，具有較好的準(zhǔn)確度、靈敏度和精密度；與現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)相比，縮短了前處理和分析的時(shí)間，同時(shí)降低方法檢出限和定量限，為大批量動(dòng)物源性食品中硝基咪唑類藥物及其代謝物和磺胺類獸藥殘留的快速篩查和定量分析檢測(cè)提供了可靠的技術(shù)支持。