李學(xué)芳， 張潔， 張彬若， 楊竹雅

（1.云南中醫(yī)藥大學(xué)，云南昆明 650500；2.云南中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院暨云南省南藥可持續(xù)利用重點實驗室，云南昆明 650500）

燈盞細(xì)辛為菊科飛蓬屬植物短葶飛蓬Erigeron breviscapus（Vant.）Hand.-Mazz.的干燥全草，其始載于《滇南本草》，是云南省苗族傳統(tǒng)用藥，在民間廣為流傳，又名燈盞菊、土細(xì)辛、地頂草、細(xì)辛草、東菊等[1]。諸多本草文獻(xiàn)均記載，其性溫，味辛、微苦，能散寒解表，祛風(fēng)除濕，活絡(luò)止痛，用于癱瘓、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、跌撲損傷及胃痛、牙痛等病癥[2-4]。臨床研究表明，燈盞花素制劑對腦中風(fēng)及其他心腦血管疾病和與微循環(huán)障礙有關(guān)的疾病均有較好的療效[5-8]。燈盞細(xì)辛主要含有黃酮類、咖啡酰類、香豆素類、木脂素類、萜類等成分，其中，以野黃芩苷（燈盞花乙素）含量最高[9]。野黃芩苷（燈盞花乙素）具有抗炎、抗氧化、抗纖維化、抗腫瘤、改善心腦缺血損傷、防治骨質(zhì)疏松等藥理作用[10]?，F(xiàn)有研究報道，野黃芩苷（燈盞花乙素）能誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌A549 細(xì)胞凋亡而起到抗肺癌作用[11]，對動脈粥樣硬化具有一定的保護(hù)作用[12]，可治療阿爾茲海默癥[13]，對糖尿病小鼠視神經(jīng)具有再生作用[14]。據(jù)不完全統(tǒng)計，目前，全國有50 多家企業(yè)生產(chǎn)燈盞細(xì)辛制劑，每年消耗的燈盞細(xì)辛干燥全草約在1 000噸以上[15]。由于用量的增多，野生資源已遭到嚴(yán)重的破壞，栽培資源還遠(yuǎn)不能滿足市場需求，價格不斷上漲。由于利益的驅(qū)使及鑒別知識的缺乏，藥農(nóng)在采挖燈盞細(xì)辛銷售時，將一些外形相似的同科植物一同采挖后當(dāng)作燈盞花藥材銷售。通過對市場調(diào)研發(fā)現(xiàn)，其中有同科不同屬植物密毛紫菀Aster vestitusFranch.為較常見的一種混用品。為確保燈盞細(xì)辛藥材品質(zhì)，規(guī)范和杜絕市場燈盞細(xì)辛的混用現(xiàn)象，本研究對混用的密毛紫菀與燈盞細(xì)辛從基原、藥材性狀、顯微、理化特征及含量方面進(jìn)行了鑒別，以期為更好地鑒定燈盞細(xì)辛及混偽品提供詳實的理論依據(jù)?，F(xiàn)將研究結(jié)果報道如下。

1 材料

1.1 試藥

1.1.1 燈盞細(xì)辛、密毛紫菀樣品 均采自麗江永勝，經(jīng)云南中醫(yī)藥大學(xué)邱斌正高級工程師鑒定為短葶飛蓬Erigeron breviscapus（Vant.）Hand.-Mazz.及密毛紫菀Aster vestitusFranch.的全草。

1.1.2 野黃芩苷（C21H18O12）對照品 購于中國藥品生物制品檢定所，批號：101574-200623。

1.2 試劑To 型生物制片透明劑（廣西岑溪市松香廠）；無水乙醇（分析純）[利安隆博華（天津）醫(yī)藥化學(xué)有限公司]；番紅（上海三愛思試劑有限公司）；固綠（上?；瘜W(xué)試劑站）；中性樹膠（無錫市江原實業(yè)技貿(mào)公司）；石蠟（56～58 ℃，上海永華石蠟有限公司）；三氯甲烷、乙酸乙酯、甲酸（分析純，上海申博化工有限公司）；石油醚（AR）（60～90 ℃，廣東光華化學(xué)廠有限公司）；甲醇（分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；甲醇、乙腈為色譜純（美國Fisher公司）。

1.3 儀器FA2004N 電子分析天平（上海分析儀器公司）；BM-Ⅵ生物組織冷凍包埋機(jī)、QP-Ⅲ生物組織切片機(jī)、TS-12H+生物組織自動脫水機(jī)（湖北孝感儀器公司）；Micr E400 Nikon 顯微鏡、數(shù)碼顯微照相機(jī)（日本尼康公司）；GZX-9030 MBE 數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱、101A-2E 電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海通用儀器公司）；CS-Ⅳ型生物組織攤片烤片機(jī)、MD-Ⅱ型生物組織刀刃磨機(jī)（湖北孝感儀器公司）；LC-2010A 日本島津高效液相色譜儀，LCsolution工作站，Waters e2695 C18分析柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；LC-2010A 日本島津高效液相色譜儀，LCsolution 工作站；FA2004N 電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）。

2 方法

2.1 性狀鑒別采用眼觀、手摸、鼻聞、口嘗對燈盞細(xì)辛及密毛紫菀樣品從形狀、大小、色澤、表面、質(zhì)地、斷面、氣、味等項內(nèi)容進(jìn)行鑒別。

2.2 顯微鑒別按照常規(guī)藥材鑒定方法，制作燈盞細(xì)辛及密毛紫菀樣品的橫切面永久制片及粉末制片，置于顯微鏡下觀察、描述和分析。

2.3 理化鑒別采用大類化學(xué)成分預(yù)試驗方法進(jìn)行。

2.4 含量測定按照2020年版《中華人民共和國藥典》（以下簡稱《中國藥典》）“燈盞細(xì)辛”【含量測定】項下方法進(jìn)行測定。

2.4.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-0.1%磷酸溶液（40∶60）為流動相，檢測波長為335 nm。理論板數(shù)按野黃芩苷峰計算應(yīng)不低于5 000。

2.4.2 對照品溶液的制備 取野黃芩苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL 含0.1 mg 的溶液，即得。

2.4.3 供試品溶液的制備 取燈盞細(xì)辛、密毛紫菀樣品粗粉各約0.5 g，精密稱定，分別置于索氏提取器中。加入三氯甲烷適量，加熱回流至提取液無綠色；棄去三氯甲烷液，藥渣揮去溶劑，連同濾紙筒移入具塞錐形瓶中。精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定質(zhì)量，放置1 h，水浴中加熱回流1 h，放冷；再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量；搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液25 mL，回收溶劑至干，殘渣用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4.4 測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5～10 μL，注入液相色譜儀，測定，即得。

3 結(jié)果

3.1 原植物鑒別

3.1.1 燈盞細(xì)辛 多年生草本，高10～30（～50）cm，全株密被柔毛。根莖粗短，須根多數(shù)，稍肉質(zhì)。莖直立，多單一，或中上部偶有分枝，圓柱形，綠色或基部和上部帶紫紅色，下部具縱棱，上部無棱。葉全緣，兩面有粗短毛，基生葉密集成蓮座狀，匙形或匙狀倒披針形，先端短尖，基部漸狹下延成短柄，帶紅色；莖生葉互生，形同基生葉但較基生葉小，最上面的葉片線形，無柄。頭狀花序單生枝頂或近頂腋生，直徑1 ～ 2 cm，異形；總苞杯狀，苞片3列，綠色，線狀披針形，被白色硬短毛；外圍為舌狀花，藍(lán)色至紫藍(lán)色，2～3 層，闊線形，先端淺3 齒裂，基部漸狹成細(xì)管狀；雌蕊1，子房下位，扁圓形，密被平貼粗毛，花柱單一，長約為花冠的1/3，柱頭2 裂；中央為管狀花，黃色，兩性，先端5 裂，裂片卵狀三角形；雄蕊5，較花冠短，花藥合生；花絲絲狀，長約為花冠之半；子房下位，形同雌花，花柱較雄蕊稍短，柱頭2裂，裂片箭頭狀。瘦果扁平，狹矩圓形，有白色冠毛2 層，外層極短?；ㄆ谠? ～10月份。見圖1。

3.1.2 密毛紫菀 多年生草本，高40 ～ 100 cm。根莖粗壯，生多數(shù)長須根；須根粗線形，長達(dá)15 cm，徑1 ～ 1.5 mm，具纖維狀細(xì)根。莖直立，常單一，上部具分枝，莖和枝有細(xì)縱棱，密被具節(jié)長毛。葉密集，下部葉在花期枯萎，中部葉狹長圓形或長圓狀披針形，先端急尖，具小尖頭，基部楔形或圓，邊緣全緣或稀上部具疏齒，表面綠色，密被具節(jié)糙毛和密具腺點，背面淡綠色，密被具節(jié)卷曲的細(xì)毛；葉柄無；上部葉線狀披針形或線狀長圓形，較小。頭狀花序徑2 ～ 2.5 cm，3 ～ 7 個生于莖和枝先端，排列成復(fù)傘房狀花序；花序梗密被具柄短腺毛和散生具節(jié)長毛；總苞半球形；總苞片約3層，覆瓦狀排列，外層較短，草質(zhì)，先端銳尖，常帶紫紅色，密被腺毛，內(nèi)層上部草質(zhì)，下部和邊緣狹膜質(zhì)，疏被腺毛。雌花舌狀，舌片條形，白色或淺紫紅色；兩性花花冠管狀，黃色，先端5齒裂。瘦果倒卵形，壓扁，兩面各具1 肋，被白色絹毛；冠毛1 層，污白色或稍帶紅色，糙毛狀?；?、果期在8～12月份。見圖2。

3.1.3 燈盞細(xì)辛與密毛紫菀的主要形態(tài)差異 二者均為菊科植物，形態(tài)特征較相似，主要形態(tài)差異：燈盞細(xì)辛花總苞片2～3 層，狹窄，近等長；舌狀花2～3 層：花柱分枝短三角形。密毛紫菀花總苞片多層，較寬，不等長，稀近等長；舌狀花通常1層；花柱先端披針形。

3.2 性狀鑒別

3.2.1 燈盞細(xì)辛 全草長15～25 cm。根莖長1～3 cm，直徑0.2 ～ 0.5 cm；表面凹凸不平，著生多數(shù)圓柱形細(xì)根，直徑約0.1 cm，淡褐色至黃褐色。莖圓柱形，長14～22 cm，直徑0.1～0.2 cm；黃綠色至淡棕色，具細(xì)縱棱線，被白色短柔毛；質(zhì)脆，斷面黃白色，有髓或中空?；~皺縮、破碎，完整者展平后呈倒卵狀披針形、匙形、闊披針形或闊倒卵形，長1.5 ～ 9 cm，寬0.5 ～ 1.3 cm；黃綠色，先端鈍圓，有短尖，基部漸狹，全緣；莖生葉互生，披針形，基部抱莖。頭狀花序頂生。瘦果扁倒卵形。氣微香，味微苦[7]。見圖3。

3.2.2 密毛紫菀 全草長40～100 cm。根莖長達(dá)1.5 cm，直徑0.1 ～ 0.15 cm，表面著生纖維狀細(xì)根，直徑約0.1 cm，淡褐色至黃褐色。莖和枝具細(xì)縱棱，密被白色短柔毛。斷面黃白色，有髓或中空。基生葉多枯萎脫落，完整者展平后中部呈狹長圓形或長圓狀披針形，基部楔形或圓，莖生葉線狀披針形或線狀長圓形，較小。邊緣全緣或稀上部具疏齒，頭狀花序頂生。瘦果扁倒卵形。氣微香，味微苦。見圖4。

圖4 密毛紫菀藥材圖Figure 4 The appearance features of Aster vestitus

二者主要鑒別點為燈盞細(xì)辛基生葉較多，但市場銷售的燈盞細(xì)辛和密毛紫菀藥材一般多碎斷，花少見，故不易鑒別。

3.3 顯微鑒別

3.3.1 組織特征

3.3.1.1 根橫切面 燈盞花（直徑1.5 mm）：表皮由1～2 列排列較緊密的類圓形細(xì)胞組成，外壁增厚，細(xì)胞內(nèi)有黃棕色色素。皮層稍寬，由9～11列卵圓形或類圓形薄壁細(xì)胞組成，切向延長。近內(nèi)皮層處有斷續(xù)排列成環(huán)的分泌腔，類圓形。內(nèi)皮層及中柱鞘均明顯。韌皮部細(xì)胞排列緊密；木質(zhì)部束6，由內(nèi)向外呈放射狀，于外部連續(xù)成環(huán)，導(dǎo)管散在。有髓部，較小，由薄壁細(xì)胞組成。見圖5。密毛紫菀（直徑1.7 mm）：表皮細(xì)胞1列，細(xì)胞扁平，外壁增厚。皮層較寬，由十?dāng)?shù)列類圓形薄壁細(xì)胞組成，近內(nèi)皮層處有石細(xì)胞散列。內(nèi)皮層及中柱鞘均明顯。韌皮部多存在于木質(zhì)部弧角間，細(xì)胞排列緊密；木質(zhì)部呈五角星形，導(dǎo)管散在。無髓部。見圖6。

圖5 燈盞細(xì)辛根橫切面圖（10×10）Figure 5 The cross section manifestations of Erigeron breviscapus root（10×10）

圖6 密毛紫菀根橫切面圖（10×10）Figure 6 The cross section manifestations of Aster vestitus root（10×10）

3.3.1.2 莖橫切面 燈盞細(xì)辛（直徑2 mm）：表皮為1 列類圓形細(xì)胞；外被角質(zhì)層，有非腺毛和腺毛。皮層狹窄，外側(cè)有3～5 列厚角細(xì)胞；內(nèi)側(cè)近韌皮部處有分泌腔。維管束外韌型，約10～12 個環(huán)列。韌皮部外側(cè)有韌皮纖維束；束內(nèi)形成層明顯；木質(zhì)部由木纖維切向相連成波狀環(huán)，導(dǎo)管徑向排列，有環(huán)髓纖維。髓部寬廣，約占橫切面的2/3。見圖7。

圖7 燈盞細(xì)辛莖橫切面圖（10×10）Figure 7 The cross section manifestations of Erigeron breviscapus stem

密毛紫菀（直徑2.5 mm）：表皮細(xì)胞1列，類方形，外被角質(zhì)層，有非腺毛。皮層窄，外側(cè)為5～6 列厚角細(xì)胞，內(nèi)側(cè)為4 ～ 6 列類長圓形薄壁細(xì)胞。維管束外韌型，約15～20 個環(huán)列。韌皮部外側(cè)有韌皮纖維束；束內(nèi)形成層明顯；木質(zhì)部由木纖維切向相連成深波狀環(huán)，導(dǎo)管徑向排列，有環(huán)髓纖維。髓部寬廣，約占橫切面的2/3。見圖8。

3.3.1.3 葉橫切面 燈盞細(xì)辛葉（直徑0.5 mm）：上表皮細(xì)胞1列，細(xì)胞類圓形，排列較整齊。葉肉組織分化不明顯。中脈向下突出，上表面較平直，維管束3，外韌型，較大一個呈杯狀，另兩個較小，導(dǎo)管徑向排列。近韌皮部處有分泌腔散列。下表皮細(xì)胞1～2 列，細(xì)胞較上表皮稍小，外有非腺毛及氣孔。見圖9。

密毛紫菀（直徑0.5 mm）：上表皮細(xì)胞1列，細(xì)胞類圓形，大小相間排列。柵欄組織細(xì)胞1列，海綿組織細(xì)胞排列疏松，細(xì)胞中含細(xì)小顆粒狀物。中脈向下突出，上表面略向下彎曲，維管束1，外韌型，導(dǎo)管徑向排列。下表皮細(xì)胞1列，細(xì)胞較上表皮稍小，外有非腺毛及氣孔。見圖10。

3.3.2 粉末特征 燈盞細(xì)辛全草粉末灰綠色。鞭狀非腺毛4～8 個細(xì)胞，壁薄，頂端細(xì)胞驟細(xì)而延長成鞭狀。非腺毛2～8 個細(xì)胞，有的基部細(xì)胞稍膨大，有的下面2個細(xì)胞較短，頂端細(xì)胞漸尖，壁稍厚或較厚，表面有角質(zhì)縱線紋。腺毛短小，頭部1～5 個細(xì)胞；柄部1～2 細(xì)胞。葉下表皮細(xì)胞表面觀類多角形，垂周壁微波狀彎曲，有的呈連珠狀增厚，平周壁表面有角質(zhì)條狀紋理；氣孔類圓形，不定式?；ǚ哿ｎ悎A形，直徑20～30 μm，表面有刺，具3孔溝。冠毛多列性，刺毛狀，細(xì)胞壁稍厚，表面光滑。導(dǎo)管有網(wǎng)紋、具緣紋孔導(dǎo)管，直徑10 ～ 50 μm。韌皮纖維成束，長條形或長梭形，末端尖，壁較厚，木化。見圖11。

圖11 燈盞細(xì)辛（全草）粉末特征圖（10×40）Figure 11 The power features of Erigeron breviscapus（10×40）

密毛紫菀全草粉末灰綠色。鞭狀非腺毛4 ～8 個細(xì)胞，壁薄，頂端細(xì)胞驟細(xì)而延長成鞭狀，有的細(xì)胞內(nèi)含黃棕色分泌物。非腺毛有2種：一種由3～9 個細(xì)胞組成，基部稍大，頂端細(xì)胞漸尖，表面有短線狀突起；另一種為2 列性，由2 個多細(xì)胞非腺毛并列而成，頂端尖，壁稍厚或較厚，表面光滑。石細(xì)胞類三角形或長卵形，壁稍厚，紋孔明顯。菊糖團(tuán)塊狀，表面有放射狀紋理。葉上表皮細(xì)胞表面觀類多角形，垂周壁平直，表面有角質(zhì)條狀紋理；無氣孔。葉下表皮細(xì)胞表面觀不規(guī)則形，垂周壁波狀彎曲；氣孔長類圓形或長圓形，不定式?；ǚ哿ｎ悎A形，直徑20～30 μm，表面有刺，具3孔溝。冠毛多列性，刺毛狀，細(xì)胞壁稍厚，表面光滑。韌皮纖維成束，長條形或長梭形，末端尖，壁較厚。導(dǎo)管多為螺紋導(dǎo)管，直徑10～20 μm。見圖12。

圖12 密毛紫菀（全草）粉末特征圖（10×40）Figure 12 The power features of Aster vestitus

3.3.3 燈盞細(xì)辛與密毛紫苑顯微特征比較 見表1。

表1 燈盞細(xì)辛與密毛紫菀顯微特征比較Table 1 Comparison of the microscopical characteristics of Erigeron breviscapus and Aster vestitus

3.4 理化預(yù)試驗由預(yù)實驗結(jié)果得出：燈盞細(xì)辛和密毛紫菀都含有皂苷、糖類、多糖、苷類、還原糖、黃酮類、三萜、揮發(fā)油、油脂、酚性成分、生物堿，兩者在化學(xué)成分上比較相似。

3.5 含量測定燈盞花中主要有效成分為野黃芩苷，故本研究選取野黃芩苷為對照品，按2020年版《中國藥典》“燈盞細(xì)辛”【含量測定】項下測定方法，對燈盞細(xì)辛及密毛紫菀中野黃芩苷的含量進(jìn)行測定比較。

3.6 結(jié)果對燈盞細(xì)辛及密毛紫菀樣品進(jìn)行了測定，結(jié)果見圖13 ～ 15 和表2。結(jié)果顯示，本次實驗燈盞細(xì)辛藥材中所含野黃芩苷含量為0.37%，密毛紫菀藥材中所含野黃芩苷含量為0.21%。2020年版《中國藥典》燈盞細(xì)辛含量測定項下規(guī)定，野黃芩苷含量不得低于0.30%。

圖13 野黃芩苷對照品色譜圖Figure 13 Chromatogram of reference substance of Scutellarin

圖14 燈盞細(xì)辛樣品色譜圖Figure 14 Chromatogram of samples of Erigeron breviscapus

圖15 密毛紫菀樣品色譜圖Figure 15 Chromatogram of samples of Aster vestitus

表2 燈盞細(xì)辛與密毛紫菀樣品含量測定結(jié)果Table 2 Content determination results of Erigeron breviscapus and Aster vestitus

4 討論

燈盞細(xì)辛與密毛紫菀為同科不同屬的兩種植物，其在新鮮的植物形態(tài)上較為相似；經(jīng)干燥后的藥材，由于葉子及花的脫落，二者很難區(qū)別。本研究通過顯微鑒別得出，二者不同藥用部位的組織構(gòu)造差異較大，可從組織構(gòu)造上將二者分開。顯微鑒別方法簡便、易操作，該研究為燈盞細(xì)辛原料藥的收購等鑒別提供了很好的理論依據(jù)。

本研究通過理化預(yù)試驗研究結(jié)果表明，二者具有相似的化學(xué)成分，但經(jīng)含量測定比較，密毛紫菀中所含的野黃芩苷低于《中國藥典》“燈盞細(xì)辛”含量測定項下規(guī)定，故密毛紫菀不能與燈盞花混用，更不能代用。