彭慧淵， 胡瑩， 楊楠， 王本國， 王秉道， 汪峰， 林鐸

（廣東省中山市中醫(yī)院，廣東中山 528400）

腦血管疾病是嚴(yán)重威脅人類健康的疾病之一。目前，由于我國老齡化程度加劇，腦卒中的發(fā)病率呈逐年增高的趨勢，其中，以缺血性腦卒中發(fā)病率最高，約占腦血管疾病的80%。缺血性腦卒中有較高的致死率和致殘率，其存活后致殘率高達(dá)75%[1-2]。因此，腦缺血發(fā)生后及時給予患者神經(jīng)保護(hù)治療對患者預(yù)后及康復(fù)具有重要的臨床意義?；鐾ńj(luò)湯為中山市中醫(yī)院楊楠教授自擬經(jīng)驗方，由當(dāng)歸、毛冬青等7味中藥組成，臨床用于缺血性腦卒中的輔助治療[3]，對卒中后患者有神經(jīng)保護(hù)作用，且療效穩(wěn)定，預(yù)后佳[4-7]。但化瘀通絡(luò)湯治療缺血性腦卒中的作用機(jī)制尚不明確，因此，本研究以大腦中動脈栓塞大鼠模型為實驗對象，探討化瘀通絡(luò)湯對腦缺血再灌注損傷的神經(jīng)保護(hù)作用，以期為化瘀通絡(luò)湯臨床治療缺血性腦卒中進(jìn)一步提供依據(jù)，現(xiàn)將研究結(jié)果報道如下。

1 材料與方法

1.1 動物及飼養(yǎng)SPF 級雄性SD 大鼠100 只，6 ～ 7周齡，體質(zhì)量200～250 g，購于廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心，動物質(zhì)量合格證號：44007200046507。飼養(yǎng)于中山市中醫(yī)院屏障級實驗室，實驗動物使用許可證號：SYXK（粵）2015-0109。室內(nèi)保持通風(fēng)，恒溫（22 ± 2）℃，濕度40%～70%，12 h 晝夜交替間隔，所有實驗大鼠均適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d，期間自由攝食與飲水。

1.2 藥物與試劑化瘀通絡(luò)湯（由中山市中醫(yī)院制劑室制備，批號：20171201）；步長腦心通膠囊（咸陽步長制藥有限公司生產(chǎn)，批號：170917）。白細(xì)胞介素6（IL-6）酶聯(lián)免疫吸附分析試劑盒（武漢華美公司，批號：R09013408）；2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC）粉末（MP Biomedicals LLC，批號：Q1130）；水合氯醛（上海展云化工有限公司，批號：141115）；原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記（TUNEL）試劑盒（美國Roche 公司，批號：17839000）；3，3’-二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色試劑盒（武漢博士德生物技術(shù)有限公司，批號：11K11B22）；SA1022 兔免疫球蛋白G（IgG）試劑盒（武漢博士德生物技術(shù)有限公司，批號：12E27C）；抗堿性成纖維細(xì)胞生長因子（bFGF）抗體（美國Abcam公司，批號：GR279560）。

1.3 儀器HGPN 隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司）；2-16R高速冷凍離心機(jī)（湖南恒諾儀器設(shè)備有限公司）；Multiskan Mk3酶標(biāo)儀（美國Thermo Scientific 公司）；Unique 系列超純水機(jī)（廣州譽(yù)維生物科技儀器有限公司）；Eclipse Ci顯微鏡、DS-FI2成像系統(tǒng)（日本Nikon公司）；TS-8型轉(zhuǎn)移脫色搖床（江蘇海門市其林貝爾儀器制造有限公司）；CU420型電熱恒溫水箱（上海一恒科技有限公司）；微量有機(jī)分析專用超純水機(jī)（頤洋企業(yè)發(fā)展有限公司）。

1.4 分組及給藥將100 只大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組，模型組，腦心通組，化瘀通絡(luò)湯低、中、高劑量組，除假手術(shù)組10 只大鼠以外，其余每組各18 只大鼠。根據(jù)《中藥藥理實驗方法學(xué)》[8]中大鼠與人給藥劑量換算公式，大鼠給藥劑量= 人×6.3/70 kg（人的體質(zhì)量），得到大鼠等同于人的臨床給藥劑量，按方藥學(xué)實驗設(shè)計以臨床給藥劑量的2、4、8倍確定灌胃大鼠的化瘀通絡(luò)湯的低、中、高劑量。按10 mL/kg 給藥體積，假手術(shù)組和模型組大鼠每日灌胃蒸餾水，腦心通組大鼠每日灌胃步長腦心通溶液0.864 g/kg，化瘀通絡(luò)湯低（7.65 g/kg）、中（15.3 g/kg）、高（30.6 g/kg）劑量組大鼠每日分別給予對應(yīng)劑量灌胃，連續(xù)灌胃給藥7 d。

1.5 復(fù)制大腦中動脈栓塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO）模型連續(xù)灌胃給藥7 d 后，所有大鼠于術(shù)前12 h 禁食，末次灌胃給藥后1 h，采用Zea Longa 改良栓線法[8]制備MCAO 模型。方法：造模大鼠用體積分?jǐn)?shù)10%水合氯醛（3.5 mL/kg 體質(zhì)量）腹腔注射麻醉，待麻藥起效后將大鼠仰臥固定，于頸部正中作矢狀切口，仔細(xì)分離暴露出右側(cè)頸內(nèi)動脈、頸外動脈及頸總動脈。在頸外動脈及頸總動脈近心端處作永久結(jié)扎，用動脈夾夾閉頸內(nèi)動脈。自頸總動脈遠(yuǎn)心端距頸內(nèi)動脈、頸外動脈分叉處1 cm 左右用剪刀剪一小口，插入事先準(zhǔn)備好的魚線（用蠟包埋尖端，直徑為0.26 mm，于18 ～ 22 mm 處做好標(biāo)記）經(jīng)頸總動脈插入頸內(nèi)動脈，進(jìn)入顱內(nèi)。魚線插入至有阻力時停止，即從分叉處算起大約插入18～20 mm，將魚線連同頸總動脈一起結(jié)扎，縫合皮膚。用生理鹽水濕潤的紗布覆蓋上傷口，使大鼠俯臥。手術(shù)大鼠缺血2 h后，將魚線由血管內(nèi)抽出，再讓血流灌注24 h。在此期間注意給大鼠保暖以及補(bǔ)充水分。以大鼠手術(shù)麻醉清醒后出現(xiàn)左側(cè)肢體癱瘓，站立不穩(wěn)，無法直線行走，提尾時向一側(cè)轉(zhuǎn)圈，左前肢屈曲，不能伸直為判斷造模成功的標(biāo)準(zhǔn)[9]。假手術(shù)組僅剪開頸部皮膚，不插入線栓，其余步驟同造模步驟。

1.6 觀察指標(biāo)與方法

1.6.1 神經(jīng)功能評分 各組大鼠于腦缺血再灌注24 h 后進(jìn)行神經(jīng)功能評分，參考Zea Longa[9]的5 級4 分法標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評定。0 分：無神經(jīng)功能缺損，活動正常；1 分：輕微神經(jīng)功能缺損，不能完全伸展左側(cè)前爪；2 分：中度局灶性神經(jīng)功能缺損，爬行時出現(xiàn)左側(cè)轉(zhuǎn)圈（追尾征）；3 分：重度局灶性神經(jīng)功能缺損，行走時身體向左側(cè)倒；4 分：不能行走，意識喪失。評分越高，神經(jīng)功能缺陷越重，1～4 分為模型成功。剔除造模失敗及死亡例數(shù)，最終每組選取8只成功大鼠模型進(jìn)行統(tǒng)計分析。

1.6.2 TTC 染色法測定腦梗死面積 每組選取8 只大鼠以100 g/L 水合氯醛腹腔注射麻醉后，斷頭處死。取出腦組織，放置于-20 ℃冰箱30 min，待大腦至半硬狀態(tài)從額極到枕極冠狀切片，共5 片，厚度約為2 μm。將腦切片置于磷酸鹽緩沖液（PBS）配制的2%（w/v）TTC 溶液中染色，先于37 ℃溫箱避光孵育15 min，后將腦切片翻過另一面再孵育15 min，總時長30 min，以確保腦切片染色均勻。最后將取出大腦切片用濾紙吸干多余液體，觀察并拍照。正常腦組織染色后呈現(xiàn)深紅色，缺血大腦組織為白色。用Image-Pro Plus 圖像分析軟件分析計算腦梗死灶體積百分比，腦梗死體積百分比（%）=（S1+S2+S3+……）（/S’1 + S’2 + S’3+……）×100%，S1、S2、S3……表示每片梗死腦組織面積，S’1 、S’2、S’3……表示每片腦組織總面積。

1.6.3 蘇木素-伊紅（HE）染色法觀察大腦組織形態(tài)學(xué)變化 以100 g/L 水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠，待大鼠深度麻醉后迅速打開胸腔，暴露心臟。將針尖插入右心室，剪開左心耳，先使用PBS 經(jīng)右心室一次性灌注250 mL，待大鼠眼球及四肢變白改灌注100 g/L 多聚甲醛溶液直至大鼠身體發(fā)僵后迅速斷頭、開顱取出腦組織，放入100 g/L 多聚甲醛溶液中于4 ℃保存。24 h 后將腦組織依次進(jìn)行脫水，石蠟包埋，連續(xù)切片，再脫蠟，HE 染色，最后于顯微鏡下隨機(jī)選取5個視野觀察腦組織病理形態(tài)學(xué)變化。

1.6.4 甲苯胺藍(lán)染色法觀察腦神經(jīng)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化 將大鼠腦組織置于-20 ℃冰箱，30 min 后取出，切片。用去離子水沖洗2 次，甲苯胺藍(lán)染色，室溫顯色20 min，再使用去離子水將腦切片洗滌2次，滴加體積分?jǐn)?shù)95%乙醇分化5 s，然后依次用體積分?jǐn)?shù)70%、95%乙醇梯度脫水2 次，每次2 min。最后用二甲苯透明處理，樹脂封片。每張切片隨機(jī)選取5個不同視野，于光鏡下觀察。

1.6.5 TUNEL 法觀察腦神經(jīng)細(xì)胞凋亡情況 將大腦冰凍切片置于二甲苯溶液中浸泡10 min，更換二甲苯溶液后再浸泡10 min。依次于無水乙醇、95%、90%、80%、70% 乙醇及蒸餾水中浸泡5 min。將0.01 mol/L 枸櫞酸鈉緩沖溶液（pH = 6.0）在微波爐內(nèi)用中高火加熱5 min 至沸騰后放入切片，冷卻至室溫。用PBS 沖洗3 次，每次5 min。再用去離子水配制體積分?jǐn)?shù)3%H2O2，于室溫處理10 min。再用PBS 洗3 次，每次5 min。然后按照TUNEL 試劑盒說明書操作，DAB 顯色，去離子水沖洗，蘇木素復(fù)染1 min，脫水，二甲苯透明，樹脂封片，于光鏡下觀察。細(xì)胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒為凋亡細(xì)胞。每張切片隨機(jī)選取5 個不同視野，于鏡下計數(shù)凋亡細(xì)胞，細(xì)胞凋亡程度（apoptotic cell index，ACI）=凋亡細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)。

1.6.6 免疫組織化學(xué)法檢測腦組織堿性成纖維細(xì)胞生長因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）蛋白表達(dá) 將大腦組織切片常規(guī)脫蠟水化后滴加一抗（1∶800 稀釋）4 ℃孵育過夜，PBS 洗 3 次，每次5 min。然后加入二抗于37 ℃孵育30 min，PBS 沖洗3 次，每次5 min。再滴加試劑SABC 于37 ℃孵育30 min，PBS沖洗4次，每次5 min。DAB顯色，蒸餾水沖洗，蘇木素輕度復(fù)染，飽和磷酸氫二鈉分化，脫水，二甲苯透明，樹脂封片，于光鏡下觀察。每張切片隨機(jī)選取6 個不同視野，bFGF 陽性表達(dá)呈棕黃色，采用Imaga-ProPlus 6.0軟件進(jìn)行分析，結(jié)果以單個視野的平均光密度（IOD）表示。

1.6.7 ELISA 法檢測血清中IL-6 含量 將各組大鼠麻醉后迅速打開腹腔，經(jīng)腹主動脈采血，將采血管靜置于4 ℃冰箱2 h 后，以3 500 r/min（離心半徑為8.7 cm）離心10 min，取上清液待測，具體檢測步驟嚴(yán)格按照IL-6試劑盒說明書操作。

1.7 統(tǒng)計方法采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示。多組數(shù)據(jù)比較，方差齊采用單因素方差分析，方差不齊則采用DunnettT3 檢驗。以P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠神經(jīng)功能評分比較結(jié)果見表1。與假手術(shù)組比較，模型組大鼠表現(xiàn)出轉(zhuǎn)圈追尾，不能直線行走，單側(cè)傾倒等神經(jīng)行為障礙，神經(jīng)功能缺損評分增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。與模型組比較，腦心通組大鼠神經(jīng)功能缺損評分降低（P<0.05）；與模型組比較，化瘀通絡(luò)湯各劑量組神經(jīng)功能缺損評分明顯降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），且隨藥物濃度增高，神經(jīng)功能缺損評分下降越明顯，存在一定的量效關(guān)系。

表1 各組大鼠大鼠神經(jīng)功能缺損評分比較Table 1 Comparison of the neurological severity scores for rats in various groups（，分）

表1 各組大鼠大鼠神經(jīng)功能缺損評分比較Table 1 Comparison of the neurological severity scores for rats in various groups（，分）

①P < 0.05，與假手術(shù)組比較；②P < 0.05，與模型組比較

評分—3.24±0.97①1.65±0.70②2.33±0.97②1.35±0.61②0.83±0.92②組別假手術(shù)組模型組腦心通組化瘀通絡(luò)湯低劑量組化瘀通絡(luò)湯中劑量組化瘀通絡(luò)湯高劑量組鼠數(shù)（只）888888

2.2 各組大鼠腦梗死范圍比較結(jié)果見表2、圖1。與假手術(shù)組比較，模型組大鼠腦組織出現(xiàn)大范圍白色梗死區(qū)，腦梗死體積增大，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；與模型組比較，腦心通組及化瘀通絡(luò)湯低、中、高劑量組腦梗死范圍明顯縮小，腦梗死體積減小，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P< 0.05）?；鐾ńj(luò)湯低、中、高劑量組隨著藥物濃度的增加腦梗死面積減小，存在一定的量效關(guān)系。

圖1 各組大鼠腦梗死體積大體比較（TTC染色）Figure 1 Comparison of the megascopic volume of cerebral infarction of rats in various groups（by TTC staining）

表2 各組大鼠腦梗死體積比較Table 2 Comparison of the cerebral infarction volume of rats in various groups （）

表2 各組大鼠腦梗死體積比較Table 2 Comparison of the cerebral infarction volume of rats in various groups （）

①P < 0.05，與假手術(shù)組比較；②P < 0.05，與模型組比較

梗死百分比（%）—40.23±4.89①6.16±8.16②25.86±20.01 18.22±15.01②8.32±7.35②組別假手術(shù)組模型組腦心通組化瘀通絡(luò)湯低劑量組化瘀通絡(luò)湯中劑量組化瘀通絡(luò)湯高劑量組鼠數(shù)（只）888888

2.3 各組大鼠腦組織形態(tài)學(xué)表現(xiàn)比較結(jié)果見圖2。假手術(shù)組腦組織呈現(xiàn)正常形態(tài)；模型組腦組織皮層軟化，重度疏松，呈網(wǎng)格狀，可見大量小空洞，神經(jīng)元大量減少，殘存的少量神經(jīng)元緊縮深染，且細(xì)胞周圍間隙較大；腦心通組神經(jīng)元豐富，大多數(shù)神經(jīng)元形態(tài)正常，僅有少量神經(jīng)元輕度緊縮深染；化瘀通絡(luò)湯低、中劑量組大腦神經(jīng)元數(shù)量雖增多，但大部分神經(jīng)元仍呈現(xiàn)緊縮深染的狀態(tài)，且細(xì)胞周圍間隙較大；化瘀通絡(luò)湯高劑量組大腦皮層病變明顯減輕，結(jié)構(gòu)更加緊密，神經(jīng)元分布均勻，數(shù)量正常，但存在少量神經(jīng)元緊縮深染及細(xì)胞間隙。

圖2 各組大鼠腦組織形態(tài)學(xué)表現(xiàn)比較（HE染色，×400）Figure 2 Comparison of the morphological characteristics of rat brain tissue in various groups（by HE staining，×400）

2.4 各組大鼠腦神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)比較結(jié)果見圖3。與假手術(shù)組比較，模型組皮層結(jié)構(gòu)疏松，神經(jīng)元大量減少，緊縮深染。與模型組比較，腦心通組神經(jīng)元數(shù)量豐富，僅少量神經(jīng)元緊縮深染，化瘀通絡(luò)湯低劑量組神經(jīng)元數(shù)量增多，皮層結(jié)構(gòu)仍疏松，中劑量組皮層結(jié)構(gòu)較緊密，較多神經(jīng)元緊縮深染，高劑量組神經(jīng)元數(shù)量豐富，皮層結(jié)構(gòu)更緊密，僅少量神經(jīng)元緊縮深染。

圖3 各組大鼠腦神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)比較（甲苯胺藍(lán)染色，×400）Figure 3 Comparison of the morphological characteristics of rat cerebral neurons in various groups（by toluidine blue staining，×400）

2.5 各組大鼠腦神經(jīng)細(xì)胞凋亡情況比較結(jié)果見表3、圖4。與假手術(shù)組比較，模型組腦組織呈現(xiàn)大量TUNEL 陽性細(xì)胞表達(dá)，呈棕黃色染色，同時細(xì)胞變形，細(xì)胞質(zhì)濃縮，細(xì)胞體積變小，神經(jīng)細(xì)胞凋亡率上升，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。與模型組比較，腦心通組神經(jīng)細(xì)胞凋亡率降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；與模型組比較，化瘀通絡(luò)湯各劑量組神經(jīng)細(xì)胞凋亡率亦降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），中劑量組效果最好。

圖4 各組大鼠腦梗死皮質(zhì)凋亡神經(jīng)細(xì)胞分布情況比較（TUNEL染色，×400）Figure 4 Comparison of the distribution of apoptotic neurons in rat cerebral infarction cortex in various groups（by TUNEL staining，×400）

表3 各組大鼠神經(jīng)細(xì)胞凋亡率比較Table 3 Comparison of the rate of neuroapoptosis for rats in various groups （）

表3 各組大鼠神經(jīng)細(xì)胞凋亡率比較Table 3 Comparison of the rate of neuroapoptosis for rats in various groups （）

①P < 0.05，與假手術(shù)組比較；②P < 0.05，與模型組比較

神經(jīng)細(xì)胞凋亡率（%）24.00±7.78 62.31±13.43①36.69±10.66②38.38±18.77②32.95±16.16②37.97±22.66②組別假手術(shù)組模型組腦心通組化瘀通絡(luò)湯低劑量組化瘀通絡(luò)湯中劑量組化瘀通絡(luò)湯高劑量組鼠數(shù)（只）888888

2.6 各組大鼠腦組織bFGF 蛋白表達(dá)比較結(jié)果見表4、圖5。與假手術(shù)組比較，模型組大腦梗死灶周圍bFGF 表達(dá)水平升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。與模型組比較，腦心通組及化瘀通絡(luò)湯低、中、高劑量組bFGF 表達(dá)水平顯著下降，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

表4 各組大鼠腦組織bFGF蛋白表達(dá)水平比較Table 4 Comparison of the expression level of bFGF in rat brain tissue in various groups（）

表4 各組大鼠腦組織bFGF蛋白表達(dá)水平比較Table 4 Comparison of the expression level of bFGF in rat brain tissue in various groups（）

①P < 0.05，與假手術(shù)組比較；②P < 0.05，與模型組比較

bFGF（IOD）65.33±22.36 123.55±30.64①186.48±47.10②160.24±50.47②160.75±24.11②208.27±54.34②組別假手術(shù)組模型組腦心通組化瘀通絡(luò)湯低劑量組化瘀通絡(luò)湯中劑量組化瘀通絡(luò)湯高劑量組鼠數(shù)（只）888888

圖5 各組大鼠腦梗死皮質(zhì)bFGF陽性細(xì)胞分布情況比較（免疫組織化學(xué)法，×400）Figure 5 Comparison of the distribution of bFGF-positive neurons in rat cerebral infarction cortex in various groups（by immunohistochemistry，×400）

2.7 各組大鼠血清IL-6 含量比較結(jié)果見表5。與假手術(shù)組比較，模型組血清中IL-6 含量升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。與模型組比較，腦心通組及化瘀通絡(luò)湯低、中、高劑量組血清中IL-6含量顯著下降，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P< 0.05），且化瘀通絡(luò)湯各劑量組呈劑量依賴性。

表5 各組大鼠血清中IL-6含量比較Table 5 Comparison of the serum content of IL-6 for rats in various groups（）

①P < 0.05，與假手術(shù)組比較；②P < 0.05，與模型組比較

IL-6含量（pg·mL-1）24.65±4.77 51.10±8.42①32.44± 7.84①②31.63±10.48②26.75± 11.25①②24.23±5.75②組別假手術(shù)組模型組腦心通組化瘀通絡(luò)湯低劑量組化瘀通絡(luò)湯中劑量組化瘀通絡(luò)湯高劑量組鼠數(shù)（只）888888

3 討論

缺血性腦卒中臨床發(fā)病率高且有逐年增加的趨勢，臨床預(yù)后差，致殘率高。大腦缺血會導(dǎo)致腦組織及神經(jīng)細(xì)胞受損，雖然早期溶栓治療對缺血性腦卒中具有一定的效果，但腦組織在恢復(fù)血流供應(yīng)后反而會使原缺血腦組織損傷加重[10-11]。大腦組織水腫使顱內(nèi)壓升高，同時引起大腦繼發(fā)性神經(jīng)元凋亡及壞死，造成腦功能障礙，因此，血液再灌注引起的損傷程度遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于腦缺血損傷本身。腦缺血再灌注損傷的機(jī)制十分復(fù)雜，有研究認(rèn)為，腦組織繼發(fā)性神經(jīng)細(xì)胞凋亡是導(dǎo)致再灌注腦損傷的主要病理機(jī)制之一[12-15]。

bFGF，是一種神經(jīng)營養(yǎng)因子[16]，廣泛分布于中樞神經(jīng)，對缺血性腦損傷有神經(jīng)保護(hù)作用，可促進(jìn)神經(jīng)元修復(fù)和再生[17]，同時，可促進(jìn)受損腦組織的血管新生，其在受損腦組織中的表達(dá)強(qiáng)度與毛細(xì)血管數(shù)目呈正相關(guān)。一般情況下，機(jī)體bFGF 不能通過血腦屏障，但由于腦缺血造成局部腦組織損傷導(dǎo)致血腦屏障通透性增加，bFGF 可通過損傷部位進(jìn)入外周血，從而造成缺血損傷腦組織中bFGF 表達(dá)下降。同時，當(dāng)腦缺血發(fā)生時體內(nèi)大量炎癥因子如IL-6 等亦會被激活[18-19]，參與機(jī)體免疫應(yīng)答和腦梗死后炎癥反應(yīng)，因此促炎癥因子IL-6 被認(rèn)為是腦梗塞急性期的重要標(biāo)志物[20]，可用于評估腦梗死的嚴(yán)重程度及預(yù)后。有研究表明，血清IL-6 水平與腦缺血損傷的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)[21]，血清中IL-6 含量升高可進(jìn)一步加重腦受損部位神經(jīng)細(xì)胞凋亡。

化瘀通絡(luò)湯全方以葉天士“佐以辛香是絡(luò)病大旨”之說為理論基礎(chǔ)。以嶺南特色草藥毛冬青為君，活血化瘀通絡(luò)，兼清熱解毒。當(dāng)歸相伍養(yǎng)血活血，使瘀血去而正不傷，另配赤芍、川芎活血化瘀兼走氣分，三藥合用共助毛冬青活血化瘀通絡(luò)，為臣藥。佐用地龍、水蛭、全蝎，以通絡(luò)。全方通補(bǔ)并用，共奏化瘀通絡(luò)之效。前期臨床研究[4]表明，化瘀通絡(luò)湯可有效改善急性腦梗死患者神經(jīng)功能缺損癥狀，使梗塞中心及其周圍區(qū)域組織灌注改善，且對梗死周圍組織的作用強(qiáng)于梗死中心。本研究結(jié)果顯示，化瘀通絡(luò)湯可降低MCAO大鼠神經(jīng)功能缺損評分，縮小大腦梗死灶，減少腦梗死體積，保護(hù)腦組織病理結(jié)構(gòu)及神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)，改善梗死腦組織病理損害，改善梗死腦組織的異常神經(jīng)元結(jié)構(gòu)，有效降低MACO 大鼠腦神經(jīng)元細(xì)胞凋亡數(shù)，使梗死區(qū)域bFGF 蛋白表達(dá)上升，降低血清中IL-6 含量，起到抑制缺血再灌注后繼發(fā)性炎癥反應(yīng)，改善腦缺血再灌注損傷大鼠神經(jīng)功能的作用。

綜上所述，化瘀通絡(luò)湯對缺血腦組織的神經(jīng)保護(hù)作用可能是通過上調(diào)腦梗死區(qū)域bFGF 蛋白表達(dá)，抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡，抑制缺血后繼發(fā)性炎癥反應(yīng)等來實現(xiàn)的，但具體是通過哪條通路機(jī)制發(fā)揮保護(hù)作用還有待進(jìn)一步的研究。