沈雪 趙福陽 吳越 崔新宇

摘 要：采用高效液相色譜法測定牛奶中滅草煙的含量。將牛奶樣品用二氯甲烷進(jìn)行渦旋混合、振蕩、離心提取后，經(jīng)C18固相萃取柱凈化，柱溫35 ℃，進(jìn)樣量5 μL，流動相為甲醇︰水=90︰10，水用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.5，流速1 mL/min，紫外檢測波長240 nm，以外標(biāo)法定量。結(jié)果表明，滅草煙除草劑在質(zhì)量濃度2～10 mg/mL范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性相關(guān)系數(shù)0.999 7，牛奶中滅草煙的平均加標(biāo)回收率84.52%～92.52%。此方法操作簡便，重現(xiàn)性較好，可以為牛奶中滅草煙及其他5種咪唑啉酮類除草劑含量的測定提供參考。

關(guān)鍵詞：滅草煙;咪唑啉酮;高效液相色譜法;牛奶

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

高效液相色譜儀（美國賽默飛U3000）;十二孔固相萃取裝置;Seq-Pak C18固相萃取柱;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。0.45 μm超微孔濾膜;標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)滅草煙（咪唑煙酸，純度≥99%）。甲醇為色譜純，二氯甲烷、丙酮、乙腈為分析純。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 樣品的處理

準(zhǔn)確稱取牛奶樣品1 g于離心管之中，取2個(gè)離心管分別標(biāo)號為Y1（樣品1）、Y2（對照1）作為兩個(gè)樣品樣管，用二氯甲烷定容至10 mL，渦旋混合，離心機(jī)離心，轉(zhuǎn)速為4 000 r/min。取下層有機(jī)層5 mL于容量瓶之中，用二氯甲烷定容至10 mL以待凈化。

1.2.2 樣品凈化

將樣品提取液沿SPE C18柱（活化后使用）的管壁緩緩傾入。在流速約為2 mL/min的條件下將5 mL丙酮、5 mL乙腈、5 mL甲醇，依次加入SPE柱進(jìn)行淋洗。用5 mL體積比為5︰95的5%氨水-甲醇混合溶液進(jìn)行洗脫。

1.2.3 樣品的濃縮

在45 ℃下將待濃縮溶液蒸發(fā)至近干，使用流動相溶解并定容。溶液用0.45 μm的有機(jī)相濾膜過濾之后加入進(jìn)樣瓶中進(jìn)行高效液相色譜分析。

1.2.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確稱取適量滅草煙標(biāo)準(zhǔn)品（精確至 0.000 1 g）于50 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，配制成10 mg/mL標(biāo)樣儲備液，儲存于冰箱內(nèi)。滅草煙標(biāo)準(zhǔn)儲備液用甲醇稀釋成2 mg/mL、4 mg/mL、6 mg/mL、8 mg/mL和10 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2.5 HPLC條件

色譜柱：C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）;柱溫：35 ℃;進(jìn)樣量：5 μL;檢測波長：240 nm;流動相：甲醇︰水=90︰10，需要用磷酸調(diào)節(jié)pH值為3.5，經(jīng)過濾膜過濾并脫氣;流速，1.0 mL/min[1-5]。

1.2.6 樣品的測定

滅草煙根據(jù)色譜保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。以滅草煙質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算試樣溶液濃度，按式（1）計(jì)算土壤樣品中乙草胺和烯草酮的殘留量[6-8]。

式中，X-牛奶中滅草煙的質(zhì)量，mg;ρ-試樣溶液中滅草煙的質(zhì)量濃度，mg/mL;V-所配的溶液體積，mL。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

不同濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)樣品，所測得的色譜圖見圖1，測得樣品色譜圖見圖2，標(biāo)準(zhǔn)曲線圖見圖3，線性方程為y=546 883x+17 754，r=0.999 7，線性范圍2～10 mg/mL。

2.2 回收率實(shí)驗(yàn)和精密度計(jì)算

取不含待測物品的樣品，按照1.2方法分3組，每組5支加標(biāo)回收樣品管，進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)和精密度計(jì)算，結(jié)果見表1。在6～10 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的添加條件下，實(shí)驗(yàn)的加標(biāo)回收率在84%以上，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為5.7%～7.5%，實(shí)驗(yàn)證明本方法準(zhǔn)確度和精密度較為良好。

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)對牛奶中滅草煙的測定過程中，采用二氯甲烷作為提取劑，C18固相萃取小柱進(jìn)行萃取、凈化。利用高效液相色譜法檢測樣品牛奶中咪唑啉酮類除草劑滅草煙的殘留，本次實(shí)驗(yàn)所得線性方程為y=546 883x+17 754，r=0.999 7，線性范圍2～10 mg/mL。加標(biāo)回收率84%以上，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為5.7%～7.5%。本方法準(zhǔn)確度和精密度較為良好，可廣泛推廣應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

[1]楊秋紅，程小艷，楊坪，等.固相萃取高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)檢測地表水中的2，4-二氯酚、2，4，6-三氯酚和五氯酚[J].分析化學(xué)，2011，39（8）：1208-1212.

[2]PYRZYNSKA K，TROJANOWICZ M.Functionalized cellulose sorbents for preconcentration of trace metals in environmental analysis[J].Critical Reviews Analytical Chemistry，1999，29（4）：313-321.

[3]劉建林，張琛，王夏嬌，等.基于碳納米管的固相萃取分散液液微萃取測定水中多種痕量環(huán)境雌激素[J].高等學(xué)?；瘜W(xué)學(xué)報(bào)，2012，33（1）：37-43.

[4]姜俊，李培武，謝立華，等.固相萃取-全二維氣相色譜/飛行時(shí)間質(zhì)譜同步快速檢測蔬菜中64種農(nóng)藥殘留[J].分析化學(xué)，2011，39（1）：72-76.

[5]葉貴標(biāo)，張微，崔昕，等.高效液相色譜/質(zhì)譜法測定土壤中10種磺酰脲類除草劑多殘留[J].分析化學(xué)，2006，34（9）：1207-1212.

[6]ANIZIO M F，LIANE M，CESAR C S，et al.Poly （methyltetradecylsiloxane） immobilized onto silica for extraction of multiclass pesticides from surface waters[J].Analytica Chimica Acta，2007，582（1）：34-40.

[7]BARKANI H，CATASTINIA C，EMMELIN C，et al.Study of the phototransformation of imazaquin in aqueous solution：a kinetic approach[J].Photochemistry and Photobiology A：Chemistry，2005，170（1）：27-35.

[8]陳夏嬌.咪唑煙酸的高效液相色譜法測定[J].廣西植保，2014，27（2）：15-17.