王彩娥，楊鹿奎，李桂芳，曹永建，高文芳

(河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部，河南科技大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院，河南 洛陽 471003)

沙利度胺為谷氨酸衍生物，具有鎮(zhèn)靜止痛、免疫調(diào)節(jié)、抗炎、抑制血管生成及抗腫瘤等多種藥理作用[1-4]，臨床上廣泛應(yīng)用于麻風(fēng)結(jié)節(jié)性紅斑和多發(fā)性骨髓瘤的治療。肝纖維化是由多種致病因子導(dǎo)致的肝細(xì)胞外基質(zhì)彌漫性過度沉積與異常分布，其發(fā)生、發(fā)展過程中有多種細(xì)胞及介質(zhì)參與，常可發(fā)展為肝硬化，進而衍變?yōu)楦伟?，最終導(dǎo)致患者死亡[5-6]，抗肝纖維化治療可終止或逆轉(zhuǎn)肝臟病變。研究顯示，免疫調(diào)節(jié)與肝纖維化發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[7]，而沙利度胺具有免疫調(diào)節(jié)及抗炎作用，故推測沙利度胺可能具有抗纖維化作用?；诖耍狙芯客ㄟ^探討沙利度胺對四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)誘導(dǎo)的肝纖維化模型小鼠的影響及可能機制，旨在為沙利度胺應(yīng)用于肝纖維化的臨床治療提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物C57BL/6雄性小鼠24只，體質(zhì)量(25±3)g，購自河南省實驗動物中心，許可證號：SCXK(豫)2017-0001，合格證書號：DW2020090026。飼養(yǎng)于河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院動物房，標(biāo)準(zhǔn)飼料，自由飲水，室溫18～25 ℃、相對濕度40%～70%、12 h光照晝夜循環(huán)適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后開始實驗。

1.2 試劑與儀器CCl4購自天津市富宇精細(xì)化工有限公司[合格證編號(津)XK 13-011-00034]，沙利度胺片購自常州制藥有限公司(生產(chǎn)批號18070331，研缽搗碎后加入生理鹽水，制成3.0 g·L-1的混懸液備用，每次灌胃前充分搖勻)，復(fù)方甘草酸苷片購自北京凱因科技股份有限公司(生產(chǎn)批號200303，研缽搗碎后加入生理鹽水，制成 3.5 g·L-1的混懸液備用，每次灌胃前充分搖勻)，蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin，HE)、Masson及免疫熒光雙染色試劑購自武漢賽維爾生物科技有限公司，二喹啉甲酸(bicinchoninic acid，BCA)蛋白濃度測定試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司，腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)酶聯(lián)免疫試劑盒購自賽默飛生物有限公司，M1巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志物CD68、M2巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志物CD163抗體、熒光標(biāo)記的免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)二抗以及小牛血清白蛋白(bovine serum albumin，BSA)均購自武漢賽維爾生物科技有限公司；GZX-DH-40×45 型倒置顯微鏡購自德國 Leica 公司，熒光顯微鏡購自日本 OLYMPUS 公司，全波長酶標(biāo)儀購自美國Thermo Fisher公司，全自動生物化學(xué)分析儀購自日本日立高新公司，臺式常溫離心機購自德國Eppendorf公司，-80 ℃超低溫冰箱購自日本Panasonic公司，AL104型電子分析天平購自瑞士梅特勒-托利公司，F(xiàn)A2004B電子天平購自上海精科天美科學(xué)儀器有限公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 動物模型制備將24只雄性C57BL/6小鼠按隨機數(shù)字表法分為正常組、模型組、復(fù)方甘草酸苷片組(陽性對照組)、沙利度胺組，每組6只。正常組小鼠分別于每周一和周四腹腔注射橄欖油10 μL·g-1，連續(xù)6周；模型組、陽性對照組、沙利度胺組小鼠分別于每周一和周四腹腔注射體積分?jǐn)?shù)0.6 % CCl4(10 μL·g-1)，連續(xù)6周。造模第5周開始，陽性對照組小鼠給予3.5 g·L-1復(fù)方甘草酸苷片混懸液灌胃(陽性對照組小鼠灌胃復(fù)方甘草酸苷片劑量為 35 mg·kg-1·d-1，根據(jù)人鼠體表面積等效劑量比值，按成人每日臨床劑量3.75 mg·kg-1換算)；沙利度胺組小鼠給予3.0 g·L-1沙利度胺混懸液灌胃(沙利度胺給藥劑量為30 mg·kg-1·d-1，劑量根據(jù)前期預(yù)實驗中沙利度胺對CCl4誘導(dǎo)急性小鼠肝損傷的作用結(jié)果確定)；正常組和模型組給予生理鹽水灌胃，灌胃體積均為10 μL·g-1。各組小鼠均于每日下午15：00～17：00灌胃1次，連續(xù)2周。

1.3.2 小鼠體質(zhì)量分析使用FA2004B電子天平稱量小鼠體質(zhì)量，小鼠體質(zhì)量以實驗開始第1天作為第0周，固定于每周一下午15：00～17：00稱量1次至實驗結(jié)束，稱量前禁食6 h，實驗結(jié)束后匯總分析各組小鼠的體質(zhì)量變化。

1.3.3 肝組織標(biāo)本收集第6周末次給藥2 h后，利用直徑0.5 mm毛細(xì)管眼眶取血約0.6 mL，全血室溫下靜置2 h，低溫2 000×g離心15 min，收集上層血清分裝于凍存管中存放于-80 ℃冰箱中備用。取血后的小鼠吸入過量七氟烷麻醉致死，冰上分離肝組織，生理鹽水沖洗干凈后，拭干，稱量，計算小鼠肝指數(shù)(肝指數(shù)=肝質(zhì)量/體質(zhì)量×100%)；然后分離肝組織，將一部分肝組織用體積分?jǐn)?shù)10%中性甲醛溶液固定，用于肝組織病理學(xué)檢查；另一部分裝于凍存管存放于-80 ℃冰箱中備用。

1.3.4 HE染色觀察小鼠肝細(xì)胞狀態(tài)肝組織經(jīng)體積分?jǐn)?shù)10%中性甲醛溶液固定24 h 后，常規(guī)脫水，石蠟包埋，切片；40 ℃溫水將切片組織展平，60 ℃烘箱內(nèi)烤片，烤干后至常溫；蘇木精染色5 min，自來水沖洗，分化液分化30 s后再用自來水浸泡15 min；伊紅染色5 s，自來水沖洗，蒸餾水浸泡2 min，體積分?jǐn)?shù)95%乙醇脫水至透明；中性樹膠封固，采用GZX-DH-40×45型倒置顯微鏡觀察肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)和排列狀態(tài)。

1.3.5 Masson染色觀察小鼠肝組織結(jié)構(gòu)肝組織經(jīng)體積分?jǐn)?shù)10%中性甲醛溶液固定24 h后，常規(guī)脫水，石蠟包埋，切片；40 ℃溫水將切片組織展平，載玻片將組織撈起后60 ℃烘箱內(nèi)烤片，烤干后至常溫；切片浸入Masson A液中浸泡過夜，自來水沖洗，浸入Masson B液及Masson C液等比混合的染液，浸染1 min，自來水沖洗，體積分?jǐn)?shù)1%鹽酸乙醇分化，自來水沖洗，浸入Masson D液浸染6 min，自來水漂洗后浸入Masson E液浸染1 min，稍瀝干直接入Masson F液染30 s，體積分?jǐn)?shù)1%冰醋酸漂洗分化，無水乙醇脫水至透明；中性樹膠封片，GZX-DH-40×45型倒置顯微鏡觀察肝組織匯管區(qū)和肝小葉中有無明顯膠原纖維增生和橋接形成，每組選取3個切片，每張切片隨機選擇3個不同視野，采用半定量標(biāo)準(zhǔn)對Masson染色膠原纖維增生程度進行評分，取3個不同視野平均評分作為該切片評分。Masson染色評分：正常為0分；匯管區(qū)、小葉中央靜脈周圍膠原增加為1分；匯管區(qū)、小葉中央靜脈周圍膠原進一步增加，膠原開始穿插、分隔肝小葉為2分；膠原纖維較細(xì)、包繞分隔肝小葉為3分；膠原纖維變寬、增多為4分。

1.3.6 全自動生物化學(xué)分析儀速率法檢測小鼠血清丙氨酸轉(zhuǎn)移酶(alanine amino-transferase,ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate transaminase，AST)水平取-80 ℃保存的各組小鼠血清，自然融化后，使用全自動生物化學(xué)分析儀，采用速率法檢測血清ALT、AST水平。

1.3.7 酶聯(lián)免疫吸附試驗法檢測小鼠肝組織中TNF-α水平檢測準(zhǔn)確稱取50 mg小鼠肝組織，按照質(zhì)量(mg)體積(μL)=19的比例加入9倍體積生理鹽水，冰水浴條件下制備成100 g·L-1的肝組織勻漿液，2 000×g離心10 min，取上清液，使用Thermal Fisher全波長酶標(biāo)儀，采用在450 nm波長下檢測肝組織中TNF-α水平，嚴(yán)格按TNF-α 酶聯(lián)免疫檢測試劑盒說明書操作。

1.3.8 免疫熒光法檢測小鼠肝組織中CD68和CD163表達(dá)采用石蠟切片免疫熒光雙標(biāo)檢測CD68和CD163的表達(dá)。將各組小鼠的肝組織經(jīng)體積分?jǐn)?shù) 10% 中性甲醛溶液固定24 h 后，常規(guī)脫水，石蠟包埋，切片；40 ℃溫水將切片組織展平，載玻片將組織撈起后60 ℃烘箱內(nèi)烤片，烤干后至常溫；乙二胺四乙酸緩沖液(pH 8.0)對切片進行抗原修復(fù)，然后用體積分?jǐn)?shù)3%雙氧水溶液避光孵育25 min，封閉內(nèi)源性過氧化物酶，磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered solation，PBS)脫色，洗滌，漂洗；切片稍甩干，滴加體積分?jǐn)?shù)3% BSA，封閉 30 min，甩掉封閉液，加入CD68一抗，4 ℃孵育過夜，滴加花青素3(cyanidin 3，CY3)標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗，室溫孵育50 min，Tris緩沖液(Tris buffered saline Tween，TBST)沖洗3次，每次 5 min，避光室溫孵育10 min，置于TBST中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5 min，微波處理，中火8 min，?；? min，轉(zhuǎn)低火7 min；再加CD163一抗，4 ℃孵育過夜，滴加異硫氰酸熒光素標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗覆蓋組織，避光室溫孵育50 min；6-二脒基-2-苯基吲哚(6-diamidino-2-phenylindole，DAPI)復(fù)染細(xì)胞核，室溫避光孵育10 min，自發(fā)熒光淬滅，PBS洗滌3次，每次 5 min。甩干加入自發(fā)熒光淬滅劑5 min，洗滌10 min，封片，在熒光顯微鏡下觀察拍照，紅光熒光為CD68陽性表達(dá)，綠光熒光為CD163陽性表達(dá)。

2 結(jié)果

2.1 4組小鼠體質(zhì)量比較結(jié)果見表1。第0、1、2、3、4、5、6周，各組小鼠之間體質(zhì)量比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

表1 4組小鼠體質(zhì)量比較

2.2 4組小鼠肝質(zhì)量及肝指數(shù)比較結(jié)果見表2。第6周末，模型組小鼠肝質(zhì)量及肝指數(shù)均顯著高于正常組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。陽性對照組和沙利度胺組小鼠肝質(zhì)量及肝指數(shù)均顯著低于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。沙利度胺組與陽性對照組小鼠肝質(zhì)量及肝指數(shù)比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

表2 4組小鼠肝質(zhì)量及肝指數(shù)比較

2.3 4組小鼠血清 AST、ALT水平及肝組織TNF-α水平比較結(jié)果見表3。模型組、陽性對照組及沙利度胺組小鼠血清ALT、AST水平顯著高于正常組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；陽性對照組及沙利度胺組小鼠血清ALT、AST水平顯著低于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；沙利度胺組與陽性對照組小鼠血清ALT、AST水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。模型組小鼠肝組織中TNF-α水平顯著高于正常組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；陽性對照組及沙利度胺組與正常組小鼠肝組織中TNF-α水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；陽性對照組及沙利度胺組小鼠肝組織中TNF-α水平顯著低于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；沙利度胺組與陽性對照組小鼠肝組織中TNF-α水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

表3 4組小鼠血清 ALT、AST水平及肝組織TNF-α水平比較

2.4 4組小鼠肝組織病理學(xué)變化HE染色顯示，正常組小鼠肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，排列規(guī)則，肝小葉結(jié)構(gòu)清晰(圖1A)；模型組小鼠肝組織匯管區(qū)與門靜脈周圍肝細(xì)胞大量空泡樣壞死，排列紊亂，肝小葉結(jié)構(gòu)不完整(圖1B)；陽性對照組和沙利度胺組小鼠肝組織匯管區(qū)與門靜脈周圍有少量空泡樣壞死，肝細(xì)胞排列基本規(guī)則(圖1C和圖1D)。 Masson染色顯示，正常組小鼠中肝組織無明顯膠原纖維增生(圖2A)；模型組肝匯管區(qū)門靜脈與中央靜脈周圍大量膠原纖維增生，且有少量橋接形成(圖2B)；陽性對照組和沙利度胺組小鼠肝組織局部的匯管區(qū)和中央靜脈周圍有少量膠原纖維增生(圖2C和圖2D)。正常組、模型組、陽性對照組和沙利度胺組小鼠肝組織Masson評分分別為(0.00±0.00)、(2.67±0.58)、(1.00±0.00)、(0.67±0.58)分；模型組小鼠肝組織Masson評分顯著高于正常組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；陽性對照組和沙利度胺組小鼠肝組織Masson評分顯著低于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；陽性對照組與沙利度胺組小鼠肝組織Masson評分比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

A： 正常組；B：模型組；C：陽性對照組；D：沙利度胺組。

A：正常組；B：模型組；C：陽性對照組；D：沙利度胺組。

2.5 4組小鼠肝組織中CD68和CD163的表達(dá)結(jié)果見圖3。正常組小鼠肝組織中存在少量CD68和CD163熒光陽性表達(dá)(圖3A2和圖3A3)；與正常組比較，模型組小鼠肝組織中CD68陽性表達(dá)相對增強(圖3B2)， CD163陽性表達(dá)相對減弱(圖3B3)。與模型組比，沙利度胺組CD68陽性表達(dá)相對較弱(圖3D2)，CD163陽性表達(dá)相對較強(圖3D3)。與陽性對照組相比，沙利度胺組CD68陽性表達(dá)相似，但CD163陽性表達(dá)較強。

A1、A2、A3、A4：正常組；B1、B2、B3、B4：模型組；C1、C2、C3、C4：陽性對照組；D1、D2、D3、D4：沙利度胺組。DAPI：代表細(xì)胞核顯色；Merge：代表同一視野下不同波長熒光激發(fā)下細(xì)胞核顯色、CD68陽性表達(dá)和CD163陽性表達(dá)三者融合圖。

3 討論

肝病在我國為常見病和多發(fā)病，主要包括乙型肝炎、丙型肝炎、酒精性脂肪性肝病、非酒精性脂肪性肝病。肝纖維化是慢性肝病發(fā)展到肝硬化的必經(jīng)階段，然而目前臨床尚無有效的抗肝纖維化藥物。肝纖維化是多種因素引起的慢性肝臟疾病損傷修復(fù)的病理過程，是嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題[8]。肝纖維化的發(fā)生機制復(fù)雜，其可能與免疫調(diào)節(jié)失衡有關(guān)。巨噬細(xì)胞作為機體固有免疫細(xì)胞的重要組成部分，參與肝臟的損傷及修復(fù)，在肝纖維化形成和逆轉(zhuǎn)中發(fā)揮重要作用[9]。沙利度胺作為一種潛在的免疫調(diào)節(jié)劑，其是否對肝纖維化的發(fā)生、發(fā)展具有改善作用尚不明確。復(fù)方甘草酸苷屬于甘草酸類，具有抗炎、免疫調(diào)節(jié)及抗肝纖維化等作用[10]，臨床主要用于治療慢性肝病，改善肝損傷。本研究以復(fù)方甘草酸苷為對照，觀察沙利度胺對肝纖維化模型小鼠的影響，旨在為沙利度胺應(yīng)用于肝纖維化的臨床治療提供參考。

本研究中肝組織病理學(xué)觀察結(jié)果顯示，正常組小鼠肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，排列規(guī)則，肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，肝組織無明顯膠原纖維增生；而模型組小鼠肝組織匯管區(qū)與門靜脈周圍肝細(xì)胞大量空泡樣壞死，排列紊亂，肝小葉結(jié)構(gòu)不完整，匯管區(qū)門靜脈與中央靜脈周圍大量膠原纖維增生，且有少量橋接形成，表明模型組小鼠出現(xiàn)了肝纖維化的癥狀，小鼠肝纖維化模型建立成功；陽性對照組和沙利度胺組小鼠肝組織匯管區(qū)與門靜脈周圍肝細(xì)胞有少量空泡樣壞死，局部匯管區(qū)和中央靜脈周圍有少量膠原纖維增生，肝細(xì)胞排列基本規(guī)則，提示復(fù)方甘草酸苷和沙利度胺均可改善小鼠肝損傷程度，延緩小鼠肝纖維化的進程。

AST和ALT為反映肝細(xì)胞損傷的重要生物化學(xué)指標(biāo)，肝損傷時，肝細(xì)胞中AST和ALT被釋放到血液中，通常表現(xiàn)為血液中AST和ALT水平急劇升高[11]。陳江明等[12]研究發(fā)現(xiàn)，沙利度胺能夠改善地中海貧血導(dǎo)致的肝損傷。本研究結(jié)果顯示，與正常組相比較，模型組、陽性對照組及沙利度胺組小鼠血清ALT、AST升高，表明小鼠已發(fā)生顯著的肝損傷；而與模型組比較，陽性對照組及沙利度胺組小鼠血清ALT、AST水平顯著降低，表明給予復(fù)方甘草酸苷和沙利度胺均可減輕小鼠肝損傷程度；沙利度胺組小鼠血清ALT、AST水平與陽性對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，提示沙利度胺與復(fù)方甘草酸苷改善肝纖維化小鼠肝損傷的效果相當(dāng)。

炎癥反應(yīng)在肝纖維化中起著至關(guān)重要的作用。研究發(fā)現(xiàn)，肝臟庫普弗細(xì)胞在肝損傷期間會募集中性粒細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞，并釋放促炎因子如TNF-α等，同時刺激肝星狀細(xì)胞的纖維化活性[13]；李德忠等[14]研究發(fā)現(xiàn)，肝纖維化患者肝Ⅳ型膠原-C水平與TNF-α水平呈正相關(guān)；冼觀秀等[15]也發(fā)現(xiàn)，乙肝肝硬化患者血清中TNF-α水平與肝纖維化指標(biāo)Ⅳ型膠原-C呈正相關(guān)；因此，TNF-α等促炎因子作為肝纖維化指標(biāo)具有較高的價值。本研究結(jié)果顯示，與正常組相比較，模型組小鼠肝組織中TNF-α水平顯著升高；與模型組比較，陽性對照組和沙利度胺組小鼠肝組織TNF-α水平顯著降低，且沙利度胺組小鼠肝組織TNF-α水平與陽性對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義；本研究結(jié)果表明，沙利度胺與復(fù)方甘草酸苷均能夠顯著降低肝組織中TNF-α水平，二者抗小鼠肝纖維化的作用效果相當(dāng)。

免疫調(diào)節(jié)中巨噬細(xì)胞過度極化引起的促炎因子釋放和組織修復(fù)能力紊亂是導(dǎo)致肝纖維化的重要因素[16-17]，恰當(dāng)干預(yù)巨噬細(xì)胞極化方向有助于延緩肝內(nèi)炎癥及纖維化的發(fā)生、發(fā)展[18-19]。巨噬細(xì)胞可極化為2種類型，即經(jīng)典活化的M1型和選擇性活化的M2型。M1型主要介導(dǎo)促炎作用，可分泌大量的TNF-α，促進肝纖維化進展；M2型主要分泌抑炎因子，表達(dá)組織修復(fù)相關(guān)因子等功能，發(fā)揮抗肝纖維化作用[20-21]，因此，M1型和M2型可作為探究肝纖維化發(fā)生、發(fā)展機制的相關(guān)因子。研究表明，CD68和CD163可分別作為M1型和M2型巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志物[22-23]，CD68是一種細(xì)胞質(zhì)糖蛋白，是巨噬細(xì)胞最可靠的標(biāo)志物；CD163是一種Ⅰ型膜蛋白，幾乎表達(dá)于所有組織的單核巨噬細(xì)胞。麥維利等[18]研究發(fā)現(xiàn)，在急性肝損傷中抑制M1型巨噬細(xì)胞極化能夠發(fā)揮抗炎作用；GUO等[19]研究發(fā)現(xiàn)，限制巨噬細(xì)胞向M2型極化可促進二甲基亞硝胺誘導(dǎo)的肝纖維化的發(fā)生；許大勇等[24]報道，調(diào)控巨噬細(xì)胞向M2型極化能夠抑制脊髓損傷造成的炎癥反應(yīng)。因此，本研究分別以M1型巨噬細(xì)胞的標(biāo)志物CD68和M2型巨噬細(xì)胞的標(biāo)志物CD163陽性表達(dá)強度來評估M1和M2型巨噬細(xì)胞的極化程度，通過免疫熒光雙染色在同一視野下觀察CD68和CD163陽性表達(dá)強度，進而探究沙利度胺抗肝纖維化的可能機制。本研究結(jié)果顯示，正常組小鼠肝組織中存在CD68和CD163陽性表達(dá)；相對于正常組小鼠，模型組小鼠肝組織中CD68呈強陽性表達(dá)，CD163陽性表達(dá)則較弱，表明模型組中巨噬細(xì)胞向M1型極化程度相對增多，向M2型極化程度相對減少；與模型組比較，沙利度胺組小鼠肝組織CD68陽性表達(dá)相對較弱，CD163陽性表達(dá)相對較強，表明沙利度胺干預(yù)后巨噬細(xì)胞向M1型極化程度相對降低，向M2型極化程度相對增多；陽性對照組和沙利度胺組小鼠肝組織中CD163和CD68陽性表達(dá)趨勢不一致，可能原因是二者對巨噬細(xì)胞的影響機制不一致，提示沙利度胺抗肝纖維化的機制可能是沙利度胺能夠促進巨噬細(xì)胞向M2型方向極化且抑制向M1型方向極化，這與文獻(xiàn)報道的抗肝纖維化機制一致[18-19，23]。本研究對CD68和CD163蛋白表達(dá)只進行了定性分析，而對其定量分析以及沙利度胺是否通過經(jīng)典通路調(diào)控巨噬細(xì)胞的表型和功能改變從而抑制肝纖維化、改善肝損傷，還有待后續(xù)深入探究。

綜上所述，沙利度胺可有效改善CCl4誘導(dǎo)的小鼠肝纖維化，顯著改善小鼠的肝損傷，其作用機制可能與影響巨噬細(xì)胞極化有關(guān)。