林玉惠 陳偉民 袁如英 黃敘吟 劉麗強(qiáng)

摘 要：本文通過采用自主研發(fā)的黃曲霉毒素B1膠體金快速測試卡，結(jié)合精密儀器、精密試紙等精確定量檢測，強(qiáng)化集成創(chuàng)新，研發(fā)快速檢測和非定向篩查技術(shù)及產(chǎn)品，有效開展產(chǎn)品生產(chǎn)過程中關(guān)鍵控制點(diǎn)的黃曲霉毒素B1（真菌毒素）的檢測和監(jiān)控的驗(yàn)證，為糧油食品生產(chǎn)安全的檢測提供精確裝備，建立高效質(zhì)量監(jiān)控體系，驗(yàn)證可取代傳統(tǒng)檢測方法確保食品生產(chǎn)過程的質(zhì)量。

關(guān)鍵詞：黃曲霉毒素B1膠體金快速測試;關(guān)鍵控制點(diǎn);驗(yàn)證方法

黃曲霉毒素對人類和動物的健康有一定的毒害作用，真菌毒素的毒性最強(qiáng)，嚴(yán)重可致癌，甚至致死，危害巨大[1-2]。

糧油食品是基礎(chǔ)食品原料，是生活中的主要食品。這類食品是淀粉、油脂含量較多的物質(zhì)，易被黃曲霉、寄生曲霉等產(chǎn)生的衍生物黃曲霉毒素污染[3]，被污染的農(nóng)作物可將真菌毒素傳遞到食品中，具有較大食品安全隱患，對居民身體健康造成嚴(yán)重威脅[4-5]。超靈敏真菌毒素快檢法的應(yīng)用有利于建立高效的產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)控體系，對提高產(chǎn)品的安全性具有較大的作用。

常用的真菌毒素檢測方法主要有液相色譜-質(zhì)譜法、熒光光度法、同位素稀釋液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、高效液相色譜-柱前衍生法、高效液相色譜-柱后衍生法、高效液酶聯(lián)免疫吸附篩查法、薄層色譜法、高效液相色譜法、免疫親和層析凈化液相色譜法、試劑盒法、速測卡法等[1]，其中速測卡法具有靈敏性、快速性、特異性強(qiáng)等優(yōu)勢，真菌毒素快速檢測具有廣闊的發(fā)展前景。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 材料

大米、燕麥、花生

1.1.2 主要試劑

70%甲醇水溶液;AFB1膠體金快速定量檢測卡;膠體金快速定量檢測稀釋液;甲醇（CH3OH）：色譜純;乙腈（CH3CN）：色譜純;正己烷（C6H14）：色譜純;三氟乙酸（CF3COOH）。

1.1.3 主要儀器設(shè)備

分析天平（0.001 g和0.000 1 g）;超聲波振蕩器;磁力攪拌器;離心機(jī)（轉(zhuǎn)速6 000 r/min）;定時(shí)計(jì)時(shí)器;孵育器;熒光免疫分析儀;高速粉碎機(jī);微波烘干機(jī);液相色譜儀：配熒光檢測器;氮吹儀;電熱恒溫箱;pH計(jì)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 檢測驗(yàn)證對象

參考標(biāo)準(zhǔn)《糧食衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的分析方法》（GB/T 5009.36—

2003），確定本次驗(yàn)證糧食制品為大米、燕麥和花生在各自生產(chǎn)工藝過程中不同質(zhì)量關(guān)鍵控制點(diǎn)取樣進(jìn)行檢測驗(yàn)證，驗(yàn)證的真菌毒素為黃曲霉毒素B1。驗(yàn)證方法為常規(guī)普通檢測方法用《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中黃曲霉毒素B族和G族的測定》（GB 5009.22—2016）中的高效液相色譜-柱前衍生法和快速檢測方法用膠體金快速測試卡法，采用自主研發(fā)的黃曲霉毒素B1膠體金快速定量檢測卡（定量范圍為2.5～50 μg/kg）[2]。

1.2.2 樣品的制備

汕頭市天悅科技創(chuàng)新研究院有限公司根據(jù)大米、燕麥和花生等各種物料生產(chǎn)工藝過程中各關(guān)鍵控制點(diǎn)進(jìn)行取樣。

1.2.3 各物料的生產(chǎn)工藝流程及質(zhì)量安全關(guān)鍵控制點(diǎn)設(shè)定

（1）大米制作成復(fù)水米飯工藝流程及質(zhì)量安全控制點(diǎn)設(shè)定。工藝流程為：大米→清洗→蒸煮→烘干→成品（復(fù)水米飯）。質(zhì)量安全關(guān)鍵控制點(diǎn)為：①原料大米;②蒸煮后米飯;③成品復(fù)水米飯。

（2）燕麥的生產(chǎn)工藝流程。燕麥→清洗→蒸煮→壓片→烘干→成品（燕麥片）。質(zhì)量安全關(guān)鍵控制點(diǎn)為：①原料燕麥;②蒸煮后壓片燕麥;③成品燕麥片。

（3）花生制作花生油?；ㄉ逑础摳伞鷫赫ァ善酚停ɑㄉ停┖突ㄉ?/p>

質(zhì)量安全關(guān)鍵控制點(diǎn)為：①原料花生;②花生油;③花生渣。

2 結(jié)果與分析

2.1 復(fù)水米飯生產(chǎn)過程質(zhì)量檢測

由表1可知，大米生產(chǎn)過程關(guān)鍵控制點(diǎn)檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。根據(jù)同一關(guān)鍵控制點(diǎn)2種不同檢測方法的檢測結(jié)果，每個(gè)關(guān)鍵控制點(diǎn)共進(jìn)行3批次有效的檢測，總共出現(xiàn)誤判次數(shù)為0次，故判定準(zhǔn)確率為100%。

2.2 燕麥片生產(chǎn)過程質(zhì)量檢測

由表2可得，燕麥生產(chǎn)過程關(guān)鍵控制點(diǎn)檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。根據(jù)同一關(guān)鍵控制點(diǎn)2種不同檢測方法的檢測結(jié)果，每個(gè)關(guān)鍵控制點(diǎn)共進(jìn)行3批次有效的檢測，共出現(xiàn)誤判次數(shù)為0次，故判定準(zhǔn)確率為100%。

2.3 花生油生產(chǎn)過程質(zhì)量檢測結(jié)果

由表3可得花生生產(chǎn)過程關(guān)鍵控制點(diǎn)檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。根據(jù)同一關(guān)鍵控制點(diǎn)2種不同檢測方法的檢測結(jié)果，每個(gè)關(guān)鍵控制點(diǎn)共進(jìn)行3批次有效的檢測，共出現(xiàn)誤判次數(shù)為0次，故判定準(zhǔn)確率為100%。

2.4 穩(wěn)定性

根據(jù)上述檢測結(jié)果，按照超過限量標(biāo)準(zhǔn)判定為陽性的原則，3種不同產(chǎn)品批次在各關(guān)鍵控制點(diǎn)的測定結(jié)果可見檢測對比正確、穩(wěn)定。

2.5 快捷性

以上的檢測過程中，每次快檢檢測時(shí)間都在15 min以內(nèi)，測定結(jié)果快速、穩(wěn)定。

3 結(jié)論

本研究通過采用自主研發(fā)的黃曲霉毒素B1膠體金快速測試卡，同時(shí)結(jié)合精密儀器、精密試紙等的精確定量檢測，強(qiáng)化集成創(chuàng)新，研發(fā)快速檢測和非定向篩查技術(shù)及產(chǎn)品，有效開展產(chǎn)品生產(chǎn)過程中關(guān)鍵控制點(diǎn)的黃曲霉毒素B1（真菌毒素）的檢測和監(jiān)控的驗(yàn)證，為糧油食品生產(chǎn)安全的檢測提供精確裝備，建立高效質(zhì)量監(jiān)控體系，驗(yàn)證可以取代傳統(tǒng)檢測方法確保食品生產(chǎn)過程的質(zhì)量。黃曲霉毒素B1膠體金快速測試卡，具有快速測定和操作簡單的優(yōu)點(diǎn)，在生產(chǎn)過程中能大大地提高檢測效率，可快速有效開展生產(chǎn)過程及產(chǎn)品中黃曲霉毒素B1的檢測和監(jiān)控，確保食品生產(chǎn)過程質(zhì)量安全，具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和社會價(jià)值。

參考文獻(xiàn)

[1]劉峰良，趙志輝，謝晶.谷物中真菌毒素的研究進(jìn)展[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，39（19）：115-119.

[2]王鐿睿，糧食中常見的真菌毒素及其限量標(biāo)準(zhǔn)、檢測方法[J].山西農(nóng)經(jīng)，2019（6）：119-121.

[3]趙麗杰，高星，吳麗華.糧食及其制品中真菌毒素限量標(biāo)準(zhǔn)及檢測方法概述[J].現(xiàn)代面粉工業(yè)，2019，33（3）：26-28.

[4]王海濤.糧食中真菌毒素快速定量檢測方法應(yīng)用研究[J].飲食科學(xué)，2017（8）：15.

[5]王文珺，桑華春.真菌毒素免疫檢測技術(shù)的研究進(jìn)展[J].食品安全導(dǎo)刊，2017（16）：24-26.

基金項(xiàng)目：2020年廣東科技專項(xiàng)資金項(xiàng)目“糧油食品中真菌毒素的快速檢測關(guān)鍵技術(shù)研究”（200119165873020（汕府科〔2020〕年53號文件-103））。

作者簡介：林玉惠（1974—），女，漢族，廣東汕頭人，本科，高級食品工程師。研究方向：輕工先進(jìn)技術(shù)研究及成果轉(zhuǎn)化。

陳偉民（1973—），男，漢族，廣東汕頭人，本科，助理工程師。研究方向：食品研究及開發(fā)。

袁如英（1980—）女，漢族，廣東汕頭人，本科，工程師。研究方向：高新技術(shù)及產(chǎn)業(yè)化。