王雪艷，漫貴貴，朱倩鋒，趙文強(qiáng)，柴君臣，姚鋒鋒，何玉琴，趙 禹

（甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院，甘肅 蘭州 730070）

藏羊，又稱藏系綿羊，屬我國(guó)三大原始綿羊品種之一[1]。主要生活在青藏高原地區(qū)，甘肅和青海是其主要棲息地[2]。藏羊種類繁多，依據(jù)生態(tài)環(huán)境、生產(chǎn)特性和經(jīng)濟(jì)效益，可將其分為高原型、山谷型和歐拉型3大類。在甘肅，藏羊的主體為高原型，占比達(dá)90%以上，主要分布在高寒牧區(qū)[3]。甘加藏羊是藏羊的一個(gè)優(yōu)良地方品種，也是中國(guó)國(guó)家地理標(biāo)志產(chǎn)品，因其主產(chǎn)區(qū)位于甘肅省甘南州夏河縣甘加鎮(zhèn)而命名。由于甘加藏羊主要分布在高寒牧區(qū)，采樣較困難，所以目前關(guān)于甘加藏羊的研究資料非常有限，而對(duì)其各器官組織結(jié)構(gòu)的研究尚未見報(bào)道。因此，本文擬通過石蠟切片技術(shù)對(duì)甘加藏羊肝臟組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)進(jìn)行研究。

肝臟是動(dòng)物體內(nèi)新陳代謝的重要器官，它含有多種與生物轉(zhuǎn)化作用相關(guān)的酶類，有利于動(dòng)物體內(nèi)外的某些代謝產(chǎn)物、毒物和藥物等非營(yíng)養(yǎng)性物質(zhì)從腎臟和膽道排出，在體內(nèi)起著去除毒素、儲(chǔ)存糖原、分泌膽汁、合成蛋白質(zhì)等作用。了解甘加藏羊肝臟細(xì)胞組織的結(jié)構(gòu)，有助于對(duì)反芻動(dòng)物肝臟生理功能進(jìn)行研究，對(duì)進(jìn)一步提高甘加藏羊的養(yǎng)殖水平具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

2020年5月在甘肅省甘南州夏河縣甘加鎮(zhèn)屠宰場(chǎng)（平均海拔4 100 m）通過齒齡鑒別法隨機(jī)選擇年齡在2～3歲、營(yíng)養(yǎng)良好的未孕雌性成年甘加藏羊4只，剖殺試驗(yàn)羊，取其肝臟用于試驗(yàn)材料。

1.2 主要儀器設(shè)備

光學(xué)顯微鏡、組織包埋機(jī)、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（DHG-9140型）、精密輪轉(zhuǎn)半自動(dòng)螺旋切片機(jī)、攤片機(jī)、烤片機(jī)、圖像分析軟件等。

1.3 主要試劑

蘇木精染液、伊紅染液（上海鼎國(guó)生物技術(shù)有限公司）；鹽酸酒精[4]（湖南艾佳生物科技股份有限公司）；酒精、二甲苯、中性樹膠（均購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司）。

1.4 肝臟形態(tài)學(xué)測(cè)量

剖殺試驗(yàn)羊取出肝臟后，大體解剖觀察肝臟外部形態(tài)特點(diǎn)并對(duì)肝臟進(jìn)行測(cè)量。

1.5 肝臟組織石蠟切片制備及觀察

將選取的甘加藏羊肝臟進(jìn)行解剖，每只羊選肝實(shí)質(zhì)各切取兩塊約1.0 cm×1.0 cm×0.5 cm的組織塊，并編號(hào)進(jìn)行標(biāo)記，然后將所有組織塊迅速投入4%多聚甲醛溶液中固定。取固定好的組織數(shù)塊，使用常規(guī)梯度酒精脫水后用雙刃刀片切成厚1 cm、寬0.3～0.5 cm的薄片，8片左右，用紗布包裹薄片，并放入有紗布封口的燒杯中進(jìn)行洗滌。經(jīng)脫水透明、組織浸蠟、包埋等步驟制作組織蠟塊，待蠟塊凝固，修正蠟塊，切片（注意刀的傾角不宜過大，也不宜過小，一般使切片刀的刀口與石蠟的平面保持在10～15°為宜[5]），貼片以及烤片。將切片脫蠟染色，脫水透明，最后封片，在光學(xué)顯微鏡下觀察。

1.6 數(shù)據(jù)分析

用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差來表示肝臟的形態(tài)學(xué)測(cè)量結(jié)果，用SPSS22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，P＜0.05和P＜0.01分別表示統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著和極顯著，用one-way ANOVA或Student’s t-test比較組間均值的差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 肝臟形態(tài)學(xué)測(cè)量結(jié)果

甘加藏羊肝臟外觀呈紅褐色，質(zhì)軟而脆。肝臟形態(tài)呈不規(guī)則楔形，右側(cè)鈍厚而左側(cè)偏窄，上面突起渾圓，與膈肌接觸，下面較扁平，與胃、十二指腸、膽囊和結(jié)腸相鄰。肝臟有一定的活動(dòng)度，可隨體位的改變和呼吸而上下移動(dòng)。按解剖學(xué)結(jié)構(gòu)主要分四葉，分別是左葉、右葉、尾葉和方葉（見圖1）。

圖1 甘加藏羊肝臟形態(tài)

肝臟四葉之間界限明顯，大小不等。右葉（長(zhǎng)12.3 cm、寬13.6 cm）整體比左葉（長(zhǎng)10.7 cm、寬11.3 cm）大，對(duì)每個(gè)小葉進(jìn)行測(cè)量，結(jié)果見表1。

表1 甘加藏羊肝臟形態(tài)測(cè)量結(jié)果

2.2 肝臟組織形態(tài)觀察

甘加藏羊肝臟組織結(jié)構(gòu)由肝小葉和門管區(qū)構(gòu)成（見圖2A）。肝小葉包含肝細(xì)胞索（肝板）、中央靜脈、膽小管和肝竇，是肝臟的基本結(jié)構(gòu)和功能單位（見圖2B）。肝小葉數(shù)目較多、體積偏小、呈不規(guī)則的多邊形，小葉間結(jié)締組織不發(fā)達(dá)，分界不明顯。其中肝板是由肝細(xì)胞呈行排列成的不規(guī)則的、相互連接的板狀結(jié)構(gòu)。肝細(xì)胞界限清晰，呈多邊形，規(guī)則地排列成肝細(xì)胞索，細(xì)胞核較大且核仁明顯。肝血竇位于肝板之間，大小不等，細(xì)胞核扁平，凸向竇腔。此外，在肝血竇之間還散在枯否氏細(xì)胞（見圖2C），其胞體較大，形狀不規(guī)則，胞核大而圓。小葉中心為中央靜脈，其管壁不明顯，只由一層內(nèi)皮細(xì)胞和少量的結(jié)締組織構(gòu)成。

門管區(qū)（見圖2D）由小葉間動(dòng)脈、小葉間靜脈和小葉間膽管3種伴行的管道形成的結(jié)締組織構(gòu)成。小葉間動(dòng)脈管腔較小，管壁較厚。小葉間靜脈管腔相對(duì)較大，管壁較薄。小葉間膽管的管腔狹小，呈圓形，由于細(xì)胞核大且著色深，故呈藍(lán)色外觀。

圖2 甘加藏羊肝臟組織形態(tài)結(jié)構(gòu)

3 討論

肝臟存在于所有脊椎動(dòng)物中，通常是動(dòng)物體內(nèi)最大的腺體，其功能很多，如參與多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的代謝和儲(chǔ)存、分泌膽汁、解毒、造血和調(diào)節(jié)激素等[6]，同時(shí)也是動(dòng)物檢疫中常見的病變組織器官。肝臟的形式在不同物種中有較大差異，在很大程度上取決于周圍器官的形狀和排列。在大多數(shù)物種中，肝臟可分為左葉和右葉。

甘加藏羊肝臟組織比較發(fā)達(dá)，其表面覆蓋漿膜，延伸入肝實(shí)質(zhì)的結(jié)締組織將肝臟分為若干個(gè)肝小葉。肝小葉結(jié)構(gòu)中的肝板、肝竇和膽小管以中央靜脈為中心呈輻射分布[7]。中央靜脈位于肝小葉中央，管壁為單層扁平上皮，因與周圍的肝血竇相通而管壁不完整；肝板由肝細(xì)胞單層排列構(gòu)成，肝細(xì)胞呈多邊形，核大而圓，位于細(xì)胞中央，有的可見雙核；肝血竇竇壁緊貼肝細(xì)胞索，由內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成，細(xì)胞核扁圓形，染色深[8]。門管區(qū)的小葉間靜脈屬于門靜脈分支，管腔較大而不規(guī)則，內(nèi)皮外有散在平滑肌纖維分布；小葉間動(dòng)脈屬肝動(dòng)脈分支，內(nèi)皮外可見環(huán)形平滑肌層；小葉間膽管屬肝管分支，管壁為單層立方上皮，細(xì)胞排列整齊，細(xì)胞質(zhì)染色淺，細(xì)胞核呈圓形。甘加藏羊肝小葉結(jié)締組織不發(fā)達(dá)，肝小葉區(qū)分不明顯，而門管區(qū)較明顯。不同家畜的肝小葉間結(jié)締組織發(fā)達(dá)程度因種類不同而存在差異，豬、貓和駱駝的小葉間結(jié)締組織特別發(fā)達(dá)，肝小葉輪廓清晰，而其他動(dòng)物小葉間結(jié)締組織不發(fā)達(dá)，肝小葉分界不明顯[9]。

前人對(duì)動(dòng)物肝臟的研究共揭示了3種肝細(xì)胞排列方式，即肝細(xì)胞呈團(tuán)塊狀聚集排列、單層或兩層肝細(xì)胞呈索狀結(jié)構(gòu)排列。一般來說，肝細(xì)胞索的細(xì)胞組成和排列方式的差異與動(dòng)物種類有一定聯(lián)系，如哺乳動(dòng)物的肝細(xì)胞索往往是由單層細(xì)胞排列構(gòu)成，而鳥類的肝細(xì)胞索則由兩層細(xì)胞排列構(gòu)成。本研究中的甘加藏羊肝細(xì)胞符合上述動(dòng)物肝細(xì)胞的排列規(guī)律，為單排索狀結(jié)構(gòu)。肝臟血竇內(nèi)血液的充盈程度會(huì)使肝細(xì)胞索產(chǎn)生一定形變。有研究表明，哺乳動(dòng)物和鳥類的肝細(xì)胞索結(jié)構(gòu)差異可能和肝臟功能密切相關(guān)[10]。哺乳動(dòng)物在消化期可通過神經(jīng)和體液等途徑刺激膽汁的分泌，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收，該過程中大量消化液的分泌需要肝臟提供足夠的血液供給，血竇內(nèi)的血液不斷充盈，擠壓肝細(xì)胞使其更加趨向于單層排列。而鳥類對(duì)食物的消化主要依賴于嗉囊中的分泌液，對(duì)肝臟中的消化液依賴程度低，因此肝臟對(duì)血液的需求相對(duì)哺乳動(dòng)物較低，從而具有兩層細(xì)胞構(gòu)成的肝細(xì)胞索[10]，這體現(xiàn)出組織器官結(jié)構(gòu)與其發(fā)揮的生理功能密切相關(guān)。

本試驗(yàn)以甘加藏羊?yàn)檠芯繉?duì)象，對(duì)其肝臟細(xì)胞組織結(jié)構(gòu)與特征進(jìn)行了觀察和研究，揭示了甘加型藏羊在高寒牧區(qū)生長(zhǎng)環(huán)境下肝臟的組織結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，為將來肝臟中環(huán)境適應(yīng)性相關(guān)功能基因篩選以及優(yōu)良地方品種選育提供了組織學(xué)理論依據(jù)。