杜琛，陸穎，速雪麗，柏家果，張勝斌，吳雨殊，曲雅新，羅期方，張寧，陳櫻，韋祖樟，黃偉堅，歐陽康*

(1. 廣西大學動物科學技術(shù)學院，廣西 南寧 530005；2. 廣西農(nóng)墾永新畜牧集團西江有限公司，廣西 貴港 537104)

豬肺炎支原體(Mycoplasmahyopneumoniae, Mhp)是引起豬支原體肺炎(MPS)和相關(guān)豬呼吸系統(tǒng)疾病綜合征(PRDC)的病原體[1]。該病在寒冷季節(jié)多發(fā)，一年四季均可發(fā)生，育肥豬是其主要感染群體，且Mhp能以氣溶膠為載體實現(xiàn)遠距離的傳播[2]，這一特點大大增加了對Mhp進行防控的難度。由Mhp引起的疾病多以氣喘為主要癥狀，主要病理變化為肺部對稱性肉變，尖葉、心葉和膈葉前緣均會發(fā)生肉樣病變以及蝦肉樣病變[3]，組織學變化主要以細支氣管管腔和肺泡腔內(nèi)細胞浸潤為特征[4]。感染Mhp的豬通常表現(xiàn)為生長受阻、飼料轉(zhuǎn)化率降低，且豬場會出現(xiàn)連續(xù)不斷發(fā)病的現(xiàn)象。此外，該病原還能造成免疫缺陷，從而誘發(fā)豬群產(chǎn)生多種疾病[5]。

豬圓環(huán)病毒2型(Porcine circovirus, PCV2)是一種無囊膜的單股環(huán)狀負鏈DNA病毒[6]，與PCV1共同屬于豬圓環(huán)病毒[7]。PCV2可使豬產(chǎn)生包括生殖疾病、神經(jīng)系統(tǒng)病變、腸炎、壞死性肺炎等在內(nèi)的多種疾病[8]，同時還會對豬群造成免疫抑制，降低豬群的抵抗力，使豬群更易受到其他病原體的侵害。

Mhp和PCV2在世界各國廣泛流行，都能引起豬產(chǎn)生嚴重的免疫抑制現(xiàn)象[9, 10]，給養(yǎng)豬業(yè)造成嚴重的經(jīng)濟損失。而疫苗免疫則是防控這兩種病原最有效的方法之一，因此，本實驗通過測試A、B兩種Mhp疫苗和C、D、E、F四種PCV2疫苗不同組合對育肥豬所產(chǎn)生的不同效果，來為豬場篩選疫苗提供理論依據(jù)，為生豬養(yǎng)殖行業(yè)提供指導，同時為科學評判疫苗效果提供數(shù)據(jù)支持。

1 材料方法

1.1 材料

1.1.1實驗場地

目前，廣西地區(qū)的生豬養(yǎng)殖模式一般為養(yǎng)殖戶與公司之間合作生產(chǎn)的規(guī)?；B(yǎng)殖，公司對各個養(yǎng)殖戶的基礎設施、飼養(yǎng)管理以及環(huán)境衛(wèi)生等方面進行監(jiān)管，各個養(yǎng)殖戶間的養(yǎng)殖環(huán)境基本保持一致。

本研究對各個養(yǎng)殖戶的養(yǎng)殖環(huán)境、養(yǎng)殖經(jīng)驗以及養(yǎng)殖戶過往經(jīng)歷進行了調(diào)查和篩選，選出8個效益好、成績穩(wěn)定的養(yǎng)殖戶，且根據(jù)雙盲試驗的要求，未對養(yǎng)殖戶公開其所用疫苗的組合情況，保證除免疫不同疫苗外，其他條件一致。

1.1.2實驗動物

實驗用豬來自廣西某公司的兩個不同豬場，均為杜長大三元雜交商品肉豬。所選妊娠母豬的窩產(chǎn)活仔數(shù)在8頭以上，母豬胎次為2～6胎。然后篩選出初生重1.5 kg以上、21日齡斷奶體重達到6 kg以上健康仔豬作為實驗用豬。豬場一選用仔豬2 009頭，豬場二選用仔豬1 470頭。

1.1.3實驗疫苗

選用A、B兩種Mhp疫苗與C、D、E、F四種PCV2疫苗，詳細信息見表1。

表1 疫苗信息及免疫程序

1.2 方法

1.2.1實驗分組

實驗豬隨機分為8組，每組實驗豬280～600頭。挑選養(yǎng)殖成績較好且較穩(wěn)定的養(yǎng)殖戶，每個實驗組對應一個養(yǎng)殖戶。各組按廠家推薦的免疫程序進行免疫，其他疫苗的免疫保持不變，按公司免疫程序統(tǒng)一執(zhí)行。

表2 各組疫苗組合情況及進苗頭數(shù)對應表

1.2.2數(shù)據(jù)收集

記錄各組飼料消耗情況，計算得到料肉比(FCR)；稱取21日齡斷奶和200日齡屠宰時各實驗組的全群體重，并計算得出頭均日增重；記錄各組上市后所獲收益，計算得出頭均毛利；實驗結(jié)束(200日齡)后計算出每組平均每頭豬所耗藥費；每組隨機抽樣20頭豬，屠宰后進行肺部評分；記錄不同疫苗組合的上市率與上市合格率。實驗過程中嚴格做好數(shù)據(jù)記錄。

肺部評分系統(tǒng)采用Madec方法[11]，見表3。根據(jù)肺葉損傷面積比例劃分為5個等級，評分依次為0～4分。分別對肺部尖葉、心葉、膈葉和副葉七個肺葉進行評分，每個肺葉的得分之和為所檢豬只的肺部評分，每頭豬的最高評分為28分。

表3 肺部評分標準

1.2.3權(quán)重系數(shù)

根據(jù)行業(yè)專家意見，如表4設定評價參數(shù)并賦予不同參數(shù)特定的權(quán)重系數(shù)。針對本實驗的8組評價對象，每個參數(shù)排名第1位到第8位分別得分100、95、90、85、80、75、70、65，乘以各自所占系數(shù)，再相加得到各組評價對象的總分，以此作為最終的排名依據(jù)。

表4 參數(shù)與所占權(quán)重系數(shù)表

2 結(jié)果

2.1 各實驗組料肉比數(shù)據(jù)分析

對8個實驗組分別所消耗的飼料量與各個實驗組總的增重量進行統(tǒng)計，得出各組料肉比數(shù)據(jù)，結(jié)果見表5。由表中數(shù)據(jù)可發(fā)現(xiàn)，第1組和第2組料肉比最低，兩組實驗豬平均增重1 kg需要的飼料量分別為2.58 kg與2.57 kg，而第7組的實驗豬平均增重1 kg需要的飼料量為2.85 kg，明顯高于其他實驗組。

表5 各實驗組的料肉比數(shù)據(jù)統(tǒng)計

2.2 各實驗組頭均日增重數(shù)據(jù)分析

對8個實驗組21日齡斷奶和200日齡屠宰時的全群體重進行統(tǒng)計，得出各組頭均日增重數(shù)據(jù)，結(jié)果見表6。由表中數(shù)據(jù)可發(fā)現(xiàn)，第5組和第6組平均每天增重0.72kg，略高于其他組。第7組平均每天增重0.65kg，明顯低于其他組。

表6 各實驗組的頭均日增重數(shù)據(jù)統(tǒng)計

2.3 頭均毛利

對8個實驗組200日齡屠宰時所獲收益進行統(tǒng)計，得出各組頭均毛利數(shù)據(jù)，結(jié)果見表7。由表中數(shù)據(jù)可發(fā)現(xiàn)，第1組頭均毛利最高，為243.78元/頭；第3、5、6組頭均毛利分別為238.12元/頭、228.71元/頭和227.91元/頭，略低于第1組。第7組每頭豬的毛利僅為114.09元，與其他實驗組相比，結(jié)果較差。

表7 各實驗組的頭均毛利數(shù)據(jù)統(tǒng)計

2.4 肺部評分

8個實驗組200日齡屠宰時每組隨機抽樣20頭，屠宰后進行肺部評分，結(jié)果見表8。第1、2、3組肺部評分平均值分別為2.07分、2.29分和2.56分，處于較低水平；第3、4、5、8組稍高，第7組的肺部評分為6.35分，在所有實驗組中為最高分。

表8 各實驗組肺部評分分析結(jié)果

2.5 上市率、上市正品率和頭均藥費

實驗對不同疫苗組合的上市率以及上市正品率進行了統(tǒng)計與分析，結(jié)果見表9。由表中數(shù)據(jù)可以看出，第5組、第6組和第8組上市率較高，分別為97.86%、96.79%和95.83%；第4組的上市率為89.98%，明顯低于其他組。而上市正品率最高的是第1組和第8組，都為100%，最低的是第2組和第7組，為98.05%和98.27。

對8個實驗組200日齡屠宰時每組平均每頭豬所耗藥費進行統(tǒng)計和分析，結(jié)果見表9。由表中數(shù)據(jù)可以看出，第1組和第2組的頭均藥費最低，分別為51.42元和51.80元，最高的為第6組和第8組，分別為81.71元和79.84元。

表9 各組上市率、上市正品率和頭均藥費統(tǒng)計表

2.6 實驗數(shù)據(jù)排名

第1—4組免疫的是Mhp疫苗A，第5—8組為Mhp疫苗B。本次研究結(jié)果顯示免疫A疫苗的肉豬在料肉比、頭均藥費、肺部評分、頭均毛利等方面分值均優(yōu)于免疫B疫苗的肉豬，免疫A疫苗的肉豬頭均日增重較均衡，但上市率不如免疫B疫苗的肉豬，總體來說，A疫苗的免疫效果優(yōu)于B疫苗。1組與5組，2組與6組，3組與7組，4組與8組分別免疫PCV2疫苗C、D、E和F，前4組中1組成績最好，后4組中第5組成績最好，說明PCV2疫苗C的免疫效果優(yōu)于其他PCV2疫苗。

綜上所述，本次實驗不同疫苗組合免疫效果以第1組Mhp疫苗A和PCV2疫苗C組合為最佳，在全部8個實驗組中，該組頭均日增重排第4位，料肉比排第2位，上市率排第5位，上市正品率、肺部評分、頭均藥費以及頭均毛利均排名第1位，最后的系數(shù)總分也是排名第1(見表10)。

表10 各組最終排名

3 討論

目前，Mhp和PCV2廣泛存在于全球范圍內(nèi)，并給世界各國養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。國內(nèi)各地豬場均有Mhp的流行，而感染過Mhp的豬場，也很難對病原進行徹底地清除[12]。另一方面，PCV2近年來在我國的流行情況也是愈發(fā)嚴重。兩種病原均能對豬群造成一定程度上的免疫抑制，而且經(jīng)常會在同一豬群中發(fā)生交叉感染，臨床癥狀又極為相似，這就大大加重了養(yǎng)豬業(yè)對其進行防控的負擔，也對預防兩種病原的疫苗提出了市場需求。

市場上針對Mhp的疫苗多種多樣，包括滅活疫苗、減毒活疫苗。但Fisch Andressa[13]等人研究發(fā)現(xiàn)，這一類常規(guī)疫苗對刺激豬群產(chǎn)生免疫應答的作用不大，接種后豬群對抗Mhp的免疫應答能力并沒有顯著提升。而Moore[14]等人在進行動物實驗后發(fā)現(xiàn)，表達文庫免疫(expression library immunization，ELI)具有良好的免疫效果，通過優(yōu)化表達文庫的篩選方法，可進一步促進ELI在豬支原體肺炎中的應用，為Mhp疫苗的發(fā)展提供更廣泛的思路。

目前，對PCV2疫苗的開發(fā)與研究，已取得了顯著的成果。趙曉云[15]等人利用大腸桿菌表達PCV2 Cap蛋白生產(chǎn)的病毒樣顆粒(virus-like particles，VLP)疫苗，實現(xiàn)了PCV2 Cap蛋白在大腸桿菌中的高效可溶性表達，重組的Cap (r Cap)蛋白在體外進行自我組裝，形成的VLP具有良好的免疫原性。另外，VLP具有類似于天然病毒的抗原性和免疫原性，能夠進行自我組裝[16]，可以作為良好的疫苗候選之一。Xiaochen Guo[17]等人研究發(fā)現(xiàn)復合生物佐劑可大大增強PCV2疫苗的免疫效果。因此，在疫苗接種時，為達到理想的免疫效果，可適當添加合適的復合生物佐劑。

綜合我國養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀以及Mhp和PCV2經(jīng)常在同一豬場發(fā)生交叉感染的實際情況，有研究人員利用桿狀病毒表達系統(tǒng)成功構(gòu)建了針對Mhp與PCV2兩種病原的基因工程疫苗[18]，并在小鼠與仔豬體內(nèi)進行免疫效果的評估，結(jié)果顯示，重組疫苗與混合商業(yè)疫苗的免疫效果相當。但同時針對兩種病原開發(fā)的基因工程疫苗技術(shù)尚不成熟，尚未惠及到實踐生產(chǎn)中。因此，本研究選用混合的商業(yè)疫苗進行接種，此法在實踐生產(chǎn)中已有較為穩(wěn)固的平臺，且在大量接種時往往能達到理想的效果。

研究采用上市率與上市正品率作為評估豬群整體狀況的指標之一，其中上市率表示豬群銷售數(shù)量占進苗數(shù)量的比例，體現(xiàn)出死亡豬的數(shù)量；上市正品率表示銷售的豬群數(shù)量中，符合上市標準的豬群占總銷售豬群的比例，體現(xiàn)出淘汰豬的數(shù)量。國內(nèi)市場針對Mhp以及PCV2兩種病原的商用疫苗種類繁多，這就使得選擇合適的疫苗、建立有效的免疫程序顯得尤為重要。有相關(guān)報道指出[19]，與未進行疫苗接種的豬群相比，接種疫苗后的豬群日增重以及飼料轉(zhuǎn)化率都有顯著提高，且免疫的豬群育肥上市時間顯著縮短，臨床癥狀、肺部病變減輕，藥物治療費用降低，豬場經(jīng)濟效益也明顯提高[4]。而在本研究中，藥費主要包括豬場日常備用藥物，包括阿莫西林、維生素C、雙黃連、氨基比林、氟苯尼考、頭孢噻吩等。采用不同組合的疫苗對豬群進行免疫接種，豬群的日增重與飼料轉(zhuǎn)化率也有明顯不同，提示選用合適的疫苗組合對豬群進行免疫同樣可以提高產(chǎn)業(yè)利潤。

相較于進行過免疫的豬群，未免疫的豬群因受病毒以及支原體的侵害，健康狀況不佳，豬群體重會受到影響。有研究[20-22]同時采用抗體檢測與觀察豬群重量變化等多個指標對疫苗的免疫效果進行評估，結(jié)果顯示，進行免疫的動物比未免疫動物日增重要高。在臨床上兩種病原體對豬的主要病理變化部位均在肺部，因此，采用肺部評分系統(tǒng)，同樣可以對豬群的感染狀況進行評估。綜上所述，通過對豬群總增重、平均日增重及肺部評分等指標的統(tǒng)計，間接地反映出不同疫苗組合之間免疫效果的差異，并結(jié)合頭均藥費、頭均毛利等相關(guān)指標，直觀地反映出豬群免疫后產(chǎn)生的經(jīng)濟效益有所差別，最終得出較為優(yōu)質(zhì)的疫苗組合方案。在臨床生產(chǎn)實踐中，由于一些限制性條件，如果設置對照組，那么對照組將不能進行Mhp和PCV2疫苗的免疫，在兩種病毒流行的大環(huán)境下，會帶來疫病風險，造成一定的經(jīng)濟損失。

總之，本研究通過對Mhp和PCV2兩種病原不同的疫苗進行組合，以廣西本地生豬養(yǎng)殖企業(yè)為基礎，得到了不同疫苗組合在生產(chǎn)過程中作用效果的高低，結(jié)果顯示，第1組Mhp疫苗A和PCV2疫苗C的組合較其他組合有明顯優(yōu)勢，可指導豬場在制定免疫程序時有更加具體的方向，同時也為豬場篩選疫苗提供一定的參考依據(jù)，為生豬產(chǎn)業(yè)的生產(chǎn)實踐提供了一定的理論數(shù)據(jù)與技術(shù)支持。